一種止痛貼劑的指紋圖譜及其質量檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥品檢測領域，尤其是涉及一種中成藥的高效液相色譜檢測。
【背景技術】
[0002] 消腫止痛貼是以地方藥材沙蒿子為主要原料藥的外用貼劑，經動物實驗和多年臨 床使用驗證，療效確切，具有非常好的消炎止痛功效。臨床用于癤瘡初起，關節腫痛的輔助 治療。自該品種上市以來，經過不斷地技術升級，在產品品質和生產工藝方面都得到了大幅 度地改進。
[0003] 但是對于該產品的質量控制方面，缺乏系統地研究和統一的、適用于工業生產的 標準。張媛媛等人曾經研究沙蒿子的指紋圖譜條件(張媛媛，喬延江，HPLC法測定沙蒿子種 子中兩種二氫黃酮的含量，北京中醫藥大學學報，2008,31(1) :58~60.)。但是按照其條件 檢測消腫止痛貼中的沙蒿子有效成分時，發現其峰型很差，分離度不好，達不到中國藥典要 求，不利于企業大生產適用。李莎莎等研究了沙蒿子中有效成分的含量測定，但其采用的是 等度洗脫，不能滿足指紋圖譜檢測的要求。（李莎莎，史新元，展曉日等，沙蒿子子中總黃酮 及圣草酚-7-甲醚、異櫻花素的含量測定，中華中醫藥雜志，2009,24(9) :1223~1225.)
[0004] 因此，需要提供一種新的檢測方法，能同時滿足沙蒿子種子中多種有效成分的含 量測定和指紋圖譜檢測。
【發明內容】
[0005] 為了解決上述至少一個技術問題，本發明提供了一種消腫止痛貼劑有效成分的測 定方法。
[0006] 本發明提供的測定方法，包括如下步驟：
[0007] (1)對照品溶液的制備:稱取圣草酚-7-甲醚、異櫻花素對照品，加乙醇制得混合對 照品溶液。
[0008] (2)供試品溶液的制備:取消腫止痛貼的藥貼，粉碎，過篩，加入乙醇溶液，提取20-50min，放至室溫，加入乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，蒸干，殘渣加入乙醇溶解， 搖勻即得供試品溶液。
[0009] (3)測定法:吸取混合對照品溶液和供試品溶液，注入高效液相色譜儀，得到色譜 圖，其中，高效液相色譜儀的色譜條件如下：
[0010] 色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，
[0011] 流動相:乙腈-0.2%甲酸為流動相，進行梯度洗脫，梯度程序如下表
[0012]
[0013]流動相的流速為 0.8-1.2ml/min，柱溫 30-40°C，
[0014]檢測波長：290±3nm。
[0015] 本發明所選擇的流動相和洗脫梯度是經過實驗驗證的，和現有技術比較，能夠同 時滿足消腫止痛貼劑中指紋圖譜檢測和兩種黃酮類有效成分的含量測定。
[0016] 根據本發明實施方式之一，步驟(1)中混合對照品溶液中圣草酚-7-甲醚和異櫻花 素的濃度分別為40μg/ml和20μg/ml。
[0017]根據本發明實施方式之一，洗脫梯度程序可以為：〇~lOmin，乙腈12% ;10~ 15111；[11，乙臆12%~16%;15~30111；[11，乙臆16%;30~65111；[11，乙臆16%~30%;65~80111；[11，乙 腈30%~35% ; 80~llOmin,乙腈35%。也就是采用如下表所示的洗脫梯度。
[0018]
[0020] 根據本發明實施方式之一，乙醇的濃度為55~85%。
[00211根據本發明實施方式之一，乙醇的濃度優選為80%。
[0022] 根據本發明實施方式之一，步驟(2)中所述藥貼經粉碎、過篩后加入乙醇，使得每 l〇〇ml提取溶劑中所含藥粉為lg~5g。
[0023] 根據本發明實施方式之一，步驟(2)中提取方法為超聲提取或加熱回流提取。
[0024]根據本發明實施方式之一，步驟(2)中提取方法為超聲提取25~35min。進一步地， 超聲功率可以為500W，頻率為40kHz。
[0025] 根據本發明實施方式之一，色譜柱可以為Agilent ZORBAX SB_C18柱。
[0026] 根據本發明實施方式之一，柱溫優選35°C。
[0027 ]根據本發明實施方式之一，流動相的流速優選lm 1 /m i η。
[0028] 根據本發明實施方式之一，檢測波長為290nm。
[0029] 本發明還提供了一種消腫止痛貼劑高效液相指紋圖譜的建立方法，其特征在于包 括以下步驟：
[0030] (1)對照品溶液的制備：稱取圣草酚-7-甲醚、異櫻花素對照品，加入濃度為55~ 85 %的乙醇制得混合對照品溶液。
[0031 ] (2)供試品溶液的制備:取消腫止痛貼的藥貼，粉碎，過篩，加入濃度為55~85%的 乙醇溶液，使得每l〇〇ml提取溶劑中所含藥粉為lg~5g，超聲提取或加熱回流提取20-50min，放至室溫，加入濃度為55~85%的乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，蒸干， 殘渣加入濃度為55~85 %的乙醇溶解，搖勻即得供試品溶液。
[0032] (3)獲得色譜圖：以對照品溶液作為參照物，將供試品溶液和對照品溶液注入高效 液相色譜儀，得到色譜圖，其中，所述高效液相色譜儀的色譜條件如下：
[0033] 色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，
[0034] 流動相:乙腈-0.2%甲酸為流動相，進行梯度洗脫，梯度程序如下：
[0035]
[0036]
[0037]流動相的流速為 0 · 8-1 · 2ml/min，柱溫 30-40°C，
[0038] 檢測波長：290±3nm。
[0039] (4)生成對照指紋圖譜:選擇合格的多批消腫止痛貼劑的指紋圖譜，以圣草酚-7-甲醚為參比峰，得到11個共有峰的圖譜，按中位數法計算生成標準對照指紋圖譜，其中，指 紋圖譜相對保留時間為：
[0040]
[0041 ]圖形見附圖2。
[0042]根據本發明的實施方式之一，乙醇的濃度為80%。
[0043] 根據本發明的實施方式之一，色譜柱可以為Agilent ZORBAX SB-C18柱。
[0044] 根據本發明的實施方式之一，步驟（1)中混合對照品溶液中圣草酚-7-甲醚和異櫻 花素的濃度分別為40μg/ml和20μg/ml。
[0045] 根據本發明的實施方式之一，檢測波長為290nm。
[0046] 根據本發明的實施方式之一，步驟(2)中提取方法為超聲提取25~35min。
[0047] 需要說明的是，本發明中所采用的消腫止痛貼是以地方藥材沙蒿子為主要原料藥 的外用貼劑，例如，亞寶藥業集團股份有限公司生產的批號為1504288、1505048、1505201、 1505202、1505203、1505204、1505205、1505206、1505207、1505208、1505209、1505210、 1505211、1505212、1505213、1505214、1505215、1505216、1505219、1505221、1505223、 1505224的消腫止痛貼。
[0048] 本發明對現有技術中的HPLC指紋圖譜方法進行了優化，經過對流動相和梯度洗脫 條件等方法進行改進，使得圖譜的主峰分離度明顯改善，達到藥典要求，同時對照峰的峰形 也明顯變好，可以滿足工業化大生產的需要。
[0049] 本發明附加的方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發明的實踐了解到。
【附圖說明】
[0050] 本發明的上述和/或附加的方面和優點從下面結合附圖對實施例的描述中將變得 明顯和容易理解，其中：
[0051 ]圖1根據本發明提供方法所得對照品指紋圖譜；
[0052]圖2根據本發明實施例所得供試品色譜圖；
[0053] 圖3圣草酚-7-甲醚標準品紫外吸收圖；
[0054] 圖4異櫻花素標準品紫外吸收圖；
[0055] 圖5消腫止痛貼劑紫外吸收圖；
[0056] 圖6不同濃度提取溶劑所得供試品色譜圖；
[0057] 圖7不同提取溶劑用量所得供試品色譜圖；
[0058] 圖8不同提取方式所得供試品色譜圖；
[0059] 圖9不同提取時間所得供試品色譜圖；
[0060] 圖10不同超聲條件所得供試品色譜圖；
[0061 ]圖11不同品牌色譜柱所得供試品色譜圖；
[0062]圖12不同柱溫所得供試品色譜圖；
[0063] 圖13不同流速所得供試品色譜圖；
[0064] 圖14精密度試驗指紋圖譜；
[0065]圖15重復性試驗指紋圖譜；
[0066]圖16中間精密度試驗指紋圖譜；
[0067]圖17穩定性試驗指紋圖譜；
[0068] 圖18不同儀器耐用性試驗指紋圖譜；
[0069] 圖19色譜柱耐用性試驗指紋圖譜；
[0070] 圖20消腫止痛貼劑標準指紋圖譜；
[00川圖21圣草酚-7-甲醚對照品標準曲線；
[0072]圖22異櫻花素對照品標準曲線；
[0073] 圖23文獻方法梯度洗脫所得對照品色譜圖；
[0074] 圖24文獻方法梯度洗脫所得樣品色譜圖；
[0075] 圖25本發明優化方法梯度洗脫所得對照品色譜圖；
[0076] 圖26本發明優化方法梯度洗脫所得樣品色譜圖；
[0077] 圖27流動相為乙腈-0.1 %甲酸所得樣品色譜圖；
[0078]圖28流動相為乙腈-0.2%甲酸所得樣品色譜圖。
【具體實施方式】
[0079]下面詳細描述本發明的實施例。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，僅 用于