用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的代謝標(biāo)志物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，設(shè)及疾病診斷標(biāo)志物，具體設(shè)及一組代謝標(biāo)志物，用于 診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病，或用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、病。
【背景技術(shù)】
[0002] 冠屯、病亦稱為缺血性屯、臟病，設(shè)及供應(yīng)屯、肌血液的動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化，即冠狀動(dòng) 脈粥樣硬化病變引起血管腔狹窄或斑塊形成甚至破裂、完全堵塞，造成屯、肌缺血、缺氧或壞 死而導(dǎo)致屯、臟缺血性疾病，從而引起臨床上屯、絞痛、屯、肌梗死等一系列嚴(yán)重的屯、血管事件。 冠屯、病是人類健康的主要?dú)⑹?，具發(fā)病率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高、病死率高、并發(fā)癥多等特 點(diǎn)，已經(jīng)成為威脅我國人民健康的主要疾病。
[0003] 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是冠屯、病的主要病因。動(dòng)脈粥樣硬化是一種常見的進(jìn)行性動(dòng)脈 疾病，病變主要累及中等大小的肌層動(dòng)脈，動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積，平滑肌細(xì)胞增生，形成局限 性斑塊，可使動(dòng)脈壁變硬，嚴(yán)重時(shí)斑塊破裂導(dǎo)致血栓、栓塞、出血，受累管腔部分或完全閉 塞，臨床表現(xiàn)為動(dòng)脈粥樣硬化血管并發(fā)癥的發(fā)生，老年患者中最常見和最嚴(yán)重的血管并發(fā) 癥是冠屯、?。ú环€(wěn)定性屯、絞痛和屯、肌梗塞）。動(dòng)脈粥樣硬化早期病變可發(fā)生在10歲之前，病 變引起動(dòng)脈狹窄需經(jīng)歷20至30年時(shí)間，早期無臨床癥狀，不易被發(fā)現(xiàn)和重視，因此對(duì)冠狀動(dòng) 脈粥樣硬化的早期預(yù)防和診斷可W有效地防止冠屯、病的發(fā)生。
[0004] 冠狀動(dòng)脈造影可W對(duì)冠狀動(dòng)脈的狹窄程度作出準(zhǔn)確的判斷，是診斷冠屯、病的金標(biāo) 準(zhǔn)[冠狀動(dòng)脈造影金標(biāo)準(zhǔn)與臨床常規(guī)診斷冠屯、病差異性比較研究，舒榮文等，海軍醫(yī)學(xué)雜志 2015年04期]。作為冠屯、病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，冠脈造影只能發(fā)現(xiàn)血管狹窄程度，而且它還是一 種介入測量手段，需要介入手術(shù)，且診斷昂貴。另一方面，醫(yī)生還需要依據(jù)對(duì)患者的屯、電圖、 屯、動(dòng)圖、平板運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)、CT等檢查結(jié)果作出最終診斷，由于醫(yī)生主觀性判斷、病人敘述不清 等情況的出現(xiàn)，對(duì)冠屯、病的診斷仍存在較大的誤診和漏診，運(yùn)對(duì)病人的預(yù)后影響非常大。為 了改善患者的生活質(zhì)量，降低患者受到的生命威脅，我們亟需發(fā)展一種具有診斷率高、經(jīng) 濟(jì)、無侵入性、操作簡便等特性的診斷方法。
[0005] 代謝組學(xué)是研究生物體內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體及其隨內(nèi)因和外因變化的科學(xué)，是 系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)重要組成部分。它可W對(duì)體液如血液和尿液進(jìn)行快速及無侵入性的分 析，通過代謝譜的差異獲得可W指示各種生化反應(yīng)的代謝標(biāo)志物。目前常用的分析技術(shù)包 括核磁共振(NMR)、質(zhì)譜化C-MS/GC-MS)等。LC-MS具有對(duì)樣本制備要求低、靈敏度高、動(dòng)態(tài)范 圍寬等特點(diǎn)，可用于檢測樣本中濃度相差大的代謝物，因而成為代謝組學(xué)的研究中應(yīng)用越 來越多的技術(shù)平臺(tái)。
[0006] 血漿分析是臨床上常用的一種疾病診斷方法，因其簡便、快速、經(jīng)濟(jì)且相對(duì)無創(chuàng)的 優(yōu)點(diǎn)而被廣泛采用。目前尚未有人使用血漿代謝物水平對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病進(jìn)行 診斷。應(yīng)用血漿代謝組學(xué)尋找代謝標(biāo)志物W診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病對(duì)于臨床早期 快速確診冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病及急性冠狀動(dòng)脈綜合征危險(xiǎn)分層具有重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明第一目的在于提供一組代謝標(biāo)志物，用于診斷 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病，或用于診斷區(qū)分人冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、病，該組代謝標(biāo) 志物同時(shí)存在于血漿中，可同時(shí)分析測定；
[0008] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種能夠靈敏地分析檢測所述代謝標(biāo)志物的方法；
[0009] 本發(fā)明的第Ξ目的在于提供所述代謝標(biāo)志物在篩選治療或緩解冠狀動(dòng)脈粥樣硬 化或冠屯、病的藥物中的應(yīng)用；
[0010] 本發(fā)明的第四目的在于提供一種基于所述代謝標(biāo)志物的檢測試劑盒，用于診斷冠 狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病，或用于診斷區(qū)分人冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、病，提高診斷便利 性，促進(jìn)診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化；
[0011] 本發(fā)明的第五目的在于提供所述檢測試劑盒在篩選治療或緩解冠狀動(dòng)脈粥樣硬 化或冠屯、病的藥物中的應(yīng)用。
[0012] 上述目的是通過如下技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0013] 一組用于診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病，或用于區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、 病的代謝標(biāo)志物，包括一個(gè)或多個(gè)如下所述的代謝標(biāo)志物：1-棟桐酷-sn-甘油-3-憐脂酷膽 堿、1-十八碳四締酷-sn-甘油-3-憐脂酷膽堿、1-亞油酷-sn-甘油-3-憐脂酷膽堿、1-硬脂 酷-sn-甘油-3憐脂酷膽堿、1-亞油酷-2-徑基-sn-甘油-3-憐脂酷乙醇胺、1-亞麻酷-sn-甘 油-3-憐脂酷膽堿、1-油酷-sn-甘油-3-憐脂酷膽堿、十六酷胺和1-棟桐油酷-sn-甘油-3-憐 脂酷膽堿。
[0014] 進(jìn)一步地，包括任意兩個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。
[0015] 進(jìn)一步地，包括任意Ξ個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。
[0016] 進(jìn)一步地，包括任意四個(gè)所述的代謝標(biāo)志物。
[0017] 進(jìn)一步地，所述的代謝標(biāo)志物來源于血漿。
[0018] -種定性或定量分析所述的代謝標(biāo)志物的方法，通過液質(zhì)聯(lián)用和/或氣質(zhì)聯(lián)用對(duì) 所述的代謝標(biāo)志物定性或定量。液質(zhì)和氣質(zhì)檢測限低、靈敏度高，能靈敏地分析檢測生物樣 本中的代謝標(biāo)志物并對(duì)其定量。
[0019] 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、病治療或緩解后，會(huì)在代謝標(biāo)志物的表達(dá)水平上有所體 現(xiàn)。因此，所述的代謝標(biāo)志物可W用于篩選治療或緩解冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病的藥物。
[0020] -種檢測試劑盒，用于診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病，或用于診斷區(qū)分冠狀動(dòng) 脈粥樣硬化和冠屯、病，包括所述的代謝標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)品，所述標(biāo)準(zhǔn)品為各代謝標(biāo)志物的化 學(xué)單體或混合物。使用標(biāo)準(zhǔn)品可W準(zhǔn)確鑒定生物樣本中的標(biāo)志物。試劑盒有助于實(shí)現(xiàn)檢測 標(biāo)準(zhǔn)化，提高檢測便利性和重現(xiàn)性。
[0021] 進(jìn)一步地，該試劑盒包括溶解所述標(biāo)準(zhǔn)品的溶劑和/或提取富集所述代謝標(biāo)志物 的溶劑。
[0022] 所述的檢測試劑盒可W用于篩選治療或緩解冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病的藥物。
[0023] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0024] (1)本發(fā)明提供的代謝標(biāo)志物能精確診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病，還可W用 于診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、病。R0C曲線評(píng)價(jià)方法中，R0C曲線下的面積值A(chǔ)UC在大 于ο. 5的情況下，越接近于1，說明診斷效果越好。AUC在ο. 5~ο. 7時(shí)有較低準(zhǔn)確性，AUC在ο. 7 ~0.卵寸有一定準(zhǔn)確性，AUC在0.9 W上時(shí)有較高準(zhǔn)確性。經(jīng)驗(yàn)證，本發(fā)明提供的代謝標(biāo)志物 單個(gè)用于診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病時(shí)（分別與健康人相區(qū)分），或用于診斷區(qū)分人冠 狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、病時(shí)，AUC均在0.7 W上；多個(gè)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，AUC比單個(gè)更接近于1，診 斷效果更好;九個(gè)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，AUC最接近于1，診斷區(qū)分效果最好。
[0025] (2)本發(fā)明提供的分析檢測所述代謝標(biāo)志物的方法靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
[0026] (3)本發(fā)明提供的代謝標(biāo)志物可W有效診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病的病情是 否得到緩解，可W用于篩選治療或緩解冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病的藥物。
[0027] (4)本發(fā)明提供的試劑盒可W用于診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病，還可W用于 診斷區(qū)分冠狀動(dòng)脈粥樣硬化和冠屯、病，提高診斷便利性，促進(jìn)診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化。
[0028] (5)本發(fā)明提供的基于所述代謝標(biāo)志物的試劑盒可W有效診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化 或冠屯、病的病情是否得到緩解，可W用于篩選治療或緩解冠狀動(dòng)脈粥樣硬化或冠屯、病的藥 物。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。使用的儀器或試劑未做詳細(xì)說明 的均為常規(guī)儀器和試劑;未具體描述的試驗(yàn)操作方法均為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的常規(guī) 操作方法。
[0030] 實(shí)施例1:冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者或冠屯、病患者與健康人之間W及冠狀動(dòng)脈粥樣