一種強力天麻杜仲膠囊的特征圖譜檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及藥物成份鑒別和質量檢測技術領域，具體設及一種強力天麻杜仲膠囊 的特征圖譜檢測方法。
【背景技術】
[0002] 強力天麻杜仲膠囊由天麻、杜仲、獨活、制附子等十二味中藥制備而成；具有散風 活血，舒筋止痛的功效，用于中風引起的筋脈擧痛，肢體麻木，腰腿酸痛，頭痛頭昏等癥。中 藥復方制劑藥味多，成分復雜，用部分成分的含量測定不能全面鑒別和控制中藥復方制劑 質量；中藥特征圖譜是一種綜合、可量化的質量控制鑒別手段，能夠較好反映中藥復雜的化 學成分，已成為公認的鑒別中藥和評價其質量的有效手段，是一種良好的色譜鑒別方法。 目前尚無強力天麻杜仲膠囊特征圖譜的研究報道，因此，對于強力天麻杜仲膠囊的鑒別和 質量評價，現有技術依然存在不足。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是為了更加全面的鑒別和控制強力天麻杜仲膠囊的質量，提供一種 采用HPLC強力天麻杜仲膠囊的特征圖譜檢測方法，可用于強力天麻杜仲膠囊的鑒別和質 量控制。
[0004] 本發明的技術方案如下： 一種強力天麻杜仲膠囊的特征圖譜檢測方法，它是分別制備供試品溶液，供試品溶液 包含堿性條件乙酸乙醋萃取樣品（A部位）和酸性條件乙酸乙醋萃取樣品度部位）；同時制 備對照品溶液；將供試品溶液和對照品溶液分別進行色譜條件測定；將供試品溶液A、B兩 個部位的數據分別生成特征圖譜進行精密度試驗、穩定性試驗和重復性試驗；建立強力天 麻杜仲膠囊的特征圖譜，并對特征圖譜進行相似度評價；確定色譜峰的歸屬從而鑒別出強 力天麻杜仲膠囊的成份。
[0005] 所述供試品溶液的制備如下：取膠囊內容物約Ig，精密稱定，置磨口燒瓶中，精密 加入70%乙醇30血，稱定稱重，水浴回流2h，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，混勻，濾 過，用少量70%乙醇洗涂，合并濾液和洗涂液，蒸至近干；殘渣加水15 使溶解，用石油酸 萃取3次，每次10mU棄去石油酸層，水層用氨水調抑11~12,用乙酸乙醋萃取4次，每次 10 111以合并乙酸乙醋層，蒸干，得堿性乙酸乙醋萃取部位（A部位）；經堿性乙酸乙醋萃取后 的水層用稀鹽酸調抑至1~2,用乙酸乙醋萃取4次，每次10血，合并乙酸乙醋層，蒸干，得 酸性乙酸乙醋萃取部位度部位）；將A部位、B部位殘留物分別用70%甲醇溶解定容至2mL， 搖勻，高速離屯、10min,取上清液，即得。
[0006] 所述對照品溶液的制備方法如下：取綠原酸、天麻素、紫花前胡巧、7-徑基香豆 素、原兒茶酸、紫云英巧、沒食子酸適量，精密稱定，用70%甲醇溶解，分別制成相應的對照 品混合溶液。 W07] 所述色譜條件測定的色譜條件是：采用C0RTECSTMCis色譜柱，流動相為乙 臘-0. 1%憐酸水溶液，梯度洗脫，進樣量5μL;體積流量0. 5min/mL;檢測波長220nm;柱溫 40 〇C。
[0008] 所述建立強力天麻杜仲膠囊的特征圖譜是將強力天麻杜仲膠囊分別制備供試品 溶液，進行色譜條件測定，分別記錄HPLC色譜圖；將A、B兩個部位的數據分別導入"中藥色 譜指紋圖譜相似度評價系統（2004A)"，生成特征圖譜；W其中一個批號樣品的色圖譜為參 照圖譜，通過多點校正和自動匹配，生成對照特征圖譜；經分析確定A部位的色圖譜中有28 個色譜峰為共有特征峰，B部位的色圖譜中有18個色譜峰為共有特征峰。
[0009] 所述確定色譜峰的歸屬為：在A部位指認了 3個色譜峰，分別為1號峰：天麻素、 8號峰：紫花前胡巧、9號峰：7-徑基香豆素；在B部位指認了 4個色譜峰，分別為2號峰：沒 食子酸、5號峰：原兒茶酸、8號峰：綠原酸、17號峰：紫云英巧。
[0010] 本發明建立了強力天麻杜仲膠囊堿性乙酸乙醋和酸性乙酸乙醋提取部位的特征 圖譜，并用于強力天麻杜仲膠囊的鑒別和質量評價，分別標定了 28和18個共有峰，分別指 認了 3個和4個色譜峰，10批制劑特征圖譜的相似度在0. 85~0. 99。本發明的方法準確、可 靠，可用于強力天麻杜仲膠囊的鑒別和質量控制。
【附圖說明】
[0011] 圖1展示了 10批強力天麻杜仲膠囊A部位，B部位的特征圖譜；圖中，A:A部位； B:B部位。 圖2展示了強力天麻杜仲膠囊特征圖譜與各對照品的色譜比較圖；圖中，A:A部位； 1.天麻素，8.紫花前胡巧，9.7-徑基香豆素；B:B部位；2.沒食子酸，5.原兒茶酸，8.綠原 酸，17.紫云英巧。
【具體實施方式】
[0012] 下面結合附圖和實施例對本發明作進一步的詳細說明，但本發明的保護范圍不受 具體實施例的任何限制，而是由權利要求加W限定。 陽〇1引 實施例1 : 1儀器與材料： 叫tiMate3000型高效液相色譜儀(包括系統控制器，輸液累，脫氣組件，低壓梯度組 件，自動進樣器，柱溫箱，溫控樣品室，UV-DAD檢測器，化romeleon色譜數據工作站)，AE240 型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司），CQ-250A-ST型超聲波清洗器（上海躍進 醫用光學器械廠），超純水機（四川沃特爾科技發展有限公司）。
[0014]強力天麻杜仲膠囊 10 批（11254011、11254018、12254001、12254002、13254001、 13254003、14254001、14254002、14254004、14254006,編號S1~S10)由貴州宏宇藥業有限公 司提供；綠原酸（110753-201415)、天麻素（110807-201306)購自中國食品藥品檢定研究 院；紫花前胡巧、7-徑基香豆素、原兒茶酸、紫云英巧、沒食子酸為從強力天麻杜仲膠囊中 分離獲得，經光譜分析鑒定其結構，并經HPLC峰面積歸一化法測得其純度均大于98%。
[0015] 乙酸乙醋（分析純，上海申博化工有限公司），甲醇、乙醇（分析純，上海振興化工 一廠），乙臘（色譜純，SK化emicals公司），鹽酸（分析純，重慶川東有限公司），氨水（分 析純，重慶江川化工有限公司），水為蒸饋水。
[0016] 2方法與結果： 2. 1對照品溶液的制備：取綠原酸、天麻素、紫花前胡巧、7-徑基香豆素、原兒茶酸、紫 云英巧、沒食子酸適量，精密稱定，用70%甲醇溶解，分別制成相應的對照品混合溶液。 陽017] 2. 2供試品溶液的制備：取膠囊內容物約Ig，精密稱定，置磨口燒瓶中，精密加入 70%乙醇30血，稱定稱重，水浴回流2h，放冷，用70%乙醇補足減失的重量，混勻，濾過，用 少量70%乙醇洗涂，合并濾液和洗涂液，蒸至近干。殘渣加水15血使溶解，用石油酸萃取3 次，每次10血，棄去石油酸層，水層用氨水調抑11~12,用乙酸乙醋萃取4次，每次10血， 合并乙酸乙醋層，蒸干，得堿性乙酸乙醋萃取部位（A部位)。經堿性乙酸乙醋萃取后的水層 用稀鹽酸調抑至1~2,用乙酸乙醋萃取4次，每次10血，合并乙酸乙醋層，蒸干，得酸性乙 酸乙醋萃取部位（B部位)。將A部位、B部位殘留物分別用70%甲醇溶解定容至搖勻， 高速離屯、10min(10000r·min1)，取上清液，即得。 陽01引 2. 3色譜條件： C0RTECSTMCis(2. 7μπι，4. 6X150mm)色譜柱；乙臘-0. 1%憐酸水梯度洗脫，見表1 ;進 樣量5μL;體積流量0. 5min/mL;檢測波長220皿；柱溫40°C。
[0019] 表1梯度洗脫程序 2. 4方法學考察： 2. 4. 1精密度試驗：取批號13254001的膠囊，按"2. 2"項下方法制備供試品溶液，連 續進樣6次，按"2. 3"項下色譜條件進行測定(見圖2)，采用"中藥色譜指紋圖譜相似度評 價系統（2004A)"對測定結果進行相似度計算，并對A部位W紫花前胡巧（8號峰）為參照峰 (Sa)，B部位W原兒茶酸（5號峰）為參照峰（?)分別計算A，B部位的共有色譜峰的相對保 留時間和相對峰面積的