一種保健食品中pde-5抑制劑類違禁藥的非目標物快速篩查檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食品未知成分檢測技術領域，具體地，涉及一種保健食品中roE-5抑制 劑類違禁藥的非目標物快速篩查檢測方法。
【背景技術】
[0002] 保健食品是我國傳統習慣上一種俗稱，學術上稱呼為功能食品。人們的膳食從一 般解決饑餓溫飽的傳統的營養學概念發展到有益健康養生的新的營養學概念，促進了功能 食品誕生與發展。功能食品的概念最早由20世紀80年代早期日本首先提出來，功能食品發 展了三十多年的歷史，然而不同民族和國家地區對此概念的理解和定義存在很大的差異； 目前國際普遍以歐盟對保健(功能)食品的定義;保健食品是指如果能較好地確證一種食品 除提供通常的營養效果之外，還能一種促進機體健康降低疾病風險的方式有益地影響機體 中的一種或一種以上的靶功能的一類食品。隨著保健食品行業的發展，文獻資料研究顯示 保健食品，尤其是保健補酒中添加違禁西藥成分的食品安全問題日益突出。
[0003] 目前保健食品中roE-5抑制劑類違禁藥物檢測技術有HPLC、GC-MS、LC-MS、NMR、LC-FI-ICR-MS、UPLC-TOF-MS、頂S和酶聯免疫法。然而已有文獻研究發現保健食品中添加 TOE-5 抑制劑類違禁藥物達80種以上，常規的色譜聯用質譜分析方法不能全部有效檢測分析這些 違禁藥物成分。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是為了克服現有技術的上述不足，在沒有標準品條件下，提供一種 保健食品中roE-5抑制劑類違禁藥的非目標物快速篩查檢測方法。
[0005] 為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：
[0006] 一種保健食品中PDE-5抑制劑類違禁藥的非目標物快速篩查檢測方法，包括如下 步驟：
[0007] S1.采用QuEChERS技術結合超聲輔助萃取技術對待測保健食品進行前處理萃取， 萃取條件為：向lmL或lg保健食品中加入15mL乙腈與水的溶液(二者體積比6:4)，1.2g硫酸 鎂和〇. 3g氯化鈉分散劑，80mg吸附劑C18，渦旋，超聲10~15min，離心分層后取上清液，上清 液定容稀釋，取lmL再次稀釋后的溶液過有機系濾膜后作為萃取樣液；
[0008] S2.取萃取樣液進行IDA-MS數據采集:IDA-MS篩查分析的條件為:液相分離條件為 流動相A為0.1 %甲酸水溶液，流動相B為乙腈，流速0.5mL/min，梯度洗脫:B相由初始體積比 10%，lmin增至30%，7min增至60%，lmin降至10%，保留3min，柱溫40°C，C18色譜柱;梯度 洗脫方式質譜條件:ESI和APCI復合源;正離子掃描方式;APCI源連接自動校正系統，樣品為 ESI離子化方式，Curtain gas:40psi，離子源gas l:50psi，離子源gas 2:50psi，離子源溫 度500°C，離子源電壓5500V;-級T0F-MS掃描準確質量范圍：100~lOOODa，數據采集時間 100ms，DP: 100V，CE: 10V;二級 IDA-MS 掃描準確質量范圍：50 ~1000Da，DP: 100V，CE:35土 15V;高靈敏模式，數據采集時間50ms，信號閾值lOOcps，IDA實驗每循環采集6次數據，動態 背景減法扣除；
[0009] S3.樣品的IDA-MS高分辨質譜數據分析，利用PeakView數據分析軟件處理獲得目 標物的準確分子量、同位素分子量、分子式、色譜保留時間，以及精確二級碎片分子量;結合 ChemSpider結構數據庫，定性鑒定未知Η)Ε-5抑制劑類西藥成分。
[0010] 本發明選擇伐地那非、偽伐地那非、硫代艾迪那非、羥基紅地那非、Genedenafil、 硫代西地那非、紅地那非、豪莫西地那非、西地那非、羥基豪莫西地那非、R a c xanthoabthrafil、他達那非、氨基他達那非共13種PDE-5抑制劑類違禁藥物進行定量分析 研究，獲得定量分析線性回歸方程。
[0011] 所述保健食品為保健藥酒或保健中藥等食品。
[0012] 與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：
[0013] 1.廣譜性強:本發明采用IDA-MS篩查分析保健食品中TOE-5抑制劑類違禁藥物，利 用TOE-5抑制劑類違禁藥物高分辨Masterviews質譜數據庫，快速定性篩查分析文獻報道86 種此類物質，同時通過數據庫比對鑒定出來新型未報道的TOE-5抑制劑違禁西藥成分，證明 該方法對保健食品中違禁藥物的檢測廣譜性；
[0014] 2.選擇鹽酸伐地那非、他達那非、偽伐地那非等13種roE-5抑制劑類違禁藥物進行 定量分析研究，標準回歸曲線線性好，檢測限低，13種違禁藥物的檢測限在1.2~3yg/L，線 性范圍10~400yg/L;
[0015] 3.基質效應小:本發明采用高分辨質譜IDA-MS的m/z全掃描模式采集數據，目標物 利用提取Masterviews離子流色譜圖，根據高分辨一級和二級質譜定性定量分析；
[0016] 4.精密度和準確度高:本發明在樣品加標回收率實驗中證明，13種roE-5抑制劑類 違禁藥物混標在20，80，200yg/L等3種濃度測定的RSD均在5 %之內；
[0017] 5.穩定性好:本發明在實驗中證明，保健樣品放置2個月之后，所有樣品的準確度 絕對值均小于15%，表明長時間保健食品樣品，不影響本方法對樣品濃度進行準備測定；
[0018] 6. QuEChERS基質分散固相萃取技術與超聲輔助萃取前處理方法簡單，快速，準確； 利用響應曲面實驗設計等方法優化樣品萃取條件，利用加標回收率作為優化指標，在13種 違禁藥物混標在20，80yg/L等濃度加標回收率實驗中，回收率在70.2~91.4%表明該前處 理方法有效性。
【附圖說明】
[0019] 圖1為13種roE-5抑制劑違禁藥物高分辨一級和二級質譜圖；1-1:伐地那非；1-2: 偽伐地那非；1-3:硫代艾迪那非；1-4:羥基紅地那非；1-5: Genedenaf i 1; 1-6:硫代西地那 非；1-7:紅地那非；1-8:豪莫西地那非；1-9:西地那非；1-10:羥基豪莫西地那非；1-11 :Rac xanthoabthrafil; 1-12:他達那非；1-13:氨基他達那非。
[0020] 圖2為13種roE-5抑制劑違禁藥物的色譜圖。
[00211圖3為響應曲面實驗設計優化萃取條件三維圖;A、C、E、I和K分別是Qu EChERS與超 聲相結合前處理的四個因素條件"^!120(，^^八），1%504&似(：1用量（，1^)，吸附劑(：18 (，mg)，超聲時間（，min)每兩個因素對硫代艾地那非回收率的的三維曲面響應圖；B、D、F、H 和L是每兩個因素對Genede nafi 1回收率的三維曲面響應圖。
[0022] 圖4為保健補酒中未知PDE-5抑制劑違禁藥物IDA-MS的鑒定;A、一個保健補酒的 MasterView XICs篩查鑒定圖，B、去甲基西地那非T0F-MS圖，C、去甲基西地那非IDA-MS圖， D、伐地那非IDA-MS圖，E、西地那非IDA-MS圖。
【具體實施方式】
[0023] 下面結合說明書附圖和具體實施例對本發明作出進一步地詳細闡述，所述實施例 只用于解釋本發明，并非用于限定本發明的范圍。下述實施例中所使用的試驗方法如無特 殊說明，均為常規方法;所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，為可從商業途徑得到的試劑 和材料。
[0024] 實施例1
[0025] 1.13種TOE-5抑制劑藥物的標準溶液配制:PDE-5抑制劑藥物標準品各稱取2. Omg， 置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成200yg/mL的標準儲備液。根據實驗需要用甲 醇稀釋配制lOyg/mL混合標準溶液，稀釋配制系列標準工作溶液，4°C保存。
[0026] 2. QuEChERS技術與超聲輔助萃取前處理方法:利用響應曲面實驗設計方法、利用 Box-Behnken實驗設計方案，4個因素分別是，ACN:H20比（，％v/v)，MgS04 & NaCl用量（， mg)，吸附劑C18(，mg)，超聲時間（，min)，二次回歸方程模式預測評估13種TOE-5抑制劑加標 回收率，以來優化四個樣品前