基于液相色譜儀檢測莫西克汀中間產物保護物含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及莫西克汀中間產物檢測方法的技術領域，特別是涉及一種基于液相色 譜儀檢測莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法。
【背景技術】
[0002] 眾所周知，莫西克汀作為新一代驅蟲抗生素，對內寄生蟲和外寄生蟲有高度驅除 活性，主要用于反芻獸和馬的大多數胃腸線蟲和費線蟲，反芻獸的某些節肢動物寄生蟲，以 及犬惡絲蟲發育的幼蟲;屬于大環內酯類抗蟲生物制劑，具有高效驅蟲活性和長效、安全等 特征；中間產物保護物是莫西克汀的中間產物之一，目的是為更有效地提取得到高含量的 最終產物。莫西克汀結構復雜，官能團較多，經上保護反應得到中間產物保護物的步驟，可 以降低原料的消耗，但保護物含量的檢測目前未見報道。
[0003] 目前莫西克汀中間產物保護物含量的檢測在中國及EP、USP藥典上均未體現。而莫 西克汀中間產物的轉化不僅提高了最終產物的含量，也減少了原料的消耗，因而為嚴格控 制產品質量，莫西克汀中間產物之一保護物含量的檢測及其合適有效的檢測方法就尤為重 要。
【發明內容】
[0004] 為解決上述技術問題，本發明提供一種能將尼莫克汀及保護物完全分離，準確度 高，重復性好，線性關系數高，精密度< 2.0%，靈敏度高，結果滿意的基于液相色譜儀檢測 莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法。
[0005] 本發明的一種基于液相色譜儀檢測莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法，包 括以下步驟：
[0006] a、制備供試品儲備液:精密量取莫西克汀中間產物之一保護物適量，用95 %乙醇 稀釋至效價約為5000ug/mL，制成供試品儲備液；
[0007] b、制備供試品溶液:精密量取5mL供試品儲備液置50mL容量瓶中，并向容量瓶中 加內標物尼莫克汀25mg，用95%乙醇溶解定容至刻度，蓋好瓶塞，用倒轉的方式使瓶內的液 體混合均勻，于20-30°(3放置5-1011 ;
[0008] C、制備對照品溶液A:精密稱定10mg尼莫克汀置50mL容量瓶中，用95%乙醇溶解定 容至刻度；
[0009] d、制備對照品溶液B:精密稱取1 Omg保護物置50mL容量瓶中，用95 %乙醇溶解定容 至刻度；
[0010] e、色譜條件：采用Luna C18 5.0um 4.6*150mm色譜柱，以85%甲醇為流動相，色譜 柱的柱溫控制在25-35°C，流速為1.0~1.5mL/min，檢測波長為240nm，進樣量20yL;
[0011] f、系統適應性試驗:打開液相色譜儀，預熱5min，將對照品溶液連續進樣3針，要求 內標物和中間體保護物分離度滿足要求；
[0012] g、測定:分別精密量取供試品溶液、對照品溶液各20yL，注入液相色譜儀，按步驟e 的色譜條件進行測定；
[0013] h、按內標法計算出莫西克汀中間體含量。
[0014] 本發明的一種基于液相色譜儀檢測莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法，所 述的步驟b中最佳溫度為25°C，最佳放置時間為9h。
[0015] 本發明的一種基于液相色譜儀檢測莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法，所 述的步驟e中色譜柱的最佳柱溫為30°C，最佳流速為1. OmL/min。
[0016] 與現有技術相比本發明的有益效果為:通過上述方法的設置，能將尼莫克汀及保 護物完全分離，準確度高，重復性好，線性關系數高，精密度< 2.0%，靈敏度高，結果滿意。
【附圖說明】
[0017] 圖1是保護物濃度與峰面積線性關系曲線。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例，對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細描述。以下實施例用于 說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
[0019] 本發明的一種基于液相色譜儀檢測莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法，包 括以下步驟：
[0020] a、制備供試品儲備液:精密量取莫西克汀中間產物之一保護物適量，用95 %乙醇 稀釋至效價約為5000ug/mL，制成供試品儲備液；
[0021 ] b、制備供試品溶液:精密量取5mL供試品儲備液置50mL容量瓶中，并向容量瓶中加 內標物尼莫克汀25mg，用95%乙醇溶解定容至刻度，蓋好瓶塞，用倒轉的方式使瓶內的液體 混合均勻，于20-30°(3(最佳溫度為25°〇放置5-1011(最佳放置時間為911) ;
[0022] c、制備對照品溶液A:精密稱定10mg尼莫克汀置50mL容量瓶中，用95%乙醇溶解定 容至刻度；
[0023] d、制備對照品溶液B:精密稱取10mg保護物置50mL容量瓶中，用95 %乙醇溶解定容 至刻度；
[0024] e、色譜條件:采用Luna C18 5.0um 4.6*150mm色譜柱，以85%甲醇為流動相，色譜 柱的柱溫控制在25-35°C (最佳柱溫為30°C)，流速為1.0~1.5mL/min(最佳流速為1. OmL/ min)，檢測波長為240nm，進樣量20yL;
[0025] f、系統適應性試驗:打開液相色譜儀，預熱5min，將對照品溶液連續進樣3針，要求 內標物和中間體保護物分離度滿足要求；
[0026] g、測定:分別精密量取供試品溶液、對照品溶液各20yL，注入液相色譜儀，按步驟e 的色譜條件進行測定；
[0027 ] h、按內標法計算出莫西克汀中間體含量。
[0028] 通過上述方法的設置，能將尼莫克汀及保護物完全分離，準確度高，重復性好，線 性關系數高，精密度< 2.0 %，靈敏度高，結果滿意。
[0029] 本發明的一種基于液相色譜儀檢測莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法，步 驟h中內標法的計算公式如下：
[0030] 含量
[0031 ] 式中：f:相對校正因子
[0032] Ax、As :供試品、內標物主峰面積
[0033] Cx、Cs:供試品、內標物濃度(ug/mL)
[0034]本發明的一種基于液相色譜儀檢測莫西克汀中間產物之一保護物含量的方法，其 整體試驗方法如下：
[0035] 1.儀器與試劑
[0036] 1.1儀器
[0037]
[0040] 2.溶液配制
[0041 ] (1 )、制備供試品儲備液:精密量取莫西克汀中間產物之一保護物適量，用95 %乙 醇稀釋至效價約為5000ug/mL，制成供試品儲備液；
[0042] (2)、制備供試品溶液:精密量取5mL供試品儲備液置50mL容量瓶中，并向容量瓶中 加內標物尼莫克汀25mg，用95%乙醇溶解定容至刻度，蓋好瓶塞，用倒轉的方式使瓶內的液 體混合均勻，于20-30°(3放置5-1011 ;
[0043] (3)、制備對照品溶液A:精密稱定10mg尼莫克汀置50mL容量瓶中，用95 %乙醇溶解 定容至刻度；
[0044] (4)、制備對照品溶液B:精密稱取10mg保護物置50mL容量瓶中，用95%乙醇溶解定 容至刻度；
[0045] (5)、制備對照品溶液C:精密稱定內標物尼莫克汀lOOmg置50mL容量瓶中，用95% 乙醇溶解定容至刻度；
[0046] (6)、制備對照品溶液D:精密稱定保護物對照品100mg置50mL容量瓶中，