一種檢測水產品中6種含硫類致嗅物質的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于水產品檢測技術領域，具體涉及一種檢測水產品中6種含硫類致嗅物 質的方法。
【背景技術】
[0002] 含硫類致嗅物質多為揮發性含硫化合物（volatilesulfurcompounds，VSC)，主 要包括硫化氫（hydrogendisulfide,H2S)、甲硫醇（methanethiol，MT)、羰基硫（carbonyl sulfide，COS)、甲硫釀（dimethylsulfide，DMS)、二硫化碳（carbondisulfide，CS2)、二 甲二硫（dimethyldisulfide,DMDS)、二甲三硫（dimethylTrisulfide，DMTS)和二甲四硫 (dimethyltetrasulfide，DMTeS)，其嗅閾值（odorthresholdconcentration，0TC) -般 都很低，即使以很低的濃度存在于環境及水生動物體內也會產生嗅味問題。當含硫類致嗅 物質通過食物鏈被水產動物攝食而進入體內，并蓄積達到一定限量后，會導致水產品產生 明顯的異味，引起消費者明顯的不適應。另外，大部分含硫類致嗅物質有較強的毒性，即使 很低的濃度，也能造成對人呼吸系統的損害，在高濃度條件下暴露危害最大，可以導致昏 迷。此外，硫化氫可與人體內細胞色素、氧化酶及該類物質的二硫鍵作用，影響細胞氧化過 程，造成細胞組織缺氧，危及人類的生命。因此，提供一種有效檢測水產品中6種含硫類 致嗅物質的方法就非常重要。
【發明內容】
[0003] 本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術現狀而提供一種操作簡便快速、 能有效地減少了基體成分的干擾、高靈敏度、高分辨率，利用氣相色譜-質譜定性定量的功 能，對水產品中揮發性含硫類致嗅物質進行檢測。
[0004] 本發明檢測水產品中6種含硫類致嗅物質的方法，其步驟如下：
[0005] 1)對標準品的配置：
[0006] 準確稱量6種含硫類致嗅物質的標準品用正己烷溶解來配置標準品溶液，優選標 準品溶液的濃度為l〇ng/ml-1000ng/ml;
[0007] 2)待檢測樣品前處理：
[0008] 取待檢測的水產品樣品粉碎后，加入正己烷進行超聲提取30min，提取結束后低溫 條件下離心分出有機相；
[0009] 作為優選，超聲提取時保持溫度在30°C以下；
[0010] 3)測定：
[0011] 標準品通過頂空進入質譜，進行一級準確質量數的采集，掃描采集參數；其中頂空 條件為平衡溫度110°c，平衡時間15min;進樣針溫度120°C，傳輸線溫度130°C;頂空瓶壓力 172kPa，加壓時間3min，進樣時間0. 05min，干吹2min，分流進樣，分流比5:1 ;
[0012] 色譜條件如下：
[0013] 色譜柱為60mX0. 4mmX0. 32μπι的DB-1柱；升溫程序：起始溫度40°C，保持3min， 以10°C/min升溫至110°C，再以15°C/min升溫至200°C，再以40°C/min升溫至240°C;進 樣口溫度：250°C;載氣為氦氣He(純度>99. 999% );隔墊吹掃流量：3ml/min;進樣模式：不 分流進樣；進樣量1. 〇μ1 ;
[0014] 質譜條件：
[0015] 離子源溫度：230°C;四極桿溫度：150°C;接口溫度：240°C;電離方式為電子轟擊 (EI)離子源；電子能量為70eV;電子倍增器電壓為1671V;S頂采集模式，掃描質量范圍： 40~350m/z;閾值：150 ;采樣頻率：2 ;溶劑延遲：4min。
[0016] 4)選取不同種類的水產品粉碎后，加入正己烷進行超聲提取30min，提取結束后 低溫條件下離心分出有機相；然后對有機相按照步驟3)進行測定，確定是否含有含硫類致 嗅物質。
[0017] 所述的6種含硫類致嗅物質，是硫化氫（hydrogendisulfide,H2S)、甲硫醇 (methanethiol，MT)、甲硫釀（dimethylsulfide，DMS)、二硫化碳（carbondisulfide， CS2)、二甲二硫（dimethyldisulfide,DMDS)、二甲三硫（dimethylTrisulfide，DMTS)。
[0018] 通過上述優化建立水產品中含硫類致嗅物質快速、高效、靈敏的檢測方法。現有技 術相比，本發明的優點在于：本發明的檢測方法操作簡便快速，靈敏度高，水產品基質下其 檢出限可達2ppb以下，其回收率及重復性能滿足日常檢測的要求，采用基質分散法凈化樣 品，有效地減少了基體成分的干擾，而且，本方法具有高通量、高靈敏度、高分辨率，高質量 精確度及可行的線性范圍，利用氣相色譜質譜定性定量的功能，對水產品中含硫類致嗅物 質進行檢測，大大地減少了假陽性等誤判事件，極大地提高了檢測機構對水產品風險的監 測能力，經檢測后的水產品更為衛生安全。
【附圖說明】
[0019] 圖1 :6種含硫類致嗅物質標準品的氣相色譜-質譜總離子流圖（濃度為200ng/ ml)；
[0020] 圖2 :H2S選擇性離子色譜圖A和掃描質譜圖Β(9· 671min);
[0021] 圖3:MT選擇性離子色譜圖A和掃描質譜圖B(10. 775min);
[0022] 圖4:DMS選擇性離子色譜圖A和掃描質譜圖B(12. 405min);
[0023] 圖5 :CS2選擇性離子色譜圖A和掃描質譜圖B(14. 137min);
[0024] 圖6:DMDS選擇性離子色譜圖A和掃描質譜圖B(14. 389min);
[0025] 圖7:DMTS選擇性離子色譜圖A和掃描質譜圖B(14. 658min)。
[0026]圖8 :6種含硫類致嗅物質標準品水產品機制下的氣相色譜-質譜總離子流圖（濃 度為2ng/ml)
【具體實施方式】
[0027]申請人在長期的研究中對各個步驟和理化參數進行了優化，從而使本發明的方法 可以在一次反應中精確的檢測6種含硫類致嗅物質（硫化氫、甲硫醇、甲硫醚、二硫化碳、二 甲二硫、二甲三硫），從而促成了本發明。
[0028] 下面首先對本發明方法的所使用的儀器、試劑和方法進行如下的解釋：
[0029] 1.主要儀器
[0030]氣相色譜-質譜聯用儀（GC/MS)，AgilentGC7890A/MS5975C，美國Agilent公司， 配備頂空進樣器、增強型化學工作站；高速組織搗碎機，DS-1，上海標本模型廠；高速冷凍 離心機，SERJSE09L31，USA;數控超聲波清洗器，KQ5200DE，昆山市超聲波儀器有限公司；數 顯型漩禍混合器，美國Talboys。
[0031] 2.試劑
[0032] 正己烷：色譜純；標準品：含硫類致嗅物質（純度98.0%);硫化氫（hydrogen disulfide,H2S)、甲硫醇（methanethiol，MT)、甲硫釀（dimethylsulfide，DMS)、二硫化 碳（carbondisulfide，CS2)、二甲二硫（dimethyldisulfide,DMDS)、二甲三硫（dimethyl Trisulfide，DMTS)由上海安譜公司提供。
[0033] 3.頂空條件
[0034] 平衡溫度110°C，平衡時間15min;進樣針溫度120°C，傳輸線溫度130°C;頂空瓶壓 力172kPa，加壓時間3min，進樣時間0. 05min，干吹2min，分流進樣，分流比5:1。
[0035] 4.色譜條件
[0036] 色譜柱：DB-l，60mX0. 4mmX0. 32μπι;升溫程序：起始溫度40°C，保持3min，以 10°C/min升溫至110°C，再以15°C/min升溫至200°C，再以40°C/min升溫至240°C;進樣 口溫度：250°C;載氣：He(純度>99. 999% );隔墊吹掃流量：3ml/min;進樣模式：不分流進 樣；進樣量1.0μ1。
[0037] 5.質譜條件
[0038] 離子源溫度：230°C;四極桿溫度：150°C;接口溫度：240°C;電離方式：電子轟擊 (EI)離子源；電子能量：70eV;電子倍增器電壓：1671V;SIM采集模式，掃描質量范圍：40~ 350m/z;閾值：150 ;采樣頻率：2 ;溶劑延遲：4min。
[0039] 上述條件下，6種含硫類致嗅物質的保留時間和定性定量離子如表1所示。
[0040] 表1 6種含硫類致嗅物質的保留時間和定性定量離子表 [0041 ]
[0042] *下劃線標注的為定量離子
[0043] 實施例1 :
[0044] 1)標準溶液制備
[0045] 分別準確稱取6種含硫類致嗅物質標準品0.lg(精確到0.OOOlg)，用正己烷定容 至50ml，得到含硫類致嗅物質標準儲備液，濃度為2.Omg/ml。準確移取上述標準儲備液，以 正己燒逐級稀釋配制含硫類致嗅物質：10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、1μg/ml系 列混合標準工作溶液。
[0046] 2)樣品制備
[0047] 稱取粉碎的水產品樣品5.0g，置于50ml具塞離心管中，加入5ml正己烷，于混合器 上禍旋混勾lmin，超聲提取30min(保持溫度在30°C以下），低溫條件下離心10min，分出有 機相，再提取2次，每次5ml正己烷，合并有機溶劑相放入頂空瓶。
[0048] 3)測定
[0049] 首先通過優化的頂空條件