一種瓜類蔬菜中708種農藥殘留gc-q-tof/ms偵測技術的制作方法
【技術領域】
[00011本發明涉及農殘檢測領域，特別涉及一種應用GC-Q-T0F/MS篩查瓜類蔬菜中708種 農殘的偵測方法。
【背景技術】
[0002] 水果蔬菜與人們的生活息息相關，尤其是瓜類蔬菜(黃瓜、南瓜、節瓜、絲瓜、苦瓜、 筍瓜、佛手瓜、棚瓜等）的營養價值備受消費者的青睞。瓜類含碳水化合物、維生素 C、黃瓜素 較多。部分瓜類蔬菜如絲瓜中含有較多量黏質、瓜氨酸:南瓜中含有瓜氨酸、精氨酸;苦瓜中 含有苦瓜甙、S-羥色胺和多種氨基酸。中國中醫學認為苦瓜性寒味苦，入心、肺、胃具有清閑 解渴、降血壓、血脂，祛斑、養顏美容、減肥瘦身、改善睡眠、癰腫痢疾、增強免疫功能，促進新 陳代謝等功效，被人們譽為"植物胰島素"。另外，所有瓜類蔬菜都具有高鉀低鈉的特點，有 降低血壓、保護血管的作用。但是，目前在瓜類蔬菜的種植，生長以及保藏過程中可能使用 的農藥及化學品已超過1100種。然而，伴隨了農藥的廣泛使用，其過量使用、濫用和誤用等 不規范行為也隨之產生，使得農藥殘留于農產品中，從而給人類健康造成潛在威脅，同時也 對農產品的進出口貿易產生了不利影響。
[0003] 早在1976年世界衛生組織(WH0)、糧農組織(FA0)和聯合國環境規劃署(UNEP)共同 建立了全球環境檢測系統/食品項目（Global Environment Monitoring System，GEMS/ Food)，旨在掌握會員國食品污染狀況，了解食品污染物攝入量，保護人體健康，促進貿易發 展。現在，世界各國都把食品安全提升到國家安全的戰略地位。農藥殘留限量是食品安全標 準之一，也是國際貿易準入門檻。同時，對農藥殘留的要求呈現出品種越來越多，限量越來 越嚴格的發展趨勢，也就是國際貿易設立的農藥殘留限量門檻越來越高。現在歐盟已制定 了839種農藥的162248項MRL標準，美國制定了351種農藥的39147項MRL標準，日本制定了 579種農藥的51600多項MRL標準，我國2014年發布了381種農藥的3650項MRL標準。目前，國 際上普遍采用的一律標準限量為l〇yg/kg。因此，食品安全和國際貿易都呼喚高通量快速農 藥殘留檢測技術，這無疑也給廣大農藥殘留分析工作者提供了機遇和挑戰。在目前的眾多 農藥殘留分析技術中，色譜質譜聯用技術是實現高通量多殘留快速檢測的最佳分析手段。 [0004]目前農藥殘留分析多以氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-質譜和液相色譜-質譜聯 用技術為主。這些檢測技術都首先需要農藥標準品對照進行定性。例如，對100種農藥的檢 測就需要準備相應的100種農藥標準品對照，而這100種之外的農藥都會被漏檢。在農獸藥 殘留實驗室的實際工作中，絕大多數實驗室都不會儲備數百種農藥標準品，其原因是農藥 標準品不僅價格昂貴，而且有效期只有2-3年，需要重復投資。一般實驗室常備農藥標準品 只有幾十種，其日常監測的農藥品種也就只限于這幾十種，由此造成食品安全監測漏洞。
【發明內容】
[0005]為了克服上述缺陷，本發明人團隊經過多年潛心研究，研發了708種農藥的精確質 量數據庫以及一種果蔬中708種農藥殘留的GC-Q-T0F/MS偵測技術，實現了不需標準品對 照、即可對瓜類蔬菜中708種農藥殘留進行快速偵測檢測，滿足了當前農產品中農藥殘留高 通量快速檢測的急需。
[0006] 一方面，本發明提供了一種GC-Q-T0F/MS檢測瓜類蔬菜中708種農藥殘留的偵測方 法，其特征在于:建立708種農藥T0F/MS數據庫，同時對瓜類蔬菜中708種農藥進行定性偵測 與確證;該方法包括以下步驟：
[0007] (1)將農藥標準品分別配制成l_5mg/L的標準溶液，設定條件下經GC-QT0F/MS-級 模式全譜數據測定每種標準溶液的全譜數據，分別得到每種農藥的化學分子式、保留時間、 碎片離子精確質量數、離子豐度比；
[0008] (2)將步驟(1)中獲得的一級模式全譜數據，經核實后的碎片離子全掃描質譜圖導 入PCDL軟件中，并與對應的農藥信息相關聯，建成T0F/MS精確質量數據庫，用于數據檢索分 析；
[0009] (3)與步驟(1)相同的設定條件下瓜類蔬菜的測定待測樣品中農藥的全譜數據，得 到其含有的農藥的化學分子式、保留時間、碎片離子精確質量數、離子豐度比；
[0010] (4)對樣品測定結果經精確質量數據庫檢索，對符合鑒定依據的檢出農藥進行準 確鑒定，從而獲得瓜類蔬菜中的農殘種類。
[0011]優選的，通過對瓜類蔬菜進行前處理以獲得瓜類蔬菜的測定待測樣品，所述前處 理方法包括以下程序：
[0012]樣品制備:瓜類蔬菜樣品經0.5-5體積％醋酸乙腈勻漿提取，經脫水和離心、濃縮 后，再經Carbon/NH2柱凈化，乙腈+甲苯洗脫殘留農藥，經再濃縮、過濾后制成待測樣液a。
[0013] 本發明所具有的有益效果：
[0014] 1、本發明以高分辨碎片離子精確質量數、保留時間、離子豐度比等化合物信息為 識別標準，建立的708種農藥偵測和確證技術方法，徹底改變了原有以化合物標準物為參比 的定性模式，是一種不需要標準物對照，快速、高通量、準確可靠的農藥殘留檢測新技術。
[0015] 2、本發明在不需標準物對照的前提下，實現了 708種農藥殘留的定性偵測和確證， 可以大大節省購買標準物的成本，也更加環保、安全。
[0016] 3、本發明可在1小時內完成708種農藥偵測、定性與確證，與傳統檢測方法相比較， 可以提高工作效率數百倍。
[0017] 4、本發明能夠做到對瓜類蔬菜樣品中708種農藥殘留一次性提取凈化，一次進樣 檢測，與傳統檢測方法相比較，可以節省檢測成本、提高工作效率數百倍。
[0018] 5、本發明可以測試的瓜類蔬菜樣品中農藥包括以下物質中的一類或幾類:有機磷 類農藥，氨基甲酸酯類農藥，苯并咪唑類農藥，磺酰脲類農藥，煙堿類農藥，除蟲菊酯類農藥 及其他類型的農藥及代謝物。
[0019] 6、本發明建立的GC-QT0F/MS偵測技術指標:掃描范圍50-600m/z;測定的精確質量 可達O.OOOlm/ζ;質量精度可控制在20ppm以內；掃描速度在50-600m/z范圍為每秒5次。
[0020] 7、本發明提供的一種應用氣相色譜四級桿飛行時間質譜(GC-Q-T0F/MS)快速篩查 瓜類蔬菜中708種農藥殘留的高分辨質譜偵測技術在7個農藥殘留分析實驗室得到了推廣 和應用，經過對30多個省市多個市售瓜類蔬菜樣品的偵測驗證，取得了重要的殘留偵測數 據。
[0021] 8、同時偵測的708種農藥中，偵測靈敏度一律低于標準10微克/千克，滿足各國農 藥殘留MRL水平篩查的要求。
[0022]本發明的其它特征和優點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
【附圖說明】
[0023]附圖是用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具 體實施方式一起用于解釋本發明，但并不構成對本發明的限制。在附圖中：
[0024]圖1是蘭州地區市售黃瓜樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出頻次最高農藥(噠螨靈）結果 示例。
[0025]圖2是蘭州地區市售黃瓜樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出的頻次最高農藥(噠螨靈）的 質譜信息與數據庫進行比對的結果。
[0026]圖3是成都地區西萌蘆樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出頻次最高農藥(芐呋菊酯）結果 示例。
[0027]圖4是成都地區西萌蘆樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出的頻次最高農藥(芐呋菊酯）的 質譜信息與數據庫進行比對的結果。
[0028]圖5是成都地區苦瓜樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出頻次最高農藥(腐霉利)結果示例
[0029] 圖6是成都地區苦瓜樣品GC-Q-T0F/MS技術檢出的頻次最高農藥(腐霉利）的質譜 信息與數據庫進行比對的結果。