一種荔枝核的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜和用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種荔枝核指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜和用途。
【背景技術】
[0002] 蒸枝核，即無患子科植物蒸枝Litchi chinensis Sonn.的干燥成熟種子。主要含 有揮發類成分、皂苷類、黃酮類、氨基酸類、糖類、有機酸和脂肪酸類等成分，具有行氣散結、 祛寒止痛的功效，用于寒疝腹痛、睪丸腫痛、胃脘痛、婦女氣滯血瘀刺痛等癥。現代研究表 明，荔枝核具有抗氧化、降血壓、調血脂、抗肝損傷的作用，而且在抗炎、抑制腫瘤等方面也 取得了良好的效果。在質量控制方面，2010版《中華人民共和國藥典》一部收載了荔枝核藥 材，但僅僅進行了粉末鑒別來控制其質量。由于中藥的產地、來源、采收季節、加工方法等情 況復雜，需要采用更科學、合理的方法控制其質量，這對保證臨床用藥的安全有效是十分必 要的。指紋圖譜作為從整體上對中藥進行質量控制的一種技術目前已被廣泛認可，其優勢 比起單一組分甚至多組分定性定量方法更加明顯。目前文獻中尚未見到關于荔枝核指紋圖 譜的研究報道，因此，為科學有效地控制其內在質量，有必要建立荔枝核的指紋圖譜。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種荔枝核的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法及其標準 指紋圖譜和用途。
[0004] 本發明荔枝核的高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，是按以下步驟進行：
[0005] -、供試品溶液的制備：a、取荔枝核藥材，用粉碎機將其粉碎，加5倍質量的質量 百分濃度為95%乙醇，浸泡10~12h，超聲20~30min，過濾，分別收集固相物A和液相物 A，將固相物A加入5倍質量的質量百分濃度為95%乙醇中浸泡2~3h，超聲20~30min， 過濾，收集液相物B，然后將液相物A和B混合，得到浸提液，將浸提液減壓濃縮得浸膏；
[0006] b、將浸膏用少量蒸餾水溶解后上到大孔樹脂色譜柱上，先用蒸餾水洗滌4個柱體 積，再用質量濃度為30%的乙醇洗脫4個柱體積，收集洗脫液，然后減壓濃縮洗脫液至干， 得到干燥固體C;
[0007] c、將步驟b得到的干燥固體C，用色譜甲醇溶解成濃度為2mg/mL的溶液，用微孔濾 膜進行過濾，濾液即為供試品溶液；
[0008] 二、指紋圖譜的制作：將步驟一得到的供試品溶液注入高效液相色譜儀，以體積比 為9:1的甲醇和乙腈的混合溶液為A相，以體積比為0. 2:100的磷酸和水的混合液為B相 進行梯度洗脫；其中，高效液相色譜條件為：色譜柱填料Thermo C18,規格為250X4. 6mm， 5 μπι;柱溫為35°C ;流速0. 8mL/min，檢測波長280nm，進樣量10 μ L ;在此條件下分析供試 品溶液，得到荔枝核的指紋圖譜。
[0009] 三、標準指紋圖譜的確定：確定了 15個共有特征峰；以8號峰為對照峰，共有特 征峰的相對保留時間分別為：1號共有特征峰相對保留時間為0. 380±0. 002%，2號峰相 對保留時間為0. 435±0. 002%，3號峰相對保留時間為0. 485±0. 002%，4號峰相對保留 時間為〇. 571±0. 001%，5號峰相對保留時間為0. 661±0. 001%，6號峰相對保留時間為 0. 737±0. 003%，7號峰相對保留時間為0. 842±0. 002%，8號峰相對保留時間為1. 000,9 號峰相對保留時間為1. 684±0. 006%，10號峰相對保留時間為1. 832±0. 005%，11號峰相 對保留時間為1. 934±0. 003%，12號峰相對保留時間為2. 053±0. 010%，13號峰相對保留 時間為2. 301 ±0. 002%，14號峰相對保留時間為2. 387±0. 003%，15號峰相對保留時間為 2. 882±0. 005%，上述共有特征峰構成了荔枝核的指紋特征，可作為荔枝核的標準指紋圖 譜。
[0010] 本發明荔枝核標準指紋圖譜的用途是指荔枝核指紋圖譜作為標準指紋圖譜用于 荔枝核質量控制中。
[0011] 本發明的有益效果：
[0012] 本發明的荔枝核標準指紋圖譜有15個共有特征峰，這些共有特征峰構成了荔枝 核的指紋特征，可作為荔枝核的標準指紋圖譜。本發明的荔枝核標準指紋圖譜作為標準指 紋圖譜經多批樣品驗證后可用于荔枝核質量控制中，用于從整體上評價和控制荔枝核藥材 的質量，既避免了因只測定一、二個化學成分而判定荔枝核整體質量的片面性，又減少了為 質量達標而人為添加對照成分的可能性。本發明荔枝核的高效液相色譜指紋圖譜的建立方 法具有可重復性強、精密度高和穩定可靠、易于掌握的優點，適用于荔枝核藥材的真偽、產 地和品質的鑒別和質量控制。
【附圖說明】
[0013] 圖1為試驗1提供的荔枝核標準指紋圖譜；其中1至15為荔枝核的15個共有特 征峰；
[0014] 圖2為S1-S10是10批荔枝核藥材指紋圖譜。
【具體實施方式】
[0015] 本發明技術方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的 任意組合。
【具體實施方式】 [0016] 一：本實施方式一、供試品溶液的制備：a、取蒸枝核藥材，用粉碎機 將其粉碎，加5倍質量的質量百分濃度為95%乙醇，浸泡10~12h，超聲20~30min，過濾， 分別收集固相物A和液相物A，將固相物A加入5倍質量的質量百分濃度為95%乙醇中浸 泡2~3h，超聲20~30min，過濾，收集液相物B，然后將液相物A和B混合，得到浸提液，將 浸提液減壓濃縮得浸膏；
[0017] b、將浸膏用少量蒸餾水溶解后上到大孔樹脂色譜柱上，先用蒸餾水洗滌4個柱體 積，再用質量濃度為30%的乙醇洗脫4個柱體積，收集洗脫液，然后減壓濃縮洗脫液至干， 得到干燥固體C;
[0018] c、將步驟b得到的干燥固體C，用色譜甲醇溶解成濃度為2mg/mL的溶液，用微孔濾 膜進行過濾，濾液即為供試品溶液；
[0019] 二、指紋圖譜的制作：將步驟一得到的供試品溶液注入高效液相色譜儀，以體積比 為9:1的甲醇和乙腈的混合溶液為A相，以體積比為0. 2:100的磷酸和水的混合液為B相 進行梯度洗脫；其中，高效液相色譜條件為：色譜柱填料Thermo C18,規格為250X4. 6mm， 5 μπι;柱溫為35°C ;流速0. 8mL/min，檢測波長280nm，進樣量10 μ L ;在此條件下分析供試 品溶液，得到荔枝核的指紋圖譜。
【具體實施方式】 [0020] 二：本實施方式與一不同的是：步驟一中的微孔濾膜 過濾是采用0. 45 μ m微孔濾膜進行過濾的。其它與一相同。
【具體實施方式】 [0021] 三：本實施方式與一或二不同的是：步驟二中梯度洗 脫順序為：〇min - 20min - 40min - 45min - 50min，體積比為9:1的甲醇和乙腈混合溶液 15 % - 20 % - 30 % - 35 % - 50 %。其它與一或二相同。
【具體實施方式】 [0022] 四：本實施方式采用一種荔枝核高效液相色譜指紋圖譜的建立方法 得到的荔枝核標準指紋圖譜。
[0023] 本實施方式的荔枝核標準指紋圖譜有15個共有特征峰，這些共有特征峰構成了 荔枝核的指紋特征，可作為荔枝核的標準指紋圖譜。
【具體實施方式】 [0024] 五：本實施方式與四不同的是：荔枝核的標準指紋圖 譜有15個共有特征峰；以8號峰為對照峰，共有特征峰的相對保留時間分別為：1號共有 特征峰相對保留時間為0. 380 ± 0. 002 %，2號峰相對保留時間為0. 435 ± 0. 002 %，3號峰 相對保留時間為0. 485±0. 002%，4號峰相對保留時間為0. 571±0. 001%，5號峰相對保 留時間為〇. 661±0. 001%，6號峰相對保留時間為0. 737±0. 003%，7號峰相對保留時間為 0. 842±0. 002%，8號峰相對保留時間為1. 000,9號峰相對保留時間為1. 684±0. 006%，10 號峰相對保留時間為1. 832±0. 005%，11號峰相對保留時間為1. 934±0. 003%，12號峰相 對保留時間為2. 053±0. 010%，13號峰相對保留時間為2. 301 ±0. 002%，14號峰相對保留 時間為2. 387±0. 003%，15號峰相對保留時間為2. 882±0. 005%，這15個共有特征峰構成 了荔枝核的指紋特征，可作為荔枝核的標準指紋圖譜。其它與四相同。
【具體實施方式】 [0025] 六：本實施方式荔枝核標準指紋圖譜的用途是指荔枝核指紋圖譜作 為標準指紋圖譜用于荔枝核質量控制中。
[0026] 本實施方式的荔枝核標準指紋圖譜作為標準指紋圖譜經多批樣品驗證后可用于 荔枝核質量控制中，用于從整體上評價和控制荔枝核藥材的質量，既避免了因只測定一、二 個化學成分而判定荔枝核整體質量的片面性，又減少了為質量達標而人為添加對照成分的 可能性。
[0027] 通過以下試驗驗證本發明的有益效果：