一種液態乳中酵母β-葡聚糖的提取方法及含量測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種食品中酵母目-葡聚糖的提取方法及含量測定方法，尤其適用于 液態乳中酵母目-葡聚糖的提取和測定。
【背景技術】
[0002] 酵母目-葡聚糖是W釀酒酵母為原料，經提取、酸堿處理、噴霧干燥等步驟生產而 成，分子量為2萬至400萬道爾頓，分子式為（C化2〇6)η，其中η=125-25000。大量研究證明， 酵母目-葡聚糖具有增強免疫、抗福射與降血脂功能，送使得酵母目-葡聚糖在食品行業有 了更為廣泛的應用前景。
[0003] 目前，酵母目-葡聚糖的測定方法多采用苯酪-硫酸法，但該法精密度較差，并且 不適合測定液態乳制品中的酵母目-葡聚糖。液態乳制品的成分比較復雜，且含有大量蛋 白質，直接測定的結果準確性較差并可對儀器造成不良影響。較為理想的方案是先提取液 態乳中的酵母目-葡聚糖，再對酵母目-葡聚糖的含量進行測定。現有的提取方法是用蛋 白沉淀劑(例如己酸鋒和亞鐵氯化鐘）將液態乳中的蛋白質沉淀，取上清液進行測定；該方 法的缺點是：易造成目-葡聚糖的回收率低；此外，鹽析沉淀蛋白方法中，乳糖和其他多糖 添加劑對離子色譜測定有干擾，影響目-葡聚糖的測定。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，可降低提取過程 中酵母目-葡聚糖的損失。
[0005] 本發明的另一個目的是提供一種液態乳中酵母目-葡聚糖的含量測定方法，其回 收率和精密度較高。
[0006] 本發明提供了一種液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，包括；a、取25克液態乳， 加入堿性蛋白酶0. 03至0. 1U和中性蛋白酶0. 01至0. 05U，充分振蕩混合后于40至6(TC 水浴加熱2至4小時，得到水解液；b、將水解液振蕩混合均勻后，于5000至6000轉/分鐘 離必15至20分鐘，去掉上清液，保留沉淀物及上層脂肪；C、向步驟b得到的沉淀物和上層 脂肪中加入60至10(TC的去離子水15至3〇111以振蕩混合均勻后，于5000至6000轉/分鐘 離必15至20分鐘，去掉上清液及上層脂肪，保留沉淀；W及t將步驟C中得到的沉淀用水 清洗一至兩次，得到提取物；用水清洗的方法為；加入60至10(TC的去離子水15至30mU振 蕩混合均勻后，于5000至6000轉/分鐘離必15至20分鐘，去掉上清液，保留沉淀。
[0007] 在液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法的一種示意性實施方式中，還包括將步驟 d得到的提取物冷凍干燥。
[000引本發明還提供了一種液態乳中酵母目-葡聚糖的含量測定方法，包括先通過上述 的液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，提取待測液態乳中的酵母目-葡聚糖，再測定提取 產物中酵母目-葡聚糖的含量。
[0009] 在液態乳中酵母目-葡聚糖的含量測定方法的一種示意性實施方式中，測定方法 包括；通過上述的提取方法，提取待測液態乳中的酵母目-葡聚糖；將提取后得到的產物用 溶壁酶、1,6-葡聚糖酶、外切-目-葡聚糖酶和目-葡萄糖巧酶水解，使酵母目-葡聚糖全 部水解成葡萄糖，得到待測液；W及測定待測液中葡萄糖的含量，并計算待測液態乳中酵母 目-葡聚糖的含量。
[0010] 在液態乳中酵母目-葡聚糖的含量測定方法的一種示意性實施方式中，測定待測 液中葡萄糖的含量的方法為G0P0D法。
[0011] 在液態乳中酵母目-葡聚糖的含量測定方法的一種示意性實施方式中，G0P0D法 的步驟包括；向待測液中加入3 mL G0P0D溶液，4(TC水浴中保持20分鐘；最后冷卻至室溫 并在51 Onm下測定吸光度值。
[0012] 在液態乳中酵母目-葡聚糖的含量測定方法的一種示意性實施方式中，測定待測 液中葡萄糖的含量的方法為高效液相色譜法。
[0013] 在液態乳中酵母目-葡聚糖的含量測定方法的一種示意性實施方式中，高效液相 色譜法的條件為：色譜柱；Dionex CarboF^ac ΡΑΙΟ 4X250 mm,帶 CarboF^ac ΡΑΙΟ 4X50 mm保護柱；流動相；A為超純水，電阻率> 18. 2ΜΩ ;B為0. 25 mol/L氨氧化鋼溶液；C為 1 mol/L己酸鋼溶液；檢測器讀培檢測器；Au工作電極；Ag/AgCl參比電極；檢測池溫度 3(TC ;糖采用積分安培模式檢測，波形選擇碳水化合物標準四電位；流速；1. 0 mL/min ;柱 溫；30 °C進樣量；25 μ L ; 淋洗梯度見下表;_
安培檢測器檢測糖波形參數；I I_^
陽014] 本發明提供的液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法，采用蛋白酶水解去除液態乳 中的蛋白質，有效降低了酵母目-葡聚糖在提取過程中的損失；并且在提取過程中去除了 對測定有干擾的乳糖。使用該提取方法對液態乳中酵母目-葡聚糖進行測定，測定回收率 和精密度較高。
【具體實施方式】
[0015] 為了對發明的技術特征、目的和效果有更加清楚的理解，現結合W下實施例說明 本發明的【具體實施方式】。
[0016] 本發明中"U"，即活力單位，在最適條件（25to下，每分鐘內催化1微摩爾（μ mol) 底物轉化為產物所需的酶量定為一個活力單位。
[0017] 提取例1 ;液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法。
[0018] 曰、取25克液態乳，加入堿性蛋白酶0. 04 U和中性蛋白酶0. 03U，充分振蕩混合后 于4(TC水浴加熱2小時，得到水解液； K將水解液振蕩混合均勻后，于5000轉/分鐘離必15分鐘，去掉上清液，保留沉淀物 及上層脂肪； C、向步驟b得到的沉淀物和上層脂肪中加入60°C的去離子水15 mU振蕩混合均勻后， 于5000轉/分鐘離必15分鐘，去掉上清液及上層脂肪，保留沉淀； d、 將步驟C中得到的沉淀用水清洗一至兩次，得到提取物；用水清洗的方法為；加入 6(TC的去離子水15 mU振蕩混合均勻后，于5000轉/分鐘離必15分鐘，去掉上清液，保留 沉淀； e、 將步驟d得到的提取物冷凍干燥，冷凍干燥的溫度為-47°C，得到干燥后提取物。
[001引提取例2 ;液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法。
[0020] 曰、取25克液態乳，加入堿性蛋白酶0. 0抓和中性蛋白酶0. 01 U，充分振蕩混合后 于55°C水浴加熱2. 5小時，得到水解液； K將水解液振蕩混合均勻后，于5500轉/分鐘離必17分鐘，去掉上清液，保留沉淀物 及上層脂肪； C、向步驟b得到的沉淀物和上層脂肪中加入8(TC的去離子水20 mU振蕩混合均勻后， 于5500轉/分鐘離必17分鐘，去掉上清液及上層脂肪，保留沉淀； t將步驟C中得到的沉淀用水清洗一至兩次，得到提取物；用水清洗的方法為；加入 8(TC的去離子水20mU振蕩混合均勻后，于5500轉/分鐘離必17分鐘，去掉上清液，保留沉 淀； e、將步驟d得到的提取物冷凍干燥，冷凍干燥的溫度為-47°C，得到干燥后提取物。
[0021] 提取例3 ;液態乳中酵母目-葡聚糖的提取方法。
[0022] 曰、取25克液態乳，加入堿性蛋白酶0. 1U和中性蛋白酶0. 05U，充分振蕩混合后于 6(TC水浴加熱4小時，得到水解液； K將水解液振蕩混合均勻后，于6000轉/分鐘離必20分鐘，去掉上清液，保留沉淀物 及上層脂肪； C、向步驟b得到的沉淀物和上層脂肪中加入10(TC的去離子水30 mU振蕩混合均勻 后，于6000轉/分鐘離必20分鐘，去掉上清液及上層脂肪，保留沉淀； t將步驟C中得到的沉淀用水清洗一至兩次，得到提取物；用水清洗的方法為；加入 l〇(TC的去離子水30mU振蕩混合均勻后，于6000轉/分鐘離必20分鐘，去掉上清液，保留 沉淀； e、將步驟d得到的提取物冷凍干燥，冷凍干燥的溫度為-47°C，得到干燥后提取物。