一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關物質的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種采用高效液相色譜法分離和測定依折麥 布及有關物質的方法。
【背景技術】
[0002] 依折麥布是降膽固醇藥物，可單獨或與HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀類）聯合應 用于治療原發性(雜合子家族性或非家族性）高膽固醇血癥，可降低總膽固醇、低密度脂蛋 白膽固醇、載脂蛋白、非高密度脂蛋白膽固醇；還可用于純合子家族性高膽固醇血癥的治 療。分子式為C 24H21F2NO3，化學名為1- (4-氟苯基）-3 (R) - [3- (4-氟苯基）-3 (S)-羥丙基]_ 4 (S)-(4-羥苯基）-2-吖丁啶（氮雜環丁烷）酮，其化學結構式如下：
在依折麥布合成過程中，會產生一些相關的雜質物質如生產過程中產生的副產物或中 間體或降解產物等，這些雜質可能會由于去除不完全而影響藥物的純度和質量，目前，已知 的雜質物質有6種，分別為：有關物質1 (副廣物雜質)、有關物質2 (副廣物雜質)、有關物質 3 (中間體雜質)、有關物質4 (中間體雜質)、有關物質5 (既是副產物又是降解雜質)和有關 物質6 (降解雜質)，這6種雜質物質的結構式如下：
對于依折麥布合成工藝中引入的上述副產物和中間體，在依折麥布原料藥中需要進行 質量控制，而依折麥布相關的降解雜質需要在依折麥布原料藥及制劑中進行質量控制，因 此，實現依折麥布及有關物質的分離和測定對依折麥布原料及制劑的生產和貯存具有重要 的意義。
[0003] 目前對于依折麥布有關物質的分析檢測方法有進口注冊標準（JX20070201 )，采用 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0. 〇5mol/L磷酸二氫鉀溶液：乙腈：四氫呋喃（65 :25 : 10)為流動相進行等度洗脫，流速為I. 〇ml/min，檢測波長為232nm，柱溫為25°C，進樣體積 為30 μ 1，檢測時間為主峰保留時間的2倍，但是，該標準的方法對上述的有關物質3和有關 物質4不能檢出；在堿降解試驗中，有關物質6和其他降解雜質不能分離。
[0004] 另外，申請號為201210337025. 1的發明專利中公開了一種用液相色譜法分離測 定依折麥布有關物質的方法，該方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比 例的酸性水溶液-有機相為流動相，定量測定依折麥布及其有關物質的含量，酸性水溶液 的酸為磷酸、碳酸、甲酸、乙酸中的一種，有機相為甲醇、乙腈、丙醇、異丙醇中的一種；申請 號為201410015689. 5的發明專利公開了一種用液相色譜法分離測定依折麥布中間體有關 物質化學純度的方法，該方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的磷 酸水溶液-有機相為流動相，定量測定依折麥布中間體及其有關物質的含量，有機相為甲 醇、乙腈、丙醇、異丙醇中的一種；但是同樣，采用申請號為201210337025. 1的發明專利中 公開的方法和申請號為201410015689. 5的發明專利中公開的方法均不能完全分離檢測上 述雜質，說明目前現有技術中公開的方法均不能同時適用于上述的6種雜質的檢測。
【發明內容】
[0005] 有鑒于此，本發明的目的在于提供一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關 物質的方法，該方法適用于上述6種有關物質的分離和檢測，可同時實現上述6種有關物質 的分離和檢測，提高了分離檢測的效率。
[0006] 為實現上述目的，本發明的技術方案為： 一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關物質的方法，所述高效液相色譜法分析 過程中采用的色譜柱是以苯基硅烷鍵合硅膠為填料，以溶液A和有機溶劑B按一定比例混 合為流動相進行洗脫；所述的溶液A為酸的水溶液、乙腈和甲醇的混合溶液。
[0007] 本發明所述的方法適用于上述的6種雜質的分離和測定，可用于單獨檢測某一種 雜質，也可同時分離和檢測這6種雜質，與現有技術相比，本發明的方法更快捷，提高了效 率，具有顯著的進步性。
[0008] 上述的方法中，所述酸為磷酸、甲酸、乙酸、檸檬酸和三氟乙酸中的一種或多種，優 選為磷酸。
[0009] 上述的方法中，所述酸的水溶液的體積百分濃度為0. 05-0. 15%，優選為0. 1%。
[0010] 上述的方法中，所述有機溶劑B為乙腈和/或甲醇，優選為乙腈。
[0011] 本發明所述的高效液相色譜方法為反相液相色譜法，采用的色譜柱是以苯基硅烷 鍵合硅膠為填料，所述苯基硅烷鍵合硅膠顆粒粒徑為3-5 μ m，優選粒徑為5 μ m。所述的 苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱柱長為150-250mm，優選為250mm。采用所述的色譜柱進行分離 時，色譜柱適用的柱溫范圍為20-40°C，優選為30°C。在本發明的一個【具體實施方式】中， 色譜柱為苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（Phenomenex Luna Phenyl Hexyl,型號為 250mmX4. 6mm,5 μ m)〇
[0012] 優選的，本發明所述的一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關物質的方 法，當采用所述流動相進行洗脫時，流動相的流速為0. 5-1. 5ml/min，優選為1.0 ml/min。
[0013] 上述方法中，優選的，所述溶液A中酸的水溶液、乙腈和甲醇的體積比為 40-55:35-50:10,更優選的，所述溶液A中酸的水溶液、乙腈和甲醇的體積比為48:42:10。
[0014] 上述的方法中，以溶液A和有機溶劑B按一定比例混合為流動相進行梯度洗脫，所 述梯度比例為： Omin，溶液A與有機溶劑B的體積比為100:0 ; 25min，溶液A與有機溶劑B的體積比為100:0 ; 35min，溶液A與有機溶劑B的體積比為55:45 ; 45min，溶液A與有機溶劑B的體積比為55:45 ; 46min，溶液A與有機溶劑B的體積比為100:0 ; 55min，溶液A與有機溶劑B的體積比為100:0。
[0015] 洗脫時，流動相的流速為0· 5-1. 5ml/min，優選為1.0 ml/min。
[0016] 洗脫后采用紫外檢測器進行檢測，DAD檢測器和VWD均適用，檢測波長為232nm。
[0017] 本發明所述的一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關物質的方法，在進行 高效液相色譜法分析之前，對照品或待測樣品均需先溶解，在本發明中，采用所述的溶液A 溶解對照品或待測樣品。
[0018] 本發明所述的方法，在一個【具體實施方式】中，按照以下方法實現： 取依折麥布、有關物質1、有關物質2、有關物質3、有關物質4、有關物質5、有關物質6 對照品各適量，用〇. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折麥布 200 μ g、有關物質1、有關物質2、有關物質3、有關物質4、有關物質5和有關物質6各2 μ g 的系統適用性溶液。
[0019] 取依折麥布對照品，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成每1ml 含〇. 2 μ g的對照品溶液。
[0020] 取待測樣品（依折麥布或含依折麥布藥物組合物）適量，用0.1%磷酸溶液-乙 腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成每1ml含依折麥布200 μ g的供試品溶液，分別取系統 適用性溶液、供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，按本發明色譜條件(色譜柱填料 為苯基硅烷鍵合硅膠，柱長為250mm，檢測波長為232nm，以0· 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇 (48:42:10)和乙腈為流動相進行梯度洗脫，梯度洗脫的比例如表1所示，流動相的流速為 1.0 ml/min，色譜柱柱溫箱溫度為30°C，進樣體積為30 μ 1)進行測定，按帶校正因子的對照 品外標法計算供試品中各已知雜質的含量，按對照品外標法計算供試品中其他單個雜質的 含量,總雜質為各已知雜質與其他單個雜質之和。
[0021] 本發明的方法還可對依折麥布堿降解雜