檢測agp1、serpina3和cdh1含量的系統在篩查活動性結核病患者中的應用
【技術領域】
[00011本發明涉及生物技術領域中檢測AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統在篩查活動性 結核病患者中的應用。
【背景技術】
[0002] 結核病（Tuberculosis，TB)是由結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis， MTB)感染引發的慢性傳染性疾病，嚴重威脅人類健康。全國第五次結核病流行病學調查顯 示我國現有超過500萬名成人活動性肺結核患者。成人感染結核分枝桿菌后，部分呈現帶菌 生存狀態，并不會發展為結核病，稱為結核潛伏感染者(Latent tuberculosis infection, LTBI);約5-10 %的潛伏感染者會繼續發展為活動性結核病(Active tuberculosis，ATB)。 活動性肺結核是指痰涂片陽性者，證明有結核分枝桿菌排出，病灶屬于活動期，胸片上常有 斑片狀陰影或是結核空洞，或者播散病灶，說明結核分枝桿菌繁殖活躍，毒力強。國內各地 區流行病學調查結果顯示，基于γ-干擾素釋放試驗（IGRA)得出的結核分枝桿菌感染率大 約在20%-30%之間，即全國約有3-4億人為結核分枝桿菌感染者，數目龐大的無臨床癥狀 的結核潛伏感染者是活動性結核病的重要來源。此外，由于結核潛伏感染的預防性治療方 案與活動性結核病的抗癆治療方案顯著不同。因此，如何實現結核分枝桿菌潛伏感染者與 活動性結核病患者的早期鑒別診斷至關重要。
[0003] 常用的結核分枝桿菌感染診斷方法包括傳統的結核菌素實驗(TST)以及γ-干擾 素釋放試驗（IGRAs )，TST方法容易受到卡介苗接種和非結核分枝桿菌的干擾，結核分枝桿 菌感染診斷不夠明確，更無法區別結核潛伏感染和活動性結核病。新近推行的IGRAs方法， 雖然能夠檢測結核分枝桿菌感染，但無法區分結核桿菌潛伏感染和活動性結核病。目前活 動性結核病的診斷金標準仍然是經典的痰涂片染色顯微鏡下查找抗酸桿菌以及結核桿菌 培養法，已有近百年的歷史。這兩種檢測方法的敏感性均不高，痰涂片染色法的敏感性約 30%，結核桿菌培養法的敏感性約60%。痰涂片染色法雖然可以當天出結果，但不能區分結 核桿菌和非結核分枝桿菌，也不能區分MTB是活菌還是死菌。結核桿菌培養法的敏感性雖高 一些，但耗時較長，即使快速培養也需要1個月的時間才能得到結果。另外，對于臨床上大量 的肺外結核和涂陰、菌陰的活動性結核病患者，金標準檢測方法的應用受到限制，加劇了診 斷的困難，給及時治療帶來了阻力。近年來雖然陸續出現了一些先進的基于核酸擴增的分 子生物學檢測技術(如XpertMTB/RIF assay)，但由于受到儀器設備和診斷費用的限制，以 及假陽性率偏高等問題，還無法全面推廣。因此，現行的結核病診斷方法或輔助診斷手段都 無法實現快速有效的鑒別診斷結核分枝桿菌潛伏感染和活動性結核病，使得臨床上面臨嚴 重的治療延誤以及過度治療等問題。基于此，尋找新的活動性結核病特異標志物，鑒別診斷 結核分枝桿菌潛伏感染和活動性結核病，已經成為活動性結核病臨床診斷中一項亟待解決 的難題。
[0004] 血漿蛋白質組組成成分、表達水平和疾病有密切聯系，用蛋白質組學方法分析動 態變化的蛋白質組，對鑒別診斷活動性結核病和結核潛伏感染有重要意義。Labelfree 2D-LC-MSMS是將非同位素標記技術、二維液相色譜串聯質譜技術相聯用，信號離子表現為不同 質荷比的峰，根據波峰的高度及面積可得到準確的蛋白質定量信息，非常適合對多樣本的 平行分析。
[0005] Alpha-1-acid glycoprotein 1(AGP1)，al酸性糖蛋白（alAG)，早期稱乳清類粘蛋 白，由肝臟合成，癌細胞也可合成。AGP1的肽鏈結構與Ig輕鏈可變區及部分重鏈區、結合珠 蛋白a鏈結構類似，說明AGP1從Ig家系演變而來。體液中AGP1含量的變化可按下列病種排列 依次升高，即漏出液、炎癥滲出液、惡性腫瘤滲出液。Alpha-1-antichymotrypsin (SERPINA3)，a_抗胰凝乳蛋白，雖然該蛋白的詳細生理功能不是很清楚，但是可以抑制中性 粒細胞和肥大細胞類糜蛋白酶，兩者都可以激活使血管緊張素。E-cadherin (CDH1)，上皮細 胞鈣粘蛋白，上皮細胞鈣粘蛋白是一種鈣離子依賴的細胞粘附分子，存在于上皮細胞，參與 細胞的粘附和信息傳導過程，并與腫瘤的分級和預后均有一定的相關關系。上皮細胞鈣粘 蛋白的細胞外區為信號肽結構，具有鈣離子結合點，能夠與鈣離子特異性結合，跨膜區起著 膜固定作用，是細胞與細胞間緊密連接的關鍵，當其表達下調或功能障礙時，將使同種細胞 失去粘附，意味著腫瘤細胞容易從原發病灶脫落分離。
【發明內容】
[0006 ]本發明所要解決的技術問題是如何篩查活動性結核病患者。
[0007] 為解決上述技術問題，本發明首先提供了 Ml在制備篩查或輔助篩查活動性結核病 患者產品中的應用;所述Ml包括檢測AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統。
[0008] 上述應用中，所述檢測AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統可由檢測AGP1含量的系 統、檢測SERPINA3含量的系統和檢測CDH1含量的系統組成。
[0009] 上述應用中，所述檢測AGP1含量的系統為通過酶聯免疫反應檢測AGP1含量所需的 試劑和/或儀器;所述檢測SERPINA3含量的系統為通過酶聯免疫反應檢測SERPINA3含量所 需的試劑和/或儀器;所述檢測CDH1含量的系統為通過酶聯免疫反應檢測CDH1含量所需的 試劑和/或儀器。
[0010] 上述應用中，所述通過酶聯免疫反應檢測AGP1含量所需的試劑可為AGP1和/或 AGP1的抗體，也可由所述AGP1、所述AGP1的抗體以及進行酶聯免疫反應所需要的其它試劑 組成。所述AGP1可在通過酶聯免疫反應檢測AGP1含量中作為蛋白標準品使用。所述AGP1、所 述AGP1的抗體以及所述進行酶聯免疫反應所需要的其它試劑均可獨立包裝。
[0011] 所述AGP1、所述AGP1的抗體以及所述進行酶聯免疫反應所需要的其它試劑具體可 為abeam公司貨號為abcaml08854的試劑盒中試劑。
[0012] 所述AGP1具體可為序列表中序列1所示的蛋白質。所述AGP1的抗體可為可識別所 述AGP1的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0013] 所述通過酶聯免疫反應檢測SERPINA3含量所需的試劑可為SERPINA3和/或 SERPINA3的抗體，也可由所述SERPINA3、所述SERPINA3的抗體以及進行酶聯免疫反應所需 要的其它試劑組成。所述SERPINA3可在通過酶聯免疫反應檢測SERPINA3含量中作為蛋白標 準品使用。所述SERPINA3、所述SERPINA3的抗體以及所述進行酶聯免疫反應所需要的其它 試劑均可獨立包裝。
[0014] 所述SERPINA3、所述SERPINA3的抗體以及所述進行酶聯免疫反應所需要的其它試 劑具體可為abeam公司貨號為abcaml 57706的試劑盒中試劑。
[0015] 所述SERPINA3具體可為序列表中序列2所示的蛋白質。所述SERPINA3的抗體可為 可識別所述SERPINA3的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0016]所述通過酶聯免疫反應檢測⑶H1含量所需的試劑可為⑶H1和/或⑶H1的抗體，也 可由所述CDH1、所述CDH1的抗體以及進行酶聯免疫反應所需要的其它試劑組成。所述CDH1 可在通過酶聯免疫反應檢測CDH1含量中作為蛋白標準品使用。所述CDH1、所述CDH1的抗體 以及所述進行酶聯免疫反應所需要的其它試劑均可獨立包裝。
[0017] 所述CDH1、所述CDH1的抗體以及所述進行酶聯免疫反應所需要的其它試劑具體可 為R&D公司貨號為DCADE0的試劑盒中試劑。
[0018] 所述CDH1具體可為序列表中序列3所示的蛋白質。所述CDH1的抗體可為可識別所 述CDH1的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0019] 上述應用中，所述Ml還可包括數據處理裝置，所述數據處理裝置用于根據待測對 象的AGP1、SERPINA3和CDH1含量確定所述待測對象是否為活動性結核病患者。所述Ml可僅 為所述檢測AGP1、SERPINA3和⑶H1含量的系統，也可由所述檢測AGP1、SERPINA3和⑶H1含量 的系統與所述數據處理裝置組成。所述Ml也可僅為由所述檢測AGPUSERPINA3和CDH1含量 的系統組成的試劑盒，也可僅為由所述檢測AGPUSERPINA3和CDH1含量的系統與所述數據 處理裝置組成的試劑盒。
[0020] 上述應用中，所述數據處理裝置可為利用CART算法進行數據處理的數據處理裝 置，如利用CART算法進行數據處理軟件或模塊。
[0021 ] 上述應用中，在待測對象血漿樣本中SERPINA3的含量2 227.221yg/mL時，如所述 待測對象血漿樣本中AGP1 2 3693.85yg/mL，所述待測對象為或候選為活動性結核病患者， 如所述待測對象血漿樣本中AGPl〈3693.85yg/mL，所述待測對象為或候選為非活動性結核 病患者;在所述待測對象血漿樣本中SERPINA3的含量〈227.221yg/mL時，如所述待測對象血 漿樣本中CDH1〈105.829ng/mL，所述待測對象為或候選為活動性結核病患者，如所述待測對 象血漿樣本中⑶