一種氟唑菌酰胺殘留量的gc-ei-ms測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-EI-MS測定方法，更具體地說是采用氣相 色譜-電子轟擊離子源-質譜(GC-EI-MS)定性定量測定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動物 肌肉及制品等復雜基質的動植物源性食品中殘留的氟唑菌酰胺含量的方法，屬于農藥殘留 量的測定技術領域。
【背景技術】
[0002] 氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)是由巴斯夫公司開發的琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌 劑。化學名稱:3_二氟甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'_三氟聯苯-2-基)-1Η-吡唑-4-甲酰胺;分 子式:C18H12F5N30;相對分子質量:381.3;熔點：157°C ;相對密度：1.42。溶劑中的溶解度 (g/L，20°C):丙酮>250、乙腈168、乙酸乙酯123、甲醇53.4、甲苯20.0。氟唑菌酰胺的化學結 構式如下：
[0003] 氟唑菌酰胺具有高效、廣譜、持效、優異的內吸傳導性、同時具有預防和治療作用 等優點。它能抑制孢子發芽、芽孢管伸長、菌絲體生長和孢子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特種作物等的主要病害。該產品通過葉面和種子處理來防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果樹和蔬菜上由殼針孢菌（Septoria)、灰葡萄孢菌（Botrytis)、白粉菌 (Erysiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄銹菌（Puccinia)、絲核菌（Rhizoctonia)、核腔菌 (Pyrenophora spp ·)等引起的病害。其特別適用于豆類植物，防治由鏈格孢菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Botrytis cinerea)、銹病、白粉病和殼針孢菌引起的病害，大豆銹病 (Phakopsora)，棉花上由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)引起的病害以及向日葵和油籽 菜上由鏈格孢菌引起的病害等。在所有試驗劑量下，對所有作物非常安全。氟唑菌酰胺適配 性強，可與吡唑醚菌酯、三唑類殺菌劑和巴斯夫其他產品復配使用。研究表明，氟唑菌酰胺 比市售的酰胺類殺菌劑具有更好的活性，該產品無論在活性、多功能性，還是在內吸性和耐 雨水沖刷性等方面都為現代殺菌劑建立了新標桿。巴斯夫打算將氟唑菌酰胺引入世界上50 多個國家，用于100多種作物上。2011年，氟唑菌酰胺首先在英國登記和上市，現登記和上市 的國家包括澳大利亞、美國、加拿大、歐盟13國、巴西和中國等。公司預測，該產品的年峰值 銷售額可達6億歐元。這是所有SDHI類殺菌劑中，開發公司寄予的期望值最高的產品。
[0004] 隨著氟唑菌酰胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的美國、加拿大等國 家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產品等食品農產品中的最大允許殘留量(MRL)，如美國 規定氟唑菌酰胺在果蔬中的MRL為0.5~30mg/kg，在畜產品及水產品等動物源性食品中MRL 為0 . Olmg/kg，在堅果及糧谷中MRL為0.06~15mg/kg;加拿大規定氟唑菌酰胺在果蔬中的 MRL為0.02~2mg/kg，在畜產品及水產品等動物源性食品中MRL為0.01~0.05mg/kg，在堅果 及糧谷中MRL為0.01~3mg/kg;歐盟、日本等國家規定若田間使用農藥沒有在該國家登記， 沒有制定相應的殘留限量標準時，出口至其國家的食品農產品包括畜禽肉等動物源性食品 中殘留限量均實行〇.〇lmg/L的"一律標準"。
[0005] 現階段，對氟唑菌酰胺殘留量測定方法的研究較少，報道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中氟唑菌酰胺殘留檢測方法，這些檢測方法均采用液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中氟唑菌酰胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS測定食品農產品中農藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優點，但由于其價格較昂貴，很多檢測機構、企業或科研院所未 配置該儀器或配置臺數較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動 相或色譜柱，這樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費比較長的時間對系統進行平衡，這一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質譜(GC-EI-MS)分析食 品農產品中農藥殘留具有很大優勢，由于電子轟擊電離源質譜為通用性檢測器，可實現幾 百種農藥的多殘留分析，可同時定性和定量，價格適中，因此現各種檢測機構和企業均配備 氣相色譜-電子轟擊離子源-質譜儀(GC-EI-MS)對食品農產品中的農藥殘留進行檢測，但迄 今為止未見食品農產品中氟唑菌酰胺殘留量的GC-EI-MS檢測方法的報道，氟唑菌酰胺屬電 負性化合物，由于糧谷、動物源性食品等食品農產品基質比較復雜，須建立凈化效果良好的 樣品前處理方法和儀器分析條件才能滿足檢測要求，因此，建立氣相色譜-電子轟擊離子 源-質譜(GC-EI-MS)定性和定量分析糧谷和動物源性食品中氟唑菌酰胺殘留量的檢測方法 具有重要意義。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-EI-MS測定方法，主要用于測定 糧谷、動物源性食品等復雜基質食品農產品中氟唑菌酰胺殘留量。
[0007] 為實現以上目的，本發明所采用的技術方案是:一種氟唑菌酰胺殘留量的GC-EI-MS測定方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取混勻樣品于具塞離心管中，加入適量水復蘇后，定量加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈 溶液均質或振蕩超聲提取，然后加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，劇烈渦旋 lmin后離心。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至lmL左右，經C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收 集洗脫液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相 色譜-電子轟擊離子源-質譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標準工作溶液的配制 將不含氟唑菌酰胺的同種類基質空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時，得樣品提取凈 化殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，渦旋混勻，配制成至少3個濃度的氟唑菌酰胺系列標準 工作液。
[0011] (4)氣相色譜-電子轟擊離子源-質譜法(GC-EI-MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-EI-MS測定，以標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-EI-MS進行測定，測得樣品液中氟唑菌酰胺的色譜峰面積，代入標準工作曲 線，得到樣品液中氟唑菌酰胺含量，然后根據樣品液所代表試樣的質量計算得到樣品中氟 唑菌酰胺殘留量。若上機溶液中氟唑菌酰胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機溶液濃度稀釋至線性范圍之內。
[0012] 步驟（1)中樣品若為糧谷及動物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充 分浸潤。
[0013] 步驟（1)中采用乙腈提取時加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時加 入乙酸鈉鹽析。
[0014] 步驟(2)中進行C18/PSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時，洗脫體積為6~8mL。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm， 膜厚0.25μπι;進樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進樣，進樣量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0016] 步驟(4)中質譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監測（SIM)模式，監測的離子為：159.0、 160.0、381.1、382.1。
[0017] 步驟(4)中測定樣液和基質標準工作溶液時，若樣液中農藥色譜峰保留時間與標 準溶液中相應農藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均 出現，而且離子豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[0018] 本發明的有益效果在于：
[0019] 本發明利用分散固相萃取技術，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結合GC-EI-MS應用于糧谷、動物源性食品中氟唑菌酰 胺定性確證和定量檢測，平均回收率為84.6%~103.1 %，平均相對標準偏差(RSD)為3.2% ~8.4%，檢出限低于l.OUig/kg，具有操作簡便、快速、準確、靈敏度高及重復性好的優點。 能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應產品安全檢測的技術要求，為保障我國人民食品安全 及對外出口貿易健康發展提供有力的技術支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白豬肉基質中的氟唑菌酰胺的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含氟唑菌酰胺的豬肉空白樣品的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為以不含氟唑菌酰胺的豬肉空白樣品為基質配制的氟唑菌酰胺標準工作曲 線。
【具體實施方式】
[0023]現以以下實施實例來說明本發明，但并不是限制本發明的范圍。
[0024] 實施例中使用的儀器與試劑
[0025] T18Basic均質器（IKA，Germany) ;CR21GHI離心機（日立，Japan) ;MS3基本型旋禍混 合器（IKA，Germany);TurboVap LV型樣品自動濃縮儀（Caliper，USA) ;7890N氣相色譜-5977C質譜儀(Agilent，USA);C18/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)購于天津博納艾杰爾 科技有限公司。
[0026] 試劑
[0027] 乙腈、丙酮、正己燒（HPLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany);無水 硫酸鎂、氯化鈉和乙酸鈉為分析純，均購自國藥集團化學試劑有限公司。
[0028] 標準物質：純度99.5%，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司。
[0029] 實施例1:小麥中氟唑菌酰胺殘留量的檢測
[0030] (1)樣品前處理
[0031] 提取 稱取經充分混勾的5g小麥樣品（研磨成面粉)于50mL離心管中，加入20mL水復蘇30min 后，準確加入20mL含1 %乙酸的乙腈溶液，振蕩提取20min，超聲提取5min，加入3g無水硫酸 鎂和2g乙酸鈉，禍旋lmin后，7000r/min離心5min。離心后，取8mL乙腈提取液于40°C旋蒸或 氮氣吹至近干，加入lmL乙腈渦旋后，待凈化。
[0032] 凈化 用5mL乙腈預洗C18/PSA固相萃取柱，當液面到達吸附劑的頂部時，將上述提取溶液轉 入柱中，用2mL乙腈洗滌試管，并將洗滌液移入SPE柱中，待溶液達到吸附劑頂部時，加入4mL 乙腈至柱子上進行洗脫，洗脫液全部接收到定量