一種高性價比的人血液免疫球蛋白g檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及的是生物技術領域，具體涉及的是一種膠乳免疫比濁法人血液免疫球 蛋白G檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 免疫球蛋白G(簡稱IGG)是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總含 量的75%，正常值為9.5~12.5g/L。分子量約為150000道爾頓。
[0003] 當患變態反應性疾病、自身免疫性疾病、各種感染以及多發性骨髓瘤等時，免疫球 蛋白可異常增高。患獲得性免疫缺陷綜合征等免疫缺損病時，免疫球蛋白可異常降低。
[0004] 目前市場上最常見的貝克曼庫爾特(下文簡稱BC)的免疫球蛋白G檢測試劑盒(免 疫比濁法），國食藥監械(進）字2012第2401557號，抗體為IGG抗體(經過處理的山羊血清）， 其產品性能如下:線性范圍2.0~36. Og/L，抗原過剩范圍達到216. Og/L。BC在該項目檢測中 占據市場絕對主流，超半數三甲醫院采用其產品。絕大多數國產試劑雖然價格便宜，但因技 術水平等多種原因試劑性能均無法與BC抗衡，多數試劑說明書并未標注抗原過剩范圍，目 前無國產試劑抗原過剩范圍能超越l〇〇g/L。雖然BC的免疫球蛋白G檢測試劑非常昂貴，但醫 院為了保證臨床可靠性，不得不采用其試劑。市面急需性價比優秀的替代產品。
【發明內容】
[0005] 為了改善上述存在問題，本發明提供了一種高性價比的人血液免疫球蛋白G檢測 試劑盒。
[0006] 為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下： 一種高性價比的人血液免疫球蛋白G檢測試劑盒，包括試劑2，所述試劑2為標記有兔抗 人免疫球蛋白G多克隆抗體的膠乳顆粒溶液。其中，試劑1可選用常規的磷酸鹽緩沖液、 Good ' s緩沖液或甘氨酸緩沖液等。
[0007] 值得說明的是，本發明是針對試劑盒中的試劑2進行改進，然而試劑1選用市面上 的常用試劑均可。
[0008] 由于過低的抗體使用量，在滿足樣本抗體比例不變的情況下，需要樣本稀釋比例 提高，導致過低的樣本量，試劑靈敏度無法滿足臨床使用。抗體量過大，在標記過程中容易 導致膠乳凝聚，試劑批間差異難以控制，并且試劑成本過高，無法接受。膠乳粒徑過小，試劑 靈敏度無法保證，膠乳粒徑過大，膠乳微球顆粒懸浮受到影響，容易沉降，故而，本發明的膠 乳顆粒粒徑范圍為40nm~120nm，每升試劑2中抗體的用量為20ml~30ml 〇
[0009] 具體地，本發明是采用化學偶聯方法將兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗體標記在膠 乳顆粒上。
[0010]作為一種優選，所述試劑盒對樣本進行檢測時，樣本與抗體的重量比為1:48~1: 32。通過上述限定，能夠避免樣本與抗體比例過高或過低，因為樣本與抗體比例過高，將導 致反應體系中抗原過多，降低試劑的抗原過剩范圍甚至線性范圍;過低時，將導致反應體系 中抗原量太少，試劑靈敏度無法滿足臨床使用。
[0011] 所述試劑盒是基于膠乳免疫比濁法檢測人血液免疫球蛋白G，其線性范圍為2g/L ~60g/L，抗原過剩范圍達到400g/L。
[0012] 具體地，所述兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗體為Dako公司生產的兔抗人免疫球蛋 白G多克隆抗體，或為深圳菲鵬生物生產的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗體。
[0013] 另外，所述試劑盒適用于具有自動樣本稀釋功能的全自動分析儀器，如迪瑞、邁 瑞、Roche、Hitachi、01ympus等多種全自動生化分析儀，以及多種特定蛋白分析儀，如國賽 特定蛋白分析儀，貝克800特定蛋白分析系統等。
[0014] 本發明具有以下優點及有益效果： 1、使用本發明的試劑盒對人血液中的免疫球蛋白G進行測定，因線性范圍較進口試劑 提高67%，使用時大幅度減少了需要人工稀釋復測的樣本數量，大幅度節約了人力和試劑， 極大地提高了檢測效率，并節約了成本。
[0015] 2、本發明的試劑盒抗原過剩范圍廣，相比BC試劑提高85%，能夠在該性能上超越市 場最主流的BC試劑，相比BC試劑更能夠有效避免臨床結果被低估甚至假陰性結果的出現， 滿足臨床使用的需求。
[0016] 3、本發明的試劑盒采用成熟的化學偶聯膠乳標記方法，能夠規模化生產，且能夠 配套市面上絕大多數自動化分析儀器使用，便于推廣使用。
[0017] 4、采用本發明的試劑盒進行檢測人血液免疫球蛋白G，可替代進口試劑，節約病患 開支。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發明-實施例1的線性稀釋圖。
[0019]圖2為本發明-實施例2的線性稀釋圖。
[0020]圖3為本發明-實施例3的線性稀釋圖。
[0021]圖4為本發明-實施例4的線性稀釋圖。
[0022]圖5為本發明-實施例5的線性稀釋圖。
[0023]圖6為本發明-實施例6的線性稀釋圖。
[0024]圖7為本發明-實施例7的線性稀釋圖。
[0025]圖8為本發明-實施例8的線性稀釋圖。
[0026]圖9為本發明-實施例9的線性稀釋圖。
[0027]圖10為本發明-實施例10的線性稀釋圖。
[0028]圖11為本發明-實施例11的線性稀釋圖。
【具體實施方式】
[0029] 下面結合實施例對本發明作進一步說明，但本發明的實施方式不限于下列實施 例。
[0030] 免疫檢測(包括免疫比濁和膠乳免疫比濁）需要遵循海登博格原理，可見百度百科 抗原抗體反應原理，抗原抗體的比例在檢測過程中尤為重要，反應體系中抗體濃度一定時， 隨著抗原濃度的增加，抗原抗體復合物沉淀增加，逐漸達到平衡，當抗原濃度過高時，將出 現沉淀解聚甚至不產生沉淀的情況，即HOOK效應或抗原過剩現象(Antigen excess)，在免 疫檢測系統中，該現象將導致被測物濃度被低估甚至假陰性結果出現。所有的免疫檢測，包 括免疫比濁和膠乳免疫比濁，都必須避免高濃度樣本出現HOOK效應。比如檢測免疫球蛋白G 就需要避免變態反應性疾病、自身免疫性疾病、各種感染以及多發性骨髓瘤的病患出現測 定值被低估甚至假陰性結果。在樣本與試劑2比例一定的情況下，試劑2中抗體的使用量以 及效價對于試劑抵抗HOOK效應的能力（即抗原過剩范圍）至關重要。在免疫診斷技術領域， 兔多克隆抗體在免疫診斷中尤其是免疫比濁和膠乳免疫比濁中，因其具有其他種屬抗體所 不具備的非常高的效價(titre)，是提高檢測試劑線性及抗原過剩范圍較為理想的選擇。
[0031] 免疫比濁法測定IGG時，樣本中的IGG與抗IGG抗體反應，形成抗原抗體復合物，在 檢測試劑的線性范圍與抗原過剩范圍一定的情況下，因抗原抗體比例性關系，加入樣本的 多少直接決定了檢測試劑中抗IGG抗體的使用量。雖然減少樣本加入量可以成比例的減少 檢測試劑中抗IGG抗體的使用量，從而降低檢測試劑成本，但是，降低樣本量將同時成比例 的降低檢測試劑的靈敏度。
[0032] 膠乳免疫比濁法可以大幅度提高檢測試劑靈敏度，將免疫比濁法的極限檢測靈敏 度從5mg/L提升到5yg/L，發明人在人血液IGG檢測中，采用膠乳免疫比濁法能夠有效抵消降 低樣本量帶來的檢測試劑靈敏度降低影響;而市面上絕大多數全自動分析儀器都有樣本自 動預稀釋功能，如迪瑞、邁瑞、Roche、Hitachi、Olympus等全自動生化分析儀以及多種特定 蛋白分析儀，如國賽特定蛋白分析儀，貝克曼I_age 800特定蛋白分析系統等，可以由儀器 預先稀釋樣本再加入到反應體系中。發明人研究發現，通過調節樣本自動稀釋比例，能夠在 大幅度降低IGG抗體使用量的同時，保證試劑的線性和抗原過剩范圍，達到甚至超過BC的試 劑性能。故而本發明的發明人研究出了如下試劑盒。
[0033] 實施例1 本實施例的膠乳顆粒粒徑為90nm，每升試劑2標記25ml丹麥Dako公司生產的兔抗人免 疫球蛋白G多克隆抗體(貨號:Q0331)，使用膠乳免疫比濁中最常規的磷酸鹽緩沖液作為試 劑1，采用自動分析儀最常見參數試劑1:試劑2比例180μ1:60μ1，樣本預先稀釋80倍后加入3 μL稀釋過的樣本到反應體系中（即樣本與抗體比例為1:40)。
[0034]使用Hitachi7170全自動生化分析儀，波長為600nm單波長，兩點終點法18-34讀點 計算，數據如下：
具體如圖1所示，圖中方程為線性回歸方程，R2為線性系數，估計值根據稀釋比例帶入 回歸方程計算，R> 0.99，估計值和實測值偏差&