一種gc-ei-ms測定果蔬中硅噻菌胺殘留的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種GC-EI-MS測定果蔬中娃嚷菌胺殘留的方法，更具體地說是采用氣 相色譜-電子轟擊離子源-質譜(GC-EI-MS)定性定量測定蔬菜和水果中殘留的娃嚷菌胺含 量的方法，屬于農藥殘留量的測定技術領域。
【背景技術】
[0002] 娃嚷菌胺(通用名：Silthiofam，試驗代號:Mon65500，商品名稱:Latitude，其他名 稱：Silthio地am),是由孟山都公司開發的酷胺類殺菌劑。主要用作種子處理，防治谷物上 的全蝕病。化學名稱:N-締丙基-4,5-二甲基-2-(立甲基娃基)嚷吩-3-甲酯胺，英文名稱:N- al lyl-4,5-dimethy 1-2-( trimethylsilyl) thiophene-3-carboxamide，CAS登錄號： 175217-20-6，化學結構式為：
外觀為白色晶狀粉末;烙點：86.1~88.3°C ;沸點>280°C ;蒸汽壓8.1 X 10ImPa(20°C) 分配系數：Kowlo評=3.72 (20 °C ); Henry常數5.4 X 10-1 化 m3mol-l;溶解度：水39.9mg/L (20°C)，正己燒15.5g/L(20°C)，對二甲苯、1，2-二氯乙燒、甲醇、丙酬、乙酸乙醋均>250g/L (20°C);穩定性：DT5061d(p冊），448d(pH7)，314d(pH9)(25°C)。
[0003] 娃嚷菌胺是由孟山都公司1993-94年發現、并于1998年在英國布賴頓植保會議上 介紹的新穎殺菌劑，可能是ATP抑制劑，抑制能量(ATP)從線粒體向細胞溶質的傳遞。具有良 好的保護活性，殘效期長。持效期長，用作種子處理劑。1994年，娃嚷菌胺在歐盟進入田間試 驗階段，1999年在愛爾蘭首先獲準登記，繼而在歐盟其他國家、中國、南非等取得進一步的 登記。2004年1月1日，娃嚷菌胺列入歐盟農藥登記指令(91/414)附錄1，其登記資料因此獲 得了運一天起算的10年期的保護權。娃嚷菌胺的主要適用作物有:大麥、黑小麥和小麥等。 其主要市場包括:比利時、智利、中國、捷克共和國、丹麥、法國、德國、愛爾蘭、波蘭、南非、瑞 典和英國等，具有很廣闊的應用前景。
[0004] 隨著娃嚷菌胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的歐盟等國家制定了 其在蔬菜、水果、糧谷和畜產品等食品農產品中的最大允許殘留量(M化），M化允許值很嚴 格，Μ化范圍為:0.01~0.05mg/kg，歐盟、日本等國家規定若田間使用農藥沒有在該國家登 記，沒有制定相應的殘留限量標準時，出口至其國家的食品農產品包括畜禽肉等動物源性 食品中殘留限量均實行0.0 lmg/L的"一律標準"。
[0005] 現階段，對娃嚷菌胺殘留量測定方法的研究較少，報道的檢測方法主要為蔬菜和 水果中娃嚷菌胺殘留檢測方法，運些檢測方法均采用液相色譜串聯質譜化C-MS/MS)測定蔬 菜和水果中娃嚷菌胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MSii定食品農產品中農藥殘留具有快 速、簡便、靈敏度高等優點，但由于其價格較昂貴，很多檢測機構、企業或科研院所未配置該 儀器或配置臺數較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動相或色 譜柱，運樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費比較長的時間對系統進行平衡，運一定程度 上制約了 LC-MS/MS的應用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質譜(GC-EI-MS)分析食品農產 品中農藥殘留具有很大優勢，由于電子轟擊電離源質譜為通用性檢測器，可實現幾百種農 藥的多殘留分析，可同時定性和定量，價格適中，因此現各種檢測機構和企業均配備氣相色 譜-電子轟擊離子源-質譜儀(GC-EI-MS)對食品農產品中的農藥殘留進行檢測，但迄今為止 未見食品農產品中娃嚷菌胺殘留量的GC-EI-MS檢測方法的報道，建立氣相色譜-電子轟擊 離子源-質譜(GC-EI-MS)定性和定量分析糧谷和動物源性食品中娃嚷菌胺殘留量的檢測方 法具有重要意義。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種GC-EI-MS測定果蔬中娃嚷菌胺殘留的方法。
[0007] 為實現W上目的，本發明所采用的技術方案是：一種GC-EI-MS測定果蔬中娃嚷菌 胺殘留的方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取樣品于具塞離屯、管中，加入乙臘或含1%乙酸的乙臘溶液均質提取Imin，加入氯化 鋼或乙酸鋼中的一種和無水硫酸儀，振蕩后離屯、。
[0009] (2)凈化 移取樣品提取液上清液于離屯、管中，加入基質分散固相萃取劑，滿旋振蕩，離屯、，吸取 一定量凈化液氮氣吹干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣 相色譜-電子轟擊離子源-質譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標準工作溶液的配制 將不含娃嚷菌胺的同種類基質空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時，得樣品提取凈化 殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，滿旋混勻，配制成至少3個濃度的娃嚷菌胺系列混合標準 工作液。
[0011] (4)氣相色譜-電子轟擊離子源-質譜法(GC-EI-MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-EI-MS測定，W標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-EI-MS進行測定，測得樣品液中娃嚷菌胺的色譜峰面積，代入標準工作曲線， 得到樣品液中娃嚷菌胺含量，然后根據樣品液所代表試樣的質量計算得到樣品中娃嚷菌胺 殘留量;若上機溶液中娃嚷菌胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上機溶液濃度 稀釋至線性范圍之內。
[0012] 步驟(1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(1)中采用乙臘提取時加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時加 入乙酸鋼鹽析;含水量較少的樣品鹽析時需加入一定量的水。
[0014] 步驟(2)中基質分散固相萃取劑由無水硫酸儀、Ci8和PSA組成，每毫升提取液中無 水硫酸儀、Ci8和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑ο. 25mm， 膜厚Ο . 25皿;進樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0016] 步驟(4)中質譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監測（SIM)模式，監測的離子為：252.1、 253.U254.U211.lo
[0017] 步驟(4)中測定樣液和基質標準工作溶液時，若樣液中農藥色譜峰保留時間與標 準溶液中相應農藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均 出現，而且離子豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運種農藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[0018] 本發明的有益效果在于：
[0019] 本發明利用分散固相萃取技術，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結合GC-EI-MS應用于蔬菜和水果中娃嚷菌胺定性確證 和定量檢測，平均回收率為82.9%~87.1 %，平均相對標準偏差(RSD)為5.3%~7.5%，檢 出限低于3.03yg/kg，具有操作簡便、快速、準確、靈敏度高及重復性好的優點。能滿足美國、 歐盟、日本等國家對相應產品安全檢測的技術要求，為保障我國人民食品安全及對外出口 貿易健康發展提供有力的技術支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白蘋果基質中的娃嚷菌胺標液的選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含娃嚷菌胺的蘋果空白樣品的選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為W不含娃嚷菌胺的蘋果空白樣品為基質配制的娃嚷菌胺標準工作曲線。
【具體實施方式】
[0023] 現下實施實例來說明本發明，但并不是限制本發明的范圍。
[0024] 實施例中使用的儀器與試劑
[0025] TlSBasic均質器（IKA，Germany); 5810R離屯、機化卵endorf，Germany) ;MS3基本型 旋滿混合器（IKA，Germany);7890N氣相色譜-5977C質譜儀(Agilent，USA);乙二胺-N-丙基 硅烷(PSA)吸附劑(40~60μπι)、十八烷基硅烷鍵合相(Ci8)凈化劑(40~60μπι)均購于美國安 捷倫科技有限公司。
[0026] 試劑：乙臘、丙酬、正己燒化PLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany); 無水硫酸儀、氯化鋼和乙酸鋼為分析純，均購自國藥集團化學試劑有限公司。
[0027] 標準物質：純度99.5%，購自德國化.E虹enstorfer公司。
[0028] 實施例1:蘋果中娃嚷菌胺殘留量的檢測 [00巧](1)樣品前處理 稱取經充分混勻的蘋果10.0 g于50mL離屯、管中，準確加入20mL乙臘，均質提取Imin，加 入3g無水硫酸儀和2g氯化鋼，滿旋Imin后，700化/min離屯、5min。離屯、后，取6mL乙臘提取液 轉移至裝有900mg無水硫酸儀、300mg Ci8和150mg PSA的離屯、管中，滿旋Imin，SOOOr/min離 屯、5min。取4mL上清液于氮吹管中，于40°C氮氣吹干，加入體積比為1/1的丙酬/正己燒混合 溶劑溶解殘渣，滿旋混勻過膜后，移入進樣瓶中待GC-EI-MS測定。
[0030] (2)標準工作溶液的配制 準確稱取25 ± 0.1 mg標準品于25mL容量瓶中，用乙臘溶解，定容得1000.0 yg/mL標準儲 備液;移取l.OmL標準儲備液置于lOOmL容量瓶中，用用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶 劑定容得到10.Oyg/mL標準中間液;將lOyg/mL標準溶液稀釋配成5、2、1、0.5、0.2、0.化g/mL 標準溶液。將不含娃嚷菌胺的蘋