一種信號放大方法及相關裝置的制造方法
【技術領域】
[0001 ]本發明設及一種用于檢測祀物質的信號放大方法及相關裝置。
【背景技術】
[0002] 簡單、靈敏、有效的檢測技術在疾病診斷、新藥開發、生化防御等領域意義重大。中 國專利CN 01822390.7公開了一種檢測分析物的測試條測試法，該方法是首先對檢測抗體 (祀向試劑)進行生物素(配體)化修飾，示蹤顆粒標記了抗生物素抗體(標記物），運樣在檢 測過程中會形成"樹枝狀"結構，使檢測信號得W放大。基于運一原理制備的乙肝表面抗原 檢測試紙條較Abbott公司的乙肝表面抗原檢測試紙條更為靈敏。中國專利CN200880132189 公開了一種免疫層析測試中信號放大的方法W及使用該方法的免疫層析試劑盒，該方法采 用兩種不同粒徑的偶聯物超靈敏檢測祀物質的信號方法，也是采用了樹枝狀信號放大技 術。
[0003] 現有的檢測祀物質(或分析物)的信號放大方法只能針對一種祀物質進行分析，但 在檢測領域，往往需要對樣品中的多種祀物質進行超靈敏檢測，方可作出準確可靠的判斷， 現有的檢測方法往往是每個項目單獨檢測，然后綜合各個檢測結果，得出檢測結論，且需要 準備多種試紙條并采用多份樣品進行測試。現有的聯檢方法都是在各個單檢體系中尋找一 個折衷的體系建立起來的，運個折衷的體系往往是W犧牲檢測靈敏性為代價的，所W目前 已有的聯合同時檢測方法的靈敏性往往不夠理想，無法滿足現實需要。
【發明內容】
[0004] 本發明所要解決的技術問題是提供一種用于檢測祀物質的信號放大方法及相關 裝置，該信號放大方法不但能夠高靈敏檢測祀物質，而且實現了多種祀物質的同時檢測。 [000引本發明所要解決的技術問題通過W下技術方案予W實現： 一種檢測祀物質的信號放大方法，包括： 將具有能特異性結合不同祀物質的多種第一分子的偶聯體與多種祀物質結合，偶聯體 還包括連接體、和與多種第一分子和連接體結合的第一顆粒； 橋接體與偶聯體的連接體結合，橋接體包括能特異性結合偶聯體的連接體的第二分 子； 通過能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ分子分別捕獲與橋接體結合后的偶聯體上 的多種祀物質。
[0006] -種檢測祀物質的信號放大方法，包括： 將具有能特異性結合不同祀物質的多種第一分子的偶聯體與多種祀物質結合，偶聯體 還包括與多種第一分子結合的第一顆粒； 橋接體與偶聯體的第一分子結合，所述橋接體包括能特異性結合偶聯體的多種第一分 子的第二分子； 通過能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ分子分別捕獲與橋接體結合后的偶聯體上 的多種祀物質。
[0007] 優選地，所述祀物質為蛋白質分子、蛋白質分子復合物、核酸、核酸復合物中的任 意一種。
[0008] -種檢測祀物質的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第一結 合墊、層析膜、吸水墊;所述第一結合墊包被有偶聯體和橋接體，其中該偶聯體包括能特異 性結合不同祀物質的多種第一分子、連接體及與多種第一分子和連接體結合的第一顆粒， 橋接體包括能特異性結合偶聯體的連接體的第二分子;所述層析膜上不同區域的檢測線固 定有能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ分子。
[0009] -種檢測祀物質的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第一結 合墊、層析膜、吸水墊;所述第一結合墊包被有偶聯體和橋接體，其中該偶聯體包括能特異 性結合不同祀物質的多種第一分子、和與多種第一分子結合的第一顆粒，橋接體包括能特 異性結合偶聯體的連接體的第二分子;所述層析膜上不同區域的檢測線固定有能特異性結 合不同祀物質的多種第Ξ分子。
[0010] -種檢測祀物質的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第二結 合墊、第Ξ結合墊、層析膜、吸水墊;所述第Ξ結合墊包被有偶聯體，該偶聯體包括能特異性 結合不同祀物質的多種第一分子、連接體及與多種第一分子和連接體結合的第一顆粒，所 述第二結合墊包被有具有能特異性結合偶聯體的連接體的第二分子的橋接體;所述層析膜 上不同區域的檢測線固定有能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ分子。
[0011] -種檢測祀物質的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第二結 合墊、第Ξ結合墊、層析膜、吸水墊;所述第Ξ結合墊包被有偶聯體，該偶聯體包括能特異性 結合不同祀物質的多種第一分子、和與多種第一分子結合的第一顆粒;所述第二結合墊包 被有具有能特異性結合偶聯體的多種第一分子的第二分子的橋接體;所述層析膜上不同區 域的檢測線固定有能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ分子。
[0012] 優選地，所述第二結合墊與第Ξ結合墊調換位置順序。
[0013] -種檢測祀物質的免疫層析裝置，包括反應微孔和免疫層析試紙，該免疫層析試 紙包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第四結合墊、層析膜、吸水墊;所述反應微孔含有 偶聯體，該偶聯體包括能特異性結合不同祀物質的多種第一分子、連接體及與多種第一分 子和連接體結合的第一顆粒;所述第四結合墊包被有具有能特異性結合偶聯體的連接體的 第二分子的橋接體，所述層析膜上不同區域的檢測線固定有能特異性結合不同祀物質的多 種第Ξ分子。
[0014] -種檢測祀物質的免疫層析裝置，包括反應微孔和免疫層析試紙，該免疫層析試 紙包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第四結合墊、層析膜、吸水墊;所述反應微孔含有 偶聯體，該偶聯體包括能特異性結合不同祀物質的多種第一分子、和與多種第一分子結合 的第一顆粒;所述第四結合墊包被有具有能特異性結合偶聯體的多種第一分子的第二分子 的橋接體，所述層析膜上不同區域的檢測線固定有能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ分 子。
[0015] -種祀物質的免疫滲濾裝置，由滲濾卡、封閉液、偶聯體、橋接體、洗涂液組成，其 中滲濾卡由卡底、吸水墊料、滲濾膜、卡蓋依次疊加組成，該免疫滲濾裝置的檢測方法包括 W下步驟： 1) 往滲濾膜上滴加一滴封閉液； 2) 液體濾過之后，滴加一滴血清樣本； 3) 血清濾完之后，滴加一滴洗涂液； 4) 濾完之后滴加一滴權利要求1或2所述的偶聯體、一滴權利要求1或2所述的橋接體； 5) 等液體濾完之后，滴加一滴洗涂液； 6) 濾完之后，觀察結果； 其中，滲濾膜上不同區域的檢測點固定有能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ分子。
[0016] 本發明具有如下有益效果： 本發明的信號放大方法將具有能特異性結合不同祀物質的多種第一分子與樣品中不 同祀物質結合后與橋接體結合，隨后由位于固相上的能特異性結合不同祀物質的多種第Ξ 分子捕獲固定，從而得到信號放大效果，不但能夠高靈敏檢測祀物質，而且實現了多種祀物 質的同時檢測。同樣，也使用該信號放大方法制造出了高靈敏度且同時檢測多種祀物質的 免疫層析試紙條或免疫層析裝置，其層析膜上不同區域上設有多個檢測線，各個檢測線的 夾屯、反應不會相互影響，達到了一份液體樣品同時檢測多種祀物質，且在同樣條件下進行， 既節約了檢測時間，也減小了檢測誤差，同時降低了檢測成本。
【附圖說明】
[0017] 圖1為本發明同時檢測兩種祀物質的信號放大的原理示意圖； 圖2為本發明一種使用該信號放大方法同時檢測多種祀物質的免疫層析試紙的結構示 意圖； 圖3為本發明另一種使用該信號放大方法同時檢測多種祀物質的免疫層析試紙的結構 示意圖。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合附圖及實施例對本發明進行詳細的說明，實施例僅是本發明的優選實施 方式，不是對本發明的限定。
[0019] 本發明所提及的術語"連接體"表示通過特異性反應(如:抗原-抗體反應、核酸雜 交反應)與第Ξ分子特異性結合使得偶聯體與橋接體結合的材料;術語"橋接體"表示通過 特異性反應(如:抗原-抗體反應、核酸雜交反應)與偶聯體上的連接體或第一分子進行特異 性結合將偶聯體橋接在一起形成樹枝狀結構的材料。
[0020] 本發明的信號放大方法中，偶聯體包括多種第一分子、連接體及與多種第一分子 和連接體結合的第一顆粒，多種第一分子能分別特異性結合不同的祀物質;橋接體包括能 特異性結合偶聯體的連接體的第二分子;在檢測時，偶聯體上多種第一分子與樣品中的不 同祀物質結合，隨后橋接體的第二分子與偶聯體的連接體結合將偶聯體橋接在一起形成多 個樹枝狀結構，該樹枝狀結構上含有多種不同的祀物質，位于固相上的能特異性結合不同 祀物質的多種第Ξ分子捕獲該樹枝狀結構上的多種祀物質(偶聯體的第一分子與位于固相 上的第Ξ分子分別結合同一祀物質上的不同位點），進而達到放大信號的目的。當橋接體的 第二分子可與偶聯體的第一分子結合，則偶聯體上可不含有連接體。
[0021] 所述祀物質可W為蛋白質分子、蛋白質分子復合物、核酸、核酸復合物中的任意一 種，還可w是其他能夠發生特異性結合的分子。
[0022] 多種第一分子包括至少兩種能特異性結合不同祀物質的單克隆抗體或多克隆抗 體，但不局限于抗體。多種第Ξ分子包括至少兩種能特異性結合不同祀物質的單克隆抗體 或多克隆抗體，但不局限于抗體。所述第一分子和第Ξ分子可W相同或不同。
[0023] 連接體可W是蛋白質、核酸、多糖、膚等可W與橋接體發生特異性結合的材料。
[0024] 橋接體可W是能特異性結合偶聯體的連接體或第一分子的第二分子，還可W是偶 聯有能特異性結合偶聯體的連接體或第