一種抗SS-A(Ro60)抗體試劑盒及其檢測方法【
技術領域：
】[0001]本發明設及磁微粒化學發光免疫診斷領域，特別是設及一種抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒及其檢測方法。【
背景技術：
】[0002]干燥綜合癥A型抗原SS-A(R〇60)是細胞中的一類小核糖核酸-蛋白質復合物，主要存在于細胞質中，是由蛋白質（簡稱Ro蛋白）和一組YRNA組成的。此核糖核酸蛋白質復合物至少由分子量為52kD和60kD的兩個Ro蛋白質組成。抗SS-A(R〇60)抗體作為抗可提取核抗原抗體（extractablenuclearantigen，ENA)中的抗體之一，與原發性干燥綜合癥(primaiTSjogrensyn化ome,PSS)、系統紅斑狼瘡（systemiclupuse巧thematosus，化E)、干燥綜合癥（Sjogrensyn化ome,SS)、新生兒紅斑狼瘡（neona1:allupuse巧thematosus,NLE)、類風濕性關節炎（Rheumatoidarthritis,RA)等結締組織疾病密切相關。因而抗SS-A(R06O)抗體的檢測對結締組織疾病的診斷和鑒別診斷具有極其重要的意義。[0003]目前對于抗SS-A(R〇60)抗體的檢測方法已有報道，對于此病的檢測方法主要為間接免疫巧光法和酶聯免疫吸附法，但運些方法都存在著不足之處；一、間接免疫巧光法該法的基本原理是血清樣本中的特異性抗體與切片中的抗原特異性結合后，繼用間接巧光抗體，與抗原抗體復合物結合，形成抗原抗體巧光復合物。在巧光顯微鏡下，根據復合物的發光情況來確定所檢測的結果。該方法評價：由于結合在抗原抗體復合物上的巧光素抗體增多，發出的巧光亮度強，因而其敏感性強。但是其不足也是明顯的：(1)運用此法是有可能出現假陽性的。[0004](2)在分析結果時無法根據分子量的大小區分非特異性反應。[0005](3)操作相對復雜，需要價格較昂貴的巧光顯微鏡，在很多基層醫院難W推廣，同時，不適用于樣本量較大的實驗室和診斷醫院。[0006](4)巧光測定中的本底較高，巧光免疫技術用于定量測定有一定困難。[0007]巧)結果判定需要有經驗的專業人員，分析結果的客觀性不足。[000引二、酶聯免疫吸附法ELISA檢測抗SS-A(R060)抗體，簡便易行，特異性高，與間接免疫巧光法聯合檢測，可為臨床對抗核抗體的診斷和治療提供更為客觀的實驗依據。但與其他生物檢測或免疫檢測比較，運種化ISA檢測方法、技術、工具或產品仍有較多的不足而使其應用受限，運些不足主要包括W下幾個方面：(1)檢測試劑在檢測過程中為開放方式，不但容易受外界環境的影響，而且容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果；(2化LISA檢測范圍和靈敏度都比較低。[0009](3化LISA方法的檢測時間較長，完成一個測試一般需要2個小時W上，不能完全滿足臨床上的快速診斷的需求。[0010](4化LISA方法不能隨機進樣檢測，檢測結果存在滯后性。【
發明內容】[0011]本發明主要解決的技術問題是提供一種抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒及其檢測方法，具有穩定性好，靈敏度高，重復性好等優點。[0012]為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是:提供一種抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒，包括生物素化SS-A(R〇60)抗原、校準品、質控品、AP-抗人IgG抗體、磁微粒試劑、化學發光底物和清洗液，所述生物素化SS-A(R〇60)抗原為偶聯有生物素的SS-A(R〇60)抗原，所述AP-抗人IgG抗體是AP標記的抗人IgG抗體，所述磁微粒試劑是表面有親和素的納米磁微粒懸浮液。[0013]在本發明一個較佳實施例中，所述生物素化SS-A(R〇60)抗原是生物素與SS-A(R〇60)抗原分子表面的-N出基團反應得到的。[0014]在本發明一個較佳實施例中，所述校準品是由含有抗SS-A(R〇60)抗體的人血清配制而成，用于得到校準曲線;所述質控品是由含有抗SS-A(R〇60)抗體的人血清配制而成。[0015]在本發明一個較佳實施例中，所述磁微粒試劑中磁微粒的直徑為0.1-0.5μηι，所述磁微粒試劑具有超順磁性。[0016]在本發明一個較佳實施例中，所述化學發光底物中包括有3-(2-螺旋金剛燒)-4-甲氧基-4-(3-憐氧酷)-苯基-1,2-二氧環乙燒二鋼鹽AMPPD，在堿性憐酸酶的催化下釋放光子。[0017]提供一種用抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒進行檢測的方法，包括步驟為:將樣本與磁微粒試劑、生物素化SS-A(R〇60)抗原混勻得到第一復合物，對所述第一復合物進行洗涂，再加入AP-抗人IgG抗體混勻，得到第二復合物，對所述第二復合物進行洗涂，再加入化學發光底物，測定發光結果。[0018]在本發明一個較佳實施例中，所述方法包括步驟為:將樣本與磁微粒試劑、生物素化SS-A(R〇60)抗原混勻，在37°C下解育15min，得到第一復合物，對所述第一復合物洗涂3次，再加入AP-抗人IgG抗體，混勻并在37°C下解育15min，得到第二復合物，對所述第二復合物洗涂3次，再加入化學發光底物，混勻并在37°C下解育5min，測定發光結果。[0019]本發明的有益效果是:本發明的抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒及其檢測方法，采用全自動磁微粒化學發光檢測方法，選取堿性憐酸酶AP-金剛燒AMPPD體系，具有穩定性好，靈敏度高，重復性好等優點，同時大大縮短了檢測時間，完成一個測試所需的總時間近在50分鐘W內，而且操作簡易方便，真正實現了檢測全自動化。【附圖說明】[0020]為了更清楚地說明本發明實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可W根據運些附圖獲得其它的附圖，其中：圖1是本發明抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒進行全自動化學發光檢測的原理圖；圖2是本發明抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒的實際檢測濃度與理論濃度的線性回歸圖。【具體實施方式】[0021]下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發明保護的范圍。[0022]實施例一；提供一種抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒，包括生物素化SS-A(R〇60)抗原、校準品、質控品、AP-抗人IgG抗體、磁微粒試劑、化學發光底物和清洗液。所述生物素化SS-A(R〇60)抗原為偶聯有生物素的SS-A(R〇60)抗原。所述AP-抗人IgG抗體是AP標記的抗人IgG抗體，是將堿性憐酸酶AP與抗人IgG抗體偶聯。所述磁微粒試劑是表面有親和素SA基團的當前第1頁1 2