一種帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方法及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方 法，更具體涉及一種帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的反相液相色譜法分析檢測方法。
【背景技術】
[0002] 非留體抗炎藥（NSAIDs)作為一種鎮痛藥通常用來治療急慢性疼痛，其作用機理 是通過抑制環氧合酶（C0X)而抑制前列腺素類合成與釋放，產生鎮痛效果。傳統的非甾體 抗炎藥（如萘普生、吲哚美辛、雙氯芬酸、尼美舒利等）臨床上已應用幾十年，但長期使用副 作用較明顯，會產生消化不良、腹痛等胃腸副作用，嚴重情況下導致胃穿孔、十二指腸潰瘍 等疾病，近年來其應用受到限制。
[0003] 帕瑞昔布鈉是一種新型的C0X-2特異性抑制劑。C0X-2是一種誘導酶，正常情況下 在機體大多數組織中無表達或者表達甚微，但當受到刺激后能迅速產生。研究表明，特異性 的C0X-2抑制劑比非選擇性的環氧合酶抑制劑治療效果更為確切，且副作用更少。在治療 濃度時，帕瑞昔布鈉能選擇性的抑制C0X-2,抑制前列腺素（PG)的合成，從而發揮鎮痛和抗 炎作用，而對C0X-1抑制作用并不明顯，現已廣泛用于臨床上預防和治療中重度疼痛和術 前鎮痛。
[0004] 帕瑞昔布鈉（英文名：ParecoxibSodium)，分子式為C19HlsN204S.Na，分子量為 392. 40,CAS登錄號：198470-85-8。帕瑞昔布鈉純品為白色結晶性粉末，其熔點為273~ 275°C。其結構如下所示。
[0005]
[0006] 雜質研究是原料藥質量研究中的關鍵內容。目前，中國藥典及國外藥典未收錄 帕瑞昔布鈉原料及制劑的有關物質或遺傳毒性雜質的檢測方法。在已公開的專利中， CN104749288A公開了 一種帕瑞昔布鈉有關物質的液相色譜分析方法，控制了 4- (5-甲 基-3-苯基-4-異惡挫）苯磺酸鈉等6個雜質，未檢索到任何關于帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜 質檢測方法的專利。
[0007] 近年來，原料藥質量控制越來越重視對遺傳毒性（或稱基因毒性）雜質的研究。遺 傳毒性雜質很低濃度時即可造成人體遺傳物質的損傷，進而導致基因突變并可能促使腫瘤 的發生。帕瑞昔布鈉生產工藝的精制步驟可能會產生含有遺傳毒性警示結構一一磺酸酯類 的雜質（見表1)，要求質量控制特別關注。
[0008] 由于帕瑞昔布鈉常用作術后鎮痛藥，其治療時段小于1個月，根據遺傳毒性雜質 的限度控制規定，遺傳毒性雜質的可接受攝入量為120μg/天。注射用帕瑞昔布鈉的最大 日劑量為80mg，折算其遺傳毒性雜質的控制限度為單一雜質（或總雜質）不超過1500ppm。
[0009] 表1帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質
[0010]
【發明內容】
[0011] 本發明的目的是提供一種帕瑞昔布鈉3種遺傳毒性雜質的檢測方法。
[0012] 本發明的再一個目的是提供一種帕瑞昔布鈉3種遺傳毒性雜質檢測方法的應用。
[0013] 本發明目的主要通過以下技術方案實現：所述的檢測方法采用反相液相色譜法， 檢測對象、控制限度、樣品的配制、色譜柱、流動相組成、柱溫、流速、檢測波長、進樣量等描 述如下。
[0014] 本發明所述的檢測對象為4-(5-甲基-3-苯基-4-異惡唑）苯磺酸甲酯、4-(5-甲 基-3-苯基-4-異惡唑）苯磺酸乙酯、4-(5-甲基-3-苯基-4-異惡唑）苯磺酸異丙酯。
[0015] 本發明所述的控制限度為每個遺傳毒性雜質控制在100~2000ppm，優選 lOOOppm。
[0016] 本發明所述的樣品配制用水、乙腈、甲醇、水：乙腈（50:50)溶解樣品，優選甲醇溶 解配制；樣品配制濃度〇· 5~4mg/ml，優選lmg/ml。
[0017] 本發明所述的色譜柱為C18柱、C8柱、苯基柱和Hilic柱，優選C18柱。
[0018] 本發明所述的流動相組成為水一乙腈、稀磷酸一乙腈、0. 01mol/L磷酸氫二鈉一乙 腈、0·Olmol/L磷酸二氫鉀一乙腈、0·Olmol/L磷酸二氫銨一乙腈，優選0·Olmol/L磷酸二氫 銨一乙腈；流動相配比為水相一有機相90:10~10:90。
[0019] 本發明所述的柱溫為25~40 °C，優選35 °C。
[0020] 本發明所述的流動相流速為0. 2-2. 0ml/min，優選1. 0ml/min。
[0021] 本發明所述的檢測器為紫外檢測器或二極管陣列（PDA)檢測器；
[0022] 本發明所述的檢測波長為205~290nm，優選230nm。
[0023] 本發明所述的進樣量為0. 1-40μ1，優選為20μ1。
[0024] 本發明提供的一種帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方法，實現了帕瑞昔布鈉與3 個遺傳毒性雜質在較短時間內的分離，具有較高的靈敏度和專屬性，操作簡捷，達到主成分 與遺傳毒性雜質、遺傳毒性雜質之間的分離度均大于1. 5,可用于帕瑞昔布鈉的質量控制， 具有實用價值。
【附圖說明】
[0025] 圖1是實施例7的液相色譜圖；
[0026]圖2是實施例11第一次進樣的液相色譜圖；
[0027] 圖3是實施例12中遺傳毒性雜質對照品混合物液相色譜圖；
[0028] 圖4是實施例12中樣品測定液相色譜圖；
【具體實施方式】
[0029] 下面結合具體實施例對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明 本發明，而不是為了限制本發明的范圍。
[0030] 實施例1
[0031] 本發明帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質檢測溶液的配制方法。
[0032] 本試驗選擇水、乙腈、甲醇、水：乙腈（1:1)溶解樣品，樣品在水中略溶，在乙腈中 微溶，在甲醇、水：乙腈（1:1)中易溶。由于色譜條件考察時需在帕瑞昔布鈉樣品中加入3 個遺傳毒性雜質，雜質Α、雜質Β、雜質C的結構均為酯類物質，其易被水解，要求溶劑不宜含 水，因此優選甲醇為溶解樣品的溶劑。
[0033] 本試驗選擇將帕瑞昔布鈉樣品配制成0. 5mg/ml~4mg/ml溶液進行考察，結果顯 示0. 5mg/ml雜質響應較小，4mg/ml主峰不對稱較嚴重，影響雜質的檢出，優選lmg/ml作為 測試樣品濃度。
[0034] 實施例2
[0035] 本發明帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方法
[0036]1)儀器與檢測條件
[0037] 儀器：WatersE2695高效液相色譜儀-紫外檢測器；
[0038]色譜柱：C8 柱（4. 6X150mm, 5μm);
[0039] 流動相：水：乙腈（50:50);
[0040]柱溫：25°C;流速：1.OmL/min;
[0041] 檢測波長：230nm;進樣量：10μ1〇
[0042] 2)溶液配制
[0043] 精密稱取雜質A、雜質B、雜質C對照品適量，加甲醇使溶解并稀釋成0. 5mg/ml的 溶液，作為雜質儲備液；精密稱取帕瑞昔布鈉40mg至10ml容量瓶中，精密量取各雜質儲備 液lml至該容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，作為色譜條件篩選溶液。
[0044] 3)測定方法及結果
[0045] 按1)色譜條件進樣，運行20min，記錄色譜圖，考察主成分與各雜質、各雜質之間 的分離度。結果顯示，各雜質與主成分之間分離度良好，主成分峰發生裂分。
[0046] 實施例3
[0047] 本發明帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方法
[0048] 1)儀器與檢測條件
[0049] 儀器：WatersE2695高效液相色譜儀-紫外檢測器；
[0050]色譜柱：C8 柱（4. 6X150mm, 5μm);
[0051] 流動相：pH3. 0稀磷酸：乙腈（70:30);
[0052]柱溫：30°C;流速：2mL/min;
[0053] 檢測波長：290nm;進樣量：40μ1。
[0054] 2)溶液配制
[0055] 精密稱取雜質Α、雜質Β、雜質C對照品適量，加甲醇使溶解并稀釋成0. 5mg/ml的 溶液，作為雜質儲備液；精密稱取帕瑞昔布鈉l〇mg至10ml容量瓶中，精密量取各雜質儲備 液lml至該容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，作為色譜條件篩選溶液。
[0056] 3)測定方法及結果
[0057] 按1)色譜條件進樣，運行20min，記錄色譜圖，考察主成分與各雜質、各雜質之間 的分離度。結果顯示，各成分之間分離度良好，各成分峰形良好。
[0058] 實施例4
[0059] 本發明帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方法
[0060] 1)儀器與檢測條件
[0061] 儀器：WatersE2695高效液相色譜儀-紫外檢測器；
[0062]色譜柱：C18 柱（4. 6X250mm, 5μm);
[0063] 流動相：0·Olmol/L磷酸二氫銨（磷酸調至ρΗ3·0):乙腈（10:90);
[0064]柱溫：35°C;流速：0·8mL/min;
[0065] 檢測波長：230nm;進樣量：20μ1。
[0066] 2)溶液配制
[0067] 精密稱取雜質Α、雜質Β、雜質C對照品適量，加甲醇使溶解并稀釋成0. 5mg/ml的 溶液，作為雜質儲備液；精密稱取帕瑞昔布鈉20mg至10ml容量瓶中，精密量取各雜質儲備 液lml至該容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，作為色譜條件篩選溶液。
[0068] 3)測定方法及結果
[0069]按1)色譜條件進樣，運行20min，記錄色譜圖，考察主成分與各雜質、各雜質之間 的分離度。結果顯示，譜圖基線平穩，雜質在5min以內全部出峰完畢，各成分之間未達到基 線分離。
[0070]實施例5
[0071] 本發明帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方法
[0072] 1)儀器與檢測條件
[0073]儀器：WatersUPLC-PDA檢測器；
[0074]色譜柱：苯基柱（2. 1X50mm, 1. 7μm);
[0075] 流動相：0·01mol/L磷酸二氫鈉（磷酸調至ρΗ3·0):乙腈（40:60);
[0076]柱溫：35°C;流速：0·2mL/min;
[0077] 檢測波長：205nm;進樣量：0· 1μ1。
[0078] 2)溶液配制
[0079] 精密稱取雜質Α、雜質Β、雜質C對照品適量，加甲醇使溶解并稀釋成0.lmg/ml的 溶液，作為雜質儲備液；精密稱取帕瑞昔布鈉5mg至10ml容量瓶中，精密量取各雜質儲備液 lml至該容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，作為色譜條件篩選溶液。
[0080] 3)測定方法及結果
[0081] 按1)色譜條件進樣，運行20min，記錄色譜圖，考察主成分與各雜質、各雜質之間 的分離度。結果顯示，譜圖基線平穩，雜質在5min以內全部出峰完畢，各成分之間分離度良 好，各成分峰形良好，已知雜質與未知雜質間分離度1. 35 (未達到1. 5)。
[0082]實施例6
[0083] 本發明帕瑞昔布鈉遺傳毒性雜質的檢測方法
[0084] 1)儀器與檢測條件
[0085]儀器：WatersUPLC-PDA檢測器；
[0086]色譜柱Hilie柱（2·IX50mm, 1.7μm);
[0087] 流動相：0·Olmol/L磷酸二氫鈉（磷酸調至ρΗ3· 0):乙腈（90:10);
[0088]柱溫：4(TC;流速：0·3mL/min;
[0089] 檢測波長：230nm;進樣量：0· 5μ1〇
[0090] 2)溶液配制
[0091] 精密稱取雜質Α、雜質Β、雜質C對照品適量，加甲醇使溶解并稀釋成0.lmg/ml的 溶液，作為雜質儲備液；精密稱取帕瑞昔布鈉5mg至10ml容量瓶中，精密量取各雜質儲備液 lml至該容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，作為色譜條件篩選溶液。
[0092] 3)測定方法及結果
[0093] 按