一種奧利司他的快速檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于分析化學檢測領域，涉及一種奧利司他的快速檢測方法。
【背景技術】
[0002] 近年來，隨著人們生活水平的提高，飲食結構不合理、缺乏運動等因素引起的肥胖 問題日益嚴重。世界衛生組織數據顯示:2014年18歲及以上的成年人中有39%的人超重，13% 的人肥胖。肥胖可誘發或加重糖尿病、脂肪肝、心腦血管系統疾病、睡眠呼吸暫停綜合癥、肌 肉骨骼疾患以及某些癌癥等，已成為影響人類健康的十大主要威脅之一。
[0003] 隨著人們對減肥的迫切需求，各種減肥產品也日益增多，魚龍混雜。化學藥物快速 減肥通常會帶來明顯的不良反應，而保健品、食品和中成藥大部分來源于天然物質，因此具 有較高的安全性，在減肥市場中廣受消費者青睞，但其存在起效慢或效果不明顯的缺點。為 謀取高額利益，部分不法分子利用人們急于見效的心理，在其中非法添加具有減肥作用的 化學藥品，目前常見的有酚酞、西布曲明等，消費者在不知情的情況下長期服用會使健康受 到不同程度的危害，嚴重者甚至可導致死亡。
[0004] 奧利司他(Orlistat)是目前市場上占有率較高的化學減肥藥，1999年被批準上 市，是一種強效和長效的特異性胃腸道脂肪酶抑制劑，可阻斷飲食中三分之一的脂肪水解 和吸收，達到控制體重的作用。目前報道的主要不良反應為便秘、腹痛、腹瀉、頭暈、月經紊 亂、皮疹等，并存在發生肝損害及乳腺癌的風險，還可抑制脂溶性維生素的水解和吸收，另 外奧利司他與一些藥物之間可發生相互作用，對人體產生不同程度的危害。由于奧利司他 減肥快速顯著，且便宜易得，具有被非法添加到減肥類保健品、食品和中成藥中的風險，因 此亟需開發快速、可靠的奧利司他的檢測方法，以保障人民群眾的飲食用藥安全。
[0005] 目前，對奧利司他檢測尤其是作為非法添加的藥物的測定方法報道較少，國家藥 品監督管理局于2006年批準了針對治療肥胖癥的中成藥的藥品檢驗補充檢驗方法只適用 于減肥類中成藥中非法添加西布曲明、麻黃堿、芬氟拉明的檢測，并沒有奧利司他非法添加 的檢測方法。目前報道的奧利司他的檢測方法主要為高效液相色譜法和液相色譜-質譜聯 用法。國內奧利司他及其制劑的含量測定均參考《美國藥典》采用高效液相法，在195-210 rim的低波長檢測，不適用于復雜基質樣品的檢測；肖松、馬微、王柯等分別利用液相色譜-質 譜聯用的方法進行了減肥保健食品中奧利司他的檢測。
[0006] 上述方法雖然能夠達到檢測目的，但是設備昂貴，運行費用高，對操作人員的要求 也較高，不利于在基層部門廣泛開展，人們需要一種操作簡單、速度較快、成本較低的檢測 方法，以便快速鑒別出保健品、食品、中成藥中是否添加奧利司他。利用化學反應的快速鑒 別法，以其成本低，覆蓋面廣等優點得到很多人的重視。本發明針對目前市場上的大部分保 健品、食品、中成藥提供一種準確快速的奧利司他非法添加的檢測方法，以滿足檢驗及監管 的需要。
【發明內容】
[0007] 本發明針對現有技術中存在的上述缺點，提供一種奧利司他的快速檢測方法，具 有分析成本低、不需要使用貴重分析儀器，專屬性強，靈敏度高，檢驗結果正確率高等優點， 適用于減肥類中成藥、保健食品和食品中是否添加奧利司他的現場快速檢測。
[0008] 為實現上述目的本發明采取如下技術方案： 一種奧利司他的快速檢測方法，步驟為： 1) 向待測樣品中按體積比1:2加入提取液，振搖2~4min，靜置分層3~5min，取上層溶 液，然后加入與所取上層溶液等體積的洗滌液，輕搖1~2min，靜置分層3~5min，再次取上 層溶液； 2) 向步驟1)上層溶液中按體積比2:1:1加入鹽酸羥胺溶液和強堿溶液，輕搖2~4min， 靜置分層3~5min，取下層溶液，滴加酸化液調節溶液pH至2~4，然后滴加2~3滴顯色液，混 勻后，通過溶液顏色判斷待測樣品是否含有奧利司他。
[0009] 所述顏色判斷的方法為:溶液顏色變酒紅色為待測樣品中含有奧利司他。
[0010]步驟1)中，所述的提取液為非極性有機溶劑，優選石油醚、正己烷和環己烷中的一 種或幾種混合。
[0011] 步驟1)中，所述的洗滌液為體積濃度60~80%的低級醇水溶液;所述低級醇為甲醇 和乙醇中一種或二者混合，優選體積濃度70%的乙醇水溶液。
[0012] 步驟2)中，所述的鹽酸羥胺溶液為鹽酸羥胺-醇-水溶液，其中鹽酸羥胺質量分數 為3.0~4.0%，優選3.5%，醇體積分數60~80%，優選70%;所述的醇為低級醇，優選甲醇和乙 醇中一種或二者混合;所述的鹽酸羥胺溶液優選鹽酸羥胺-乙醇-水溶液。
[0013] 步驟2)中，所述的強堿溶液為強堿-醇-水溶液，其中強堿濃度0.5~1.5mol/L，優 選lmol/L，醇體積分數60~80%，優選70%;所述的強堿為氫氧化鈉和氫氧化鉀中一種或二者 混合;所述的醇為低級醇，優選甲醇和乙醇中一種或二者混合;所述的強堿溶液優選為氫氧 化鈉-乙醇-水溶液。
[0014] 步驟2)中，所述的酸化液為無機酸水溶液，濃度為0.5~1.5mo 1 /L，優選lmo 1 /L，所 述的無機酸為鹽酸、硫酸和硝酸的一種或幾種混合，所述的酸化液優選鹽酸的水溶液。
[0015] 步驟2)中，所述的顯色液為三氯化鐵-水溶液，質量濃度為6~12%，優選9%。
[0016] 奧利司他化學名為（3S，4S)-3 -己基-4 -[ (2S)-2 -羥基十三烷基]-2 -氧雜 環丁酮N-甲酰基-L-亮氨酸酯，白色結晶性粉末，不溶于水，易溶于氯仿，極易溶于甲醇和乙 醇。化學結構中具有酯鍵和酰胺鍵，尤其是不穩定的四元內酯環結構，在堿性條件下易與鹽 酸羥胺作用生成羥肟酸衍生物，在酸性條件下與高價鐵離子發生絡合反應，呈色，因此利用 羥肟酸鐵反應可以快速鑒別奧利司他。但中成藥、保健食品和食品中成分復雜，有大量有色 物質（如植物色素等），他們中有些能溶于有機溶劑，而有些則可溶于水，如不分離，則會嚴 重干擾快速檢測方法的顯色反應的觀察，難以得出正確的判斷結果。
[0017]奧利司他在甲醇、乙醇、氯仿、石油醚等有機溶劑中均具有較好的溶解性，但在提 取植物色素含量較多或含咖啡成分的樣品時，石油醚等非極性溶劑的提取液顏色較甲醇、 乙醇等極性溶劑淺，且方便下一步洗滌、萃取等凈化，故選擇非極性溶劑為提取液可降低植 物色素的干擾。根據奧利司他在低級醇水溶液中溶解度低的特點，對提取液用適宜比例低 級醇水溶液洗滌，可以預先去除部分色素的干擾。根據奧利司他在堿性條件下與鹽酸羥胺 反應生成羥肟酸衍生物，極性顯著增大，選擇適宜比例的低級醇的水溶液可以把羥肟酸衍 生物從非極性溶劑中萃取，實現與有色干擾物的分離。萃取液經酸化后，以三氯化鐵溶液為 顯色液時，反應顯色明顯。
[0018]本發明與現有技術相比，有益效果如下： 1) 待測樣品通過提取、洗滌、與鹽酸羥胺溶液和強堿溶液反應萃取、酸化顯色四步即可 檢出樣品中是否含有奧利司他，且所用提取液、洗滌液、萃取液、檢測劑均為普通的化學試 劑，操作簡便，分析成本低； 2) 待測樣品經預處理后再與檢測劑反應，可以排除相關因素的的干擾，更有利于對溶 液顏色的觀察，對樣品中是否有奧利司他做出更準確地判斷。
[0019] 3)本發明的檢測方法中，所用提取液、洗滌液、萃取液、檢測劑的專屬性強，通過提 取、洗滌、萃取過程中三次利用不同物質溶解性差異分離除去干擾物質，使顯色反應的靈敏 度提高、檢測結果正確率高、顯色反應迅速，現象明顯，適用于現場快速檢測。
【具體實施方式】
[0020]下面結合具體實施例進一步描述本發明，在不脫離本發明上述技術思想情況下， 根據本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均包括在本發明的范圍內。 [0021 ]本發明快速檢測方法驗證： 在選擇低級醇的水溶液時，本發明考察了以不同濃度的乙醇水溶液為萃取溶劑時，萃 取石油醚(60-90°C )中的奧利司他、減肥茶樣品中的植物色素、羥肟酸衍生物的萃取率。結 果見下表1: 表1不同濃度萃取溶劑的萃取率
實驗結果發現：乙醇水溶液濃度與奧利司他、羥肟酸衍生物及植物色素的萃取率正相 關，但對羥肟酸衍生物萃取率遠大于奧利司他和植物色素。因此，根據羥肟酸衍生物與植物 色素的萃取率差異，選擇60%~80%的低級醇的水溶液即可實現羥肟酸衍生物的良好萃取， 降低約75%植物色素的干擾。進一步的，在前一步驟的洗滌過程中，選擇同濃度的低級醇溶 液為洗滌液，在減少奧利司損失的基礎上，可以去除可溶于該濃度低級醇溶液的植物色素， 避免其對下一步萃取顯色的干擾。
[0022] 實施例1:茶劑的檢測 試劑配制：提取液為石油醚(60_90°C);洗滌液為70%(v/v)乙醇水溶液;鹽酸羥胺溶液 為3.5wt%鹽酸輕胺-70%( v/v)乙醇-水溶液;強堿溶液為lmol/L氫氧化鈉-70%( v/v)乙醇-水 溶液;酸化液為lmol/L鹽酸水溶液;顯色液為9wt%的三氯化鐵水溶液。
[0023] 樣品：半生緣天