一種水果中類胡蘿卜素合成能力的檢測方法
【專利說明】一種水果中類胡蘿卜素合成能力的檢測方法
[0001]
技術領域
[0002]本發明涉及一種水果生物能力的檢測方法，具體而言涉及一種水果中類胡蘿卜素合成能力的檢測方法。
【背景技術】
[0003]類胡蘿卜素是一類重要的天然色素的總稱，目前已經發現近800種天然的類胡蘿卜素。類胡蘿卜素是影響動植物生存以及人類健康的重要物質，類胡蘿卜素及其衍生物可以參與人類視覺的形成，提高人體免疫力，減少心血管疾病的風險，以及保障人類的生殖發育等。水果通常具有合成類胡蘿卜素的能力，食用水果也是人體獲取類胡蘿卜素的主要途徑之一，準確檢測水果中類胡蘿卜素的合成能力，對于評價水果對人體的健康功能以及培育水果新品種均具有重要意義。不同水果合成類胡蘿卜素的能力不同，有的水果能夠大量合成類胡蘿卜素并且在果實內不斷累積，有的水果雖然有較強的類胡蘿卜素合成能力，但是所合成的類胡蘿卜素在果實內不斷降解，使得累積量較小，而有的水果類胡蘿卜素合成能力較弱，果實內類胡蘿卜素累積量也較小。這樣，當直接對水果進行檢測并發現水果內類胡蘿卜素含量較小時，往往很難判定是水果本身類胡蘿卜素合成能力弱，還是因降解所致，這就為評價水果的類胡蘿卜素合成能力帶來了困難。針對僅有較少類胡蘿卜素累積量的水果，目前還沒有一種能夠有效地揭示其類胡蘿卜素真實合成能力的檢測方法。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種水果中類胡蘿卜素合成能力的檢測方法，該檢測方法能夠避免直接測定時因類胡蘿卜素降解導致的不利影響，所得結果更能夠客觀反映水果合成類胡蘿卜素的真實能力。
[0005]為了實現上述目的，本發明采取以下技術方案:
一種水果中類胡蘿卜素合成能力的檢測方法，包括如下步驟:
(a)配置混合水溶液和色素提取液，所述混合水溶液中含有質量分數為0.2-0.3%的2-(4-硫代氯苯)三乙胺鹽酸鹽以及質量分數為2~4%的甘油，所述色素提取液中按質量比含有正己烷:丙酮:無水乙醇=1~3:0.5~1.5: 0.5~1.5，并且含有質量分數為
0.005-0.02%的2，6- 二叔丁基-4-甲基苯酚；
(b)將待檢測的水果在所述混合水溶液中浸泡后取出并在室溫下避光存放7~15天，然后將果皮與果肉分離，并分別將果皮和果肉在液氮條件下研磨后凍干得到果皮粉末和果肉粉末；
(c)利用所述色素提取液分別提取果皮粉末和果肉粉末內的色素，然后通過高效液相色譜利用番茄紅素標準曲線法定量檢測番茄紅素的含量；
(d)根據番茄紅素含量的多少評價水果中類胡蘿卜素合成能力的高低。
[0006]優選的，所述步驟(c)中，通過高效液相色譜進行檢測的色譜條件為:流動相包括A相和B相，A相中按質量比為乙腈:甲醇=3:1，并且含有質量分數為0.01%的2，6_ 二叔丁基-4-甲基苯酚和0.05%的三乙胺，B相為甲基叔丁基醚，并且含有質量分數為0.01%的2，6-二叔丁基-4-甲基苯酸，流速為1 mL/min，色譜柱型號為Devolosil C30，洗脫條件為0-10 min:A_B 相體積之比 95:5 ; 10-19 min A-B 相體積之比 86:14 ； 19-29 min:A_B 相體積之比 75: 25 ；29-54 min:A_B 相體積之比 50:50 ；54-66 min:A_B 相體積之比 26:74 ；67min:A-B相體積之比95:5 ;進樣量為5 μ L ;采用二極管陣列檢測器，檢測波長450 nm。
[0007]進一步優選的，所述步驟(c)中，在利用所述色素提取液分別提取果皮粉末和果肉粉末內的色素時，分別稱取所述果皮粉末和果肉粉末各0.5 g于10 mL離心管中，每份樣品設3次重復，加入5 mL所述色素提取液，超聲波萃取20 min，然后6000 g離心10 min,將上清液取出，再向裝有樣品的離心管中加入5 mL色素提取液，重復萃取二次，并將上清液合并，然后在真空濃縮儀中濃縮上清液至干燥得到色素；準確吸取150 μ L甲基叔丁基醚充分溶解所述色素，13000 g離心20-30 min，取上清液經0.22 μ m微孔濾膜過濾后上樣經高效液相色譜進行檢測。
[0008]更進一步的，所述步驟(a)中，所述混合水溶液中含有質量分數為0.25%的
2-(4-硫代氯苯)三乙胺鹽酸鹽以及質量分數為3%的甘油，所述色素提取液中按質量比含有正己烷:丙酮:無水乙醇=2:1:1，并且含有質量分數為0.01%的2，6_ 二叔丁基-4-甲基苯酚；所述步驟(b)中，將待檢測的水果在所述混合水溶液中浸泡2~5分鐘后取出并在室溫下避光存放9~11天，然后將果皮與果皮下0.5厘米的果肉分離。
[0009]上述待檢驗的水果優選桃、杏、或者蘋果。
[0010]目前研究認為，類胡蘿卜素的合成起源于類胡蘿卜素前體，類胡蘿卜素前體合成第一種類胡蘿卜素后開始依次單路徑轉化到番茄紅素，番茄紅素以下的降解多為多路徑降解，即番茄紅素降解為多種產物色素，這些產物色素再沿各自路徑進行降解。因此，如果能夠將色素降解阻斷在番茄紅素階段，使類胡蘿卜素前體合成的色素降解至番茄紅素階段后不再繼續降解而是不斷累積，這樣通過檢測番茄紅素的累積量即可客觀反應果實合成類胡蘿卜素的能力。本專利正是基于此點，采用番茄紅素環化酶抑制劑2-(4-硫代氯苯)三乙胺鹽酸鹽(CPTA)對果實進行處理，進而阻斷番茄紅素的降解，從而達到使番茄紅素不斷累積的目的。同時為了配合順利檢測番茄紅素，本專利具體限定了混合水溶液、色素提取液的組成和配比，同時給出了具體的操作步驟和操作條件，最后得到了較為理想的結果。
【附圖說明】
[0011]圖1是本方法檢測原理示意圖；
圖2是CPTA處理后桃果實的表型變化；
圖3是檢測桃中番茄紅素含量的高效液相色譜圖；
圖4是不同桃品種果實經CPTA處理后的番茄紅素積累水平。
【具體實施方式】
[0012]本發明的技術原理如圖1所示，圖1中A路線代表自然條件下果實類胡蘿卜素的合成與降解途徑，用一條總路徑表示，而未區分單路徑降解和多路徑降解，此路線中因類胡蘿卜素較大程度的降解而得到較多的類胡蘿卜素降解產物出路線表示CPTA處理果實后類胡蘿卜素的合成與降解途徑，同樣未區分單路徑降解與多路徑降解，該條路線表示，因為CPTA對番茄紅素的阻斷作用，使得類胡蘿卜素以番茄紅素的形式大量累積，而得到較少的類胡蘿卜素降解產物，因此通過檢測番茄紅素的累積量可以評價果實類胡蘿卜素的合成能力。
[0013]本發明檢測方法適用于多種水果，下面以桃果實為例來說明具體步驟和操作條件:
(a)配置混合水溶液，混合水溶液中含有質量分數0.2-0.3%的2-(4-硫代氯苯)三乙胺鹽酸鹽以及質量分數2~4%的甘油，具體配置時，2- (4-硫代氯苯)三乙胺鹽酸鹽與甘油的質量分數可以分別為0.2%、2%，或者0.3%、4%，或者0.25%、3%等組合，配好之后備用。配置色素提取液，色素提取液按質量比含有正己烷:丙酮:無水乙醇=1~3:0.5~1.5: 0.5-1.5,并且含有質量分數為0.005-0.02%的2，6- 二叔丁基-4-甲基苯酚，具體配置時，各組分含量可以為正己烷:丙酮:無水乙醇=1:0.5: 0.5，0.005%的2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚，或者正己烷:丙酮:無水乙醇=3:1.5:1.5，0.02%的2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚，或者正己烷:丙酮:無水乙醇=2:1:1，0.01%的2，6_ 二叔丁基-4-甲基苯酚等組合，這些配比不同的溶液在使用時都能達到基本相同的效果。本例選2-(4-硫代氯苯)三乙胺鹽酸鹽與甘油的質量分數分別為0.25%、3%的混合水溶液和正己烷:丙酮:無水乙醇=2:1:1，0.01%的2，6- 二叔丁基-4-甲基苯酚的色素提取液。
[0014](b)采集擬檢測目標時期的桃的果實，用水清洗干凈，然后放入上述混合水溶液中浸泡，浸泡時間一般3~5分鐘即可，長時間浸泡