一種蘆薈多糖指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種蘆薈多糖指紋圖譜的構建方法，具體涉及一種蘆薈多糖的GPC指 紋圖譜的構建方法以及由此方法所得到的蘆薈多糖標準指紋圖譜，屬于中藥及其制品和功 能食品、化妝品原料及其制品的指紋圖譜技術領域。
【背景技術】
[0002] 庫拉索蘆薈（Aloe barbadensis Mill或Aloe vera L.)是百合科蘆薈屬植物 [China Rural Technology Development Center, Aloe Industry Committee of China Association for Promotion of Non-Governmental Sci-Tech Enterprises. Development report of aloe industry in China. Beijing:China Labour and Social Security Publishing House，2011·]，具有殺菌、消炎、抗福射[Saini D K，Saini R M. Environ Toxicol Pharmacol, 2011，（31) :427.]、抗腫瘤、抗衰老、抗內毒素、免疫調節等多種藥 理作用[Hamman J H. Molecules, 2008，（13) :1599 ;Choi S，Chung Μ H. Semin Integr Med, 2003, 1 (1) :53 ；Lee E M, Bai H ff, Lee S K, et al. Radiat Phys Chem, 2012, (2) :33.], 已廣泛用于藥品、食品、化妝品和洗滌用品等行業[Maenthaisong R,Chaiyakunapruk N，Niruntraporn S,et al. BURNS, 2007, (33) :713 ;Dal'Belo S E,Gaspar L R,Maia Campos P Μ B G. Skin Res Technol, 2006,（12):241 ;任海毅，王巧娥，董銀卯，等.藥物評價研 究，2012, 35 (6):431 ;周偉東，中國農村科技，2014,（8):56.]。然而，由于蘆薈活性成分復 雜，蘆薈產品的質量鑒定與品質分析一直是困擾蘆薈行業的難題，建立蘆薈產品的質量控 制與科學評價方法也一直是我國蘆薈產業急需解決的關鍵技術問題[萬金志，鐘英，黃運 喜，等.天然產物研究與開發，2014, 26 (6) : 970.]。
[0003] 研究表明，蘆薈的多重功效來源于其中多種成分的協同作用，其中最重要的是 蘆薈苷、蘆薈大黃素等蒽醌類成分以及以乙酰化甘露聚糖為主的多糖類成分[萬金志， 徐新軍，鐘佳勝，等.今日藥學，2012, 22(12) :753;陳國和，劉玉鑫，張新申，等.化學 研究與應用，2002, 14(2) : 133.]。蘆薈蒽醌類物質主要存在于蘆薈葉皮中，是蘆薈藥品 的活性成分，其質量分析與評價方法已有很多報道[陳國和，劉玉鑫，張新申，等.化學 研究與應用，2002, 14(2):133 ;Wu X F，Ding W J，Zhong J S，et al.J Pharm Biomed Anal，2013,（80) :94 ;陳金東，李蔚，李素云.色譜，2002, 20(4) :367 ;陳欣霞，張宇航，林 穎，等.天然產物研究與開發，2009, 21 (5) :817.]，而蘆薈多糖主要存在于蘆薈凝膠中[陳 國和，劉玉鑫，張新申，等.化學研究與應用，2002, 14(2) :133.]，是蘆薈保健食品、普通食 品、化妝品、洗滌用品的主要活性成分[魏洋，王革輝.針織工業，2012,（2):46 ;衛生部 等6部局關于含庫拉索蘆薈凝膠食品標識規定的公告.(2009-02-06). http: //www. moh. gov. cn/mohbgt/s9506/200902/39137. shtml:甘麗萍，劉其元，吳應梅，等.安徽農學通 報，2009, 15 (5) : 198 ;鐘英，董銀卯，段盛林.中國農業科技導報，2008, 10 (5) : 35.]，因此蘆 薈多糖的分析與檢測是評價蘆薈食品、化妝品和洗滌用品等非藥用產品質量的主要依據。
[0004] 目前，蘆薈多糖含量的測定方法主要有分光光度法[杜海燕，孫家躍.輕工標準與 質量，2004,（3) :42 ;許芳萍，顧文秀，高燕，等.分析試驗室，2007, 26 (12) :64.]、氣相色譜 法[崔莉鳳，王微·色譜，2003, 21 (1):88.]、核磁共振波譜法[Bozzi A, Perrin C, Austin S，et al. Food Chem, 2007, (103) :22.]、高效薄層色譜法[Lobo R,Prabhu K S,Shirwaikar A, et al. Fitoterapia, 2010, (81) :231.]等。分光光度法包括苯酸-硫酸法、剛果紅法[杜 海燕，孫家躍.輕工標準與質量，2004,（3):42.]和茜紅素法[許芳萍，顧文秀，高燕，等.分 析試驗室，2007, 26(12) :64.]，其中苯酚硫酸法的特異性、選擇性差，不能有效地區別麥芽 糖、淀粉、糊精等非蘆薈多糖成分，而這些常被用于摻雜在蘆薈制品中以替代蘆薈多糖[杜 海燕，孫家躍.輕工標準與質量，2004,（3):42.];剛果紅法可避免蘆薈制品的常見摻假物 環糊精和葡萄糖等的干擾，但不能排除麥芽糊精的干擾[杜海燕，孫家躍.輕工標準與質 量，2004,（3) :42.];茜紅素法[許芳萍，顧文秀，高燕，等·分析試驗室，2007, 26(12) :64.] 可避免麥芽糊精、環糊精、淀粉、蔗糖和葡萄糖等常見蘆薈制品摻假物的干擾，但只能給出 蘆薈多糖的總量，不能提供與蘆薈多糖的活性密切相關的分子量及其分布等信息。此外，氣 相色譜法[崔莉鳳，王微.色譜，2003, 21 (1):88.]采用柱前衍生的方法將蘆薈多糖水解 為單糖，只能給出蘆薈多糖的單糖組成；核磁共振波譜法[Bozzi A, Perrin C, Austin S，et al. Food Chem，2007,（103):22.]設備昂貴，不適合大范圍推廣；高效薄層色譜法[Lobo R，Prabhu K S，Shirwaikar A，et &1.卩;11:0七6抑卩1&，2010，（81):231.]雖然能特異性的測 定乙酰化甘露聚糖的含量，但操作繁瑣，而且也不能提供與蘆薈多糖的活性密切相關的分 子量及其分布等信息。中藥指紋圖譜可全面反映中藥材或注射劑的化學成分信息，是從整 體相似性角度定性或定量評價中藥材或注射劑質量的有效方法[國家食品藥品監督管理 總局.中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求（暫行））.(2008-08-15). http: //www. sda. gov. cn/WS01/CL0237/15768. html:李強，樸思邈,張忠亮，等.中草藥，2013, 44 (22) : 3095 ; 孫國祥，豆小文，楊蘭萍，等.色譜，2013, 31 (5): 456;游佳莉，王毓杰，張藝，等.中國中藥 雜志，2015, 40(2) : 362 ;甘秀梅，梁志遠，姜金仲，等.中藥材，2015, 38(2) : 275 ;王亮，張 振秋，鄧仕任，等.中國實驗方劑學雜志，2015, 21 (2) :80 ;王靜，王強，唐軍，等.分析試驗 室，2013, 32(3) : 68 ;張興旺，文懷秀，趙曉輝，等.分析試驗室，2010, 29 (suppl) : 173 ;傅宇 飛，張佩佩，潘再法，等.分析試驗室，2013, 32 (8) : 103.]。鑒于蘆薈凝膠具有和中藥相似的 整體性和模糊性，本發明專利借鑒中藥指紋圖譜的技術和方法，以庫拉索蘆薈凝膠為研究 對象，建立蘆薈凝膠多糖成分凝膠滲透色譜（GPC)指紋圖譜的技術和方法，旨在為蘆薈產 品的真偽鑒別和品質評價提供參考依據。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種蘆薈多糖指紋圖譜的構建方法，借此可將蘆薈多糖指紋 圖譜作為蘆薈食品、保健品、洗滌用品等終端產品的真偽鑒別和品質評價的主要指標之一。 本發明還同時提供了蘆薈多糖的標準指紋圖譜。
[0006] 為達到上述目的本發明采用了以下技術手段：
[0007] -種蘆薈多糖指紋圖譜的構建方法，其特征在于，從蘆薈葉中提取蘆薈多糖，將提 取的蘆薈多糖制備成GPC分析供試液，經凝膠滲透色譜儀分離檢測，獲得蘆薈多糖的指紋 圖譜。
[0008] 在本發明中，優選的，包括如下步驟：
[0009] (1)蘆薈多糖的制備
[0010] 取庫拉索蘆薈鮮葉適量，洗凈后去皮，蘆薈凝膠清洗、切塊，用攪拌機初步破碎后 置于閃式提取器進一步勻漿處理，得凝膠勻漿液；凝膠勻漿液減壓抽濾，收集濾液進行濃 縮，濃縮液冷卻后加入乙醇溶液，4°C冷藏過夜，離心得沉淀；待沉淀中的乙醇揮干后，放 入-40°C冰箱冷凍，然后置于真空冷凍干燥機中凍干，凍干粉研磨，即得蘆薈多糖；
[0011] ⑵蘆薈多糖GPC分析供試液的制備
[0012] 精確稱取步驟（1)制備的蘆薈多糖適量，用NaN03溶液溶解后，在4°C冰箱放置12h 后取出，恢復至室溫后用濾膜過濾，即得蘆薈多糖GPC分析供試液；
[0013] (3)蘆薈多糖的GPC分析
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