元胡止痛滴丸的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中成藥的質(zhì)量控制方法，特別是涉及采用高效液相色譜（HPLC)指紋圖 譜測定來控制元胡止痛滴丸質(zhì)量的控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段， 得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它 是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量 的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。由于中藥及其制劑均為多組分復(fù)雜體系，尤其是復(fù)方中藥成分 復(fù)雜，其中所含的任意成分含量的高低都不能代表其整體的療效。如果只用其中一、兩種成 分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷無藥效的指標(biāo)成分。因此，評價其質(zhì) 量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的，能提供鑒別其準(zhǔn)確可靠的檢測方法。目前，國際上多采用指紋圖譜 對植物，中草藥的各種成分進行質(zhì)量控制。中藥質(zhì)量控制正從簡單的單個成分含量測定轉(zhuǎn) 向以先進技術(shù)為手段，對多組分、多指標(biāo)進行含量控制。采用中藥指紋圖譜方式，一方面可 以通過指紋圖譜的特征性，有效的鑒別樣品的真?zhèn)魏彤a(chǎn)地；另一方面通過對主要指紋圖譜 特征峰的面積或比例的控制，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定一致，進一步可 使中藥質(zhì)量與其藥效真正結(jié)合起來，有助于闡明中藥作用機理。從而達到保證產(chǎn)品服用安 全有效的目的。
[0003] 元胡止痛滴丸由延胡索（Corydalis Rhizoma)和白]E (Angelicae dahuricae Radix)兩味藥組成。方中延胡索為君藥，具活血、利氣、止痛之功，輔以白芷為臣，可散風(fēng)寒， 宣濕痹，行氣血以除頭痛、身痛。二藥匯方，具有理氣、活血、止痛的作用，用于氣滯血瘀的胃 痛、脅痛、頭痛及月經(jīng)痛等。本品現(xiàn)已被列入國家醫(yī)保甲類藥品、國家中藥保護品種目錄。元 胡止痛滴丸現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國藥典》（2010年版）第二增補本，僅規(guī)定白芷和延胡 索的薄層色譜鑒別方法和高效液相色譜測定延胡索乙素及歐前胡素含量的方法，而本品成 分復(fù)雜，現(xiàn)有質(zhì)量控制手段和質(zhì)控指標(biāo)尚處在較簡單的初級階段，嚴(yán)重制約了本產(chǎn)品的市 場拓展、臨床應(yīng)用以及國際化進程，為此對本品進行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明提供一種元胡止痛滴丸的質(zhì)量控制方法，通過此方法提升元胡止痛滴丸的 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而加快元胡止痛滴丸的市場拓展、臨床應(yīng)用以及國際化進程。
[0005] 為達到上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案： 一種元胡止痛滴丸的質(zhì)量控制方法，該方法是采用去氫延胡索甲素為參照物，共有峰 有25個的高效液相色譜標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的質(zhì)量控制方法。
[0006] 所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測定方法，包括如下步驟： (1)色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動相A為乙 腈，流動相B為冰醋酸調(diào)pH為3. 0~4. 5的0. 4%。乙酸銨溶液；檢測波長為210~400nm ; 柱溫：20 ~40°C ;流速：0· 5 ~I. 5mL/min ;進樣量：10 yL。
[0007] (2)參照物溶液的制備：取去氫延胡索甲素對照品適量，加甲醇配制成濃度為 0. lmg/ml溶液，搖勻，即得參照物溶液； (3) 供試品溶液的制備：取研細后的元胡止痛滴丸lg，置于IOmL量瓶中，加入適量60% 乙醇，超聲Ih使溶解，冷卻，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液； (4) 以去氫延胡索甲素為參照物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定：精密吸取參照物溶液和供試 品溶液，分別注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，依據(jù)所測得的圖譜，制定元胡 止痛滴丸標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； (5) 將元胡止痛滴丸待測產(chǎn)品指紋圖譜與所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進行比較，當(dāng)相似度為 0. 90~1. 00時待測產(chǎn)品合格。
[0008] 所述色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動 相A為乙腈，流動相B為冰醋酸調(diào)pH為4. 0的0. 4%。乙酸銨溶液；檢測波長為245nm ;柱溫： 35°C ;流速：lmL/min ;進樣量：10 μ L。
[0009] 所述梯度洗脫程序按如下，其中流動相比例均為體積百分比：0~30min，流動相 A為10~25%，流動相B為90%~75% ;30~40min，流動相A為25%，流動相B為75 ;40~ 75min，流動相A為25%~80%，流動相B為75%~20% ;75~80min，流動相A為80%~100%， 流動相B為20%~0%。
[0010] 所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中的1、2、3、4、5、7、8、10、11、12、14、15號峰來自于延胡索，12 號峰為去氫延胡索甲素；6、9、13、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25號峰來自于白芷，21號 峰是歐前胡素。
[0011] 本發(fā)明通過藥效作用及作用機理研究一藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究一血中移行成分研 究一網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究一有效成分體內(nèi)代謝研究，闡明了元胡止痛滴丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作 用機理。元胡止痛滴丸由延胡索和白芷兩味藥組成。延胡索主要成分為生物堿，目前已從 延胡索中分離得到并經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定的生物堿類成分有60多種，主要包括原小檗堿類，原阿片 堿類、阿樸啡類等，其中去氫延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索甲素等原小檗堿類生物堿為 該藥物中主要的生物活性成分。白芷主要的化學(xué)成分為香豆素類，主要為呋喃香豆素如歐 前胡素、異歐前胡素等，此外還含有線性二氫香豆素、角型香豆素、角型二氫香豆素、簡單香 豆素等。元胡止痛滴丸血清藥物化學(xué)研究結(jié)果表明，元胡止痛滴丸入血成分中大多數(shù)化合 物如生物堿類的巴馬汀、黃連堿、延胡索甲素、延胡索乙素、去氫延胡索甲素等和香豆素類 的歐前胡素、氧化前胡素、白當(dāng)歸腦、白當(dāng)歸素、補骨脂素等都能作用于腦啡肽酶，據(jù)此推測 元胡止痛滴丸可能是通過多個化合物與體內(nèi)腦啡肽酶結(jié)合，抑制其生物活性，進而延緩腦 啡肽的降解過程，延長鎮(zhèn)痛時間和效果，從而起到通過中樞鎮(zhèn)痛來緩解原發(fā)性痛經(jīng)的作用。 并且，通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果提示，與激素調(diào)節(jié)相關(guān)通路作用以及與免疫相關(guān)通路作用 均與去氫延胡索甲素相關(guān)。在此基礎(chǔ)上，選擇與藥效相關(guān)的主要活性成分去氫延胡索甲素 為參照物進行特征指紋圖譜研究，并對指紋圖譜中共有峰進行指認(rèn)。通過建立從原料藥材 到成品的全過程的質(zhì)量控制體系，對元胡止痛滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行了全面的提升。
[0012] (1)本發(fā)明采用高效液相色譜（HPLC)指紋圖譜對元胡止痛滴丸質(zhì)量進行控制方法 能更加完善的控制元胡止痛滴丸成品的質(zhì)量。以去氫延胡索甲素為參照物的HPLC指紋圖 譜中25個共有峰的選擇更注重藥材指標(biāo)性化學(xué)成分與制劑藥效學(xué)研究結(jié)果的關(guān)聯(lián)性和指 紋圖譜的整體面貌特征，避免了因只測定其中一個或兩個化學(xué)成分而判斷制劑整體質(zhì)量的 片面性，減少人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標(biāo)的可能性。為完整、準(zhǔn)確評價制劑的質(zhì)量提供了新的控 制標(biāo)準(zhǔn)，從而能更好的控制制劑質(zhì)量。
[0013] (2)本發(fā)明所涉及的元胡止痛滴丸，由于各藥材之間所含的化學(xué)成分復(fù)雜，對指紋 圖譜的制定造成干擾，導(dǎo)致各部分指紋圖譜特征不穩(wěn)定，所以必須嚴(yán)格控制流動相的色譜 條件，才能得到良好的指紋圖譜。也就是說，本發(fā)明涉及制劑的指紋圖譜不是將延胡索和 白芷藥材或制劑的指紋圖譜簡單疊加就能得到的，由于處方中延胡索和白芷藥材所含成分 相互之間的干擾影響，導(dǎo)致本發(fā)明涉及制劑中延胡索和白芷部分的指紋圖譜特征峰發(fā)生改 變，而只有采用本發(fā)明經(jīng)過反復(fù)實驗加以確定的條件，才能得到理想的指紋圖譜。
[0014] (3)以元胡止痛滴丸中主要有效成分延胡索和白芷為指標(biāo)建立起來的高效液相色 譜指紋圖譜，代表了元胡止痛滴丸的藥理活性，不僅能有效地表征元胡止痛滴丸的內(nèi)在質(zhì) 量，更適合于生產(chǎn)過程中產(chǎn)品質(zhì)量的有效控制。
[0015] (4)通過實驗證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對元胡止痛滴丸成品的質(zhì)量控制更為有 效，方法精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較高。能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定一 致，從而保證產(chǎn)品的安全有效。
【附圖說明】
[0016] 圖1為12批元胡止痛滴丸的HPLC指紋圖譜(疊加顯示）； 圖2為元胡止痛滴丸的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜； 圖3為元胡止痛滴丸總離子流圖譜； 圖4為元胡止痛滴丸指紋圖譜中色譜峰歸屬延胡索藥材圖譜； 圖5為元胡止痛滴丸指紋圖譜中色譜峰歸屬白芷藥材圖譜。
【具體實施方式】
[0017] 為了更充分的解釋本發(fā)明的實施，提供下述測定方法的實施實例。這些實施實例 僅僅是解釋、而不是限制本發(fā)明的范圍。下面通過典型的實施例對本發(fā)明做進一步的說明。
[0018] 以下各實施例中所使用的實驗材料情況如下： Agilent 1100-高效液相色譜儀，配置自動進樣器、柱溫箱、UV檢測器、Agilent 1100 色譜工作站；電子天平：AB204-N (METTLER TOLEDO);超聲儀：Autoscience AS3120。
[0019] 乙腈（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；乙醇（分析純，天津市凱信化學(xué)工 業(yè)有限公司）；甲酸(分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）；其他試劑均為分析純。
[0020] 去氫延胡索甲素(批號131220)購自上海融禾醫(yī)藥科技有限公司。元胡止痛滴丸 樣品12批，由甘肅隴神戎發(fā)制藥有限公司提供。來源及產(chǎn)地見表1。
[0021] 實施例1元胡止痛滴丸標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜建立 1、色譜條件Agilent 1100高效液相色譜儀； 色譜柱：Diamonsil C18 (250mmX4.6 mm，5ym)柱；流動相：乙腈（A)-冰醋酸調(diào)pH為 3. 5的0. 4%。乙酸銨溶液（B);洗脫方式：梯度洗脫(見表2);流速：lmL/min ;柱溫：35°C ;檢 測波長：245 nm ;進樣量：10 μ L ;分析時間：80 min。該色譜條件的選取原因： 由于本實驗樣品成分復(fù)雜，采用等度洗脫時各組份峰分離不理想，不能有效檢測樣品 中各成分峰，故采用梯度洗脫的方式，先后嘗試了甲醇-水、甲醇-醋酸、甲醇-乙酸銨、乙 腈-醋酸和乙腈-乙酸銨等不同流動相系統(tǒng)，并且嘗試了多種不同梯度條件，最后確定梯度 洗脫方式。經(jīng)比較，乙腈和冰醋酸調(diào)pH為3. 0-4. 5的0. 4%。乙酸銨溶液一起組成流動相進 行梯度洗脫分離效果較好，能較好地使樣品中各色譜峰分離且出峰最多。因此最終確定用 乙腈和冰醋酸調(diào)PH為4. 0的0. 4%。乙酸銨溶液進行梯度洗脫。
[0022] 取供試品溶液，在210~400 nm波長范圍進行全梯度掃描，并對各波長下的色譜 圖進行分析比較。結(jié)果表明，在245nm波長處，從圖譜中可以盡可能地獲取色譜組分信息以 反映體系組成的全貌，因此選擇245nm作為檢測波長。
[0023] 2、參照物溶液的制備 取去氫延胡索甲素對照品適量，置IOmL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，配制成濃度為 0. lmg/ml溶液，搖勻，即得參照物溶液。
[0024] 3、供試品溶液的