測試試劑在制備評價臨床腫瘤患者臨床治療監測的藥品中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于酶活性檢測領域，涉及一種測試試劑在制備評價臨床腫瘤患者臨床治 療監測的藥品中的應化所述的腫瘤包括肺癌、宮頸癌、乳腺癌、鼻咽癌，所述臨床治療包括 對于各種臨床化療、放療或者其它的臨床治療方案。
【背景技術】
[0002] 我國每年大約有200萬人患癌，150萬人死于癌癥，而且還在不斷的增加，并 逐漸呈年輕化趨勢。癌癥每年給我國造成的直接經濟損失逾千億元（摘自北京晨報 2007/03/31)。據衛生部2007年報告，至2006年我國因腫瘤死亡的人數已達180萬，較2005 年高出30萬。腫瘤發生的早期人體沒有感覺和癥狀，所W只有早期體檢才能早期發現。但 是目前在臨床上，80%W上的腫瘤病人是出現癥狀后才就醫治療，一經確診即非早期，大多 數病人都發生轉移，已經失去手術機會；很多經過手術的腫瘤患者，也要采取反復的放、化 療W防止復發和轉移。因此，及早診斷和治療是對抗癌癥的有效手段之一，腫瘤的早期診斷 是決定其預后的一個重要因素。
[0003] 腫瘤標志物（Tumormarker,TM)作為一項重要指標，在腫瘤早期診斷當中發揮著 越來越重要的作用。TM是由腫瘤組織產生，存在于腫瘤組織本身、或分泌至血液或其他體 液、或因腫瘤組織刺激由宿主細胞產生的含量明顯高于正常參考值的一類物質。TM在腫瘤 的治療監測和預后方面具有一定的應用價值。目前發現的腫瘤標志物已有一百多種，但送 些腫瘤標志物主要是腫瘤形成后形成的抗體或蛋白，通過檢測送些腫瘤標志物可W在一定 程度上檢測腫瘤的發生及其相關的異常增生等相關病癥，但是送些標志物不能用于在腫瘤 或增生發生前來預測機體內的抗腫瘤能力。因此，本領域迫切需要開發新的方法，用于評價 腫瘤發病之前機體內的抗疾病能力，W此來預報機體抵抗腫瘤或異常增殖能力的大小。
[0004] 硫氧還蛋白系統包括硫氧還蛋白還原酶（Thioredoxinreductase,TrxR，TR)、 硫氧還蛋白（thioredoxin,Trx)和煙醜胺腺嘿嶺二核巧酸（nicotinamideadenine dinucleotide地os地ate,NADPH)，是一個廣泛分布的NADPH依賴性二硫化物還原酶系統。 其中Trx作為一種生長因子，可W被許多細胞產生，也能被淋己細胞、肝細胞和成纖維細胞 W及許多癌細胞分泌。Trx的琉基氧化還原活性在維持細胞生理活性過程中有普遍而且重 要的作用。
[0005] 研究表明在氧脅迫的情況下，淋己細胞和腫瘤細胞W及一些正常細胞當中的Trx、 TrxR能夠快速地調節和減緩氧脅迫的壓力。在正常情況下，TrxR還原氧化態的Trx。在 NADPH存在時，還原態的Trx作為P畑X的電子供體將過氧化氨還原成水。紫外線等產生的 過氧化氨誘導TrxR的產生，然而，持久的過氧化氨高水平地誘導產生腫瘤抑制因子p53,反 過來負調節TrxR，所W，TrxR活力在過氧化氨較好的控制下。從另一角度來說，TrxR活性 越低，表明體內的腫瘤抑制因子p53的水平越高，p53的水平越高，機體就能越容易使腫瘤 細胞趨向調亡，所W對抗腫瘤的能力就越強，因此，TrxR活性的高低在一定程度上反映了體 內的抗腫瘤水平。
[0006] 目前，國際上采用硫代葡萄糖金（Aurothioglucose，下式a)抑制法測定TrxR活 性，
[0007]
[0008] 其工作原理是：用5, 5-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（DTNB)測定樣品中的總還原 能力；用硫代葡萄糖金抑制樣品中化xR的活性后，再用DTNB測定還原能力；計算樣品前后 兩次還原能力的差值來測定樣品中TrxR的活性。但是，硫代葡萄糖金缺乏特異性，對樣品 中的其他琉基物質也可發生封閉作用，不適用于直接測定血液或組織樣品中的TrxR活性。 例女口，HillKE等（Determinationofthioredoxinreductaseactivityinratliver supernatant.AnalBiochem. ,1997,Novi;253(1) :123-5)采用硫代葡萄糖金測定大鼠肝 勻漿中的TrxR活性時，要先對肝勻漿進行透析處理，W除去其中的小分子琉基物質（如谷 脫甘膚）后，再加入硫代葡萄糖金測定其化xR活性。可見，其他小分子琉基物質（如谷脫 甘膚）可干擾硫代葡萄糖金對TrxR的活性測定。另一研究結果表明，硫代葡萄糖金會增 加血液中琉基物質與DTNB的反應速率（HuML,DillardCJ，Ta卵elALInvivoeffects of曰urothioglucose曰ndsodiumthioglucoseonr曰ttissuesulfhydryllevels曰nd plasmasulfhydrylreactivity.AgentsActions. 1988,Aug;25 (1-2):132-8)。
[0009] 申請人的申請CN102695805A中公開了用于測定樣品中硫氧還蛋白還原酶活性的 方法和試劑盒及應用，該文獻盡管公開了該試劑評價體內抗腫瘤水平，并且公開了對于正 常人；通常TR活性小于4U/mU且0S/TR比值大于5 ;對于腫瘤患者：通常TR活性大于10U/ 血（一般此時0S/TR比值小于5);對于lOU/mL>TR活性> 4U/mL，0S/TR比值小于抓/血， 具有腫瘤患者的指標特點。但是沒有具體涉及具體癌癥是否適用或如何適用。
[0010] 目前產品檢測試劑（PCT/CN2010/078369)可用于人血的體外檢測，方便、無創，易 行。但在臨床具體應用特別是針對臨床各種腫瘤類型是否適合應用該類檢測試劑尚無前期 任何報道。現有技術中癌癥（如肺癌、宮頸癌、乳腺癌、鼻咽癌）的評價試劑也沒有對于超 早期的腫瘤進行預警監測，更沒有公開對于術后的腫瘤的治療檢測。因此，應用TR活性檢 巧||試劑用于評價在各種如腫瘤，如肺癌、乳腺癌、鼻咽癌和宮頸癌的藥物應用效果W及手術 治療效果的跟蹤評價，對于臨床合理使用藥物W及手術方法進行腫瘤治療具有重要的作用 和意義。
【發明內容】
[0011] 如上所述，TrxR的過量表達與疾病，特別是腫瘤的發生密切相關，因此，準確、可靠 的檢測組織中TrxR的含量或活性水平對于預報體內抵抗疾病如腫瘤等的能力極其重要， 本發明的檢測試劑對于肺癌，乳腺癌、鼻咽癌和宮頸癌的不同的治療階段（如術前、術中和 術后）和臨床效果（CR、PR、SD、PD)具有明顯的活性差異，數據分析顯示具有統計學意義， 因此，該檢測試劑通過TR活性檢測還能判斷腫瘤的治療效果，動態監測相關疾病進程。從 而對于患者的不同治療階段提供了重大的指導意義，可W在臨床上使用。
[0012] 本發明通過如下技術方案實現：
[0013] (1) 一種測試試劑在制備評價臨床腫瘤患者臨床治療監測的藥品中的應用，所述 測試試劑包括分別獨立存在的：
[0014] (a)測定樣品中總琉基含量的試劑；和
[0015] 化）硫氧還蛋白還原酶特異性抑制化合物。
[0016] 根據本發明，所述腫瘤優選肺癌、宮頸癌、乳腺癌或鼻咽癌。
[0017] 根據本發明，所述臨床治療包括對于各種臨床化療、放療或者其它的臨床治療方 案。
[0018] 根據本發明，所述臨床治療包括術前、術中和術后的監測。
[0019] 根據本發明，如果TR活性大于1011/1^，數值顯示為腫瘤患者；如果lOU/mL>TR活 性> 4U/mL，數值顯示具有腫瘤患者的指標特點。
[0020] 更進一步地，當TR活性大于lOU/mL時，0S/TR比值小于5 ;當lOU/mL>TR活性> 4U/mL時，0S/TR比值小于抓/mL。所述0S/TR的比值是根據正常人與腫瘤患者的測試統計 后獲得的。
[002。 如果治療后TR活性水平仍然大于lOU/i止，數值預示生長控制不理想。而且，臨床 如果為PD，則為數據一致。
[0022] 如果治療后TR活性水平小于4U/mU數值預示生長控制在正常人水平，臨床可W 判斷為SD、PR、CR等為一致；反之，為不一致。
[002引其中CR為完全好轉，PR為部分好轉，SD為疾病穩定，PD為疾病進展。
[0024] 本發明中，所述"硫氧還蛋白還原酶特異性抑制化合物"（下文有時稱為；抑制劑） 是指對硫氧還蛋白還原酶具有高度選擇性的化合物，送類化合物能夠特異性地與硫氧還蛋 白還原酶結合，并抑制其中的琉基活性。
[00巧]根據本發明，所述硫氧還蛋白還原酶特異性抑制化合物選自下述通式1或通式2所示結構的化合物，
[0026]
[0027]通式1中：
[002引X。為C或N;
[0029]Xi為Se;
[0030] Ri為氨，C1-C6烷基、C3-C7環烷基、
[0031] 其中Ra、化、Re、Rf、Rg各自獨立地為；C1-C6烷基；Rc，Rd各自獨立地為：氨、因素、 臘基、Ci-Ce烷基、Ci-Ce烷氧基、居基、SO3R、C00R、聚己二醇、O-SO3R或O-PO3RR，其中R可W為氨、Ci-Ce烷基或芳基；
[003引Rz和R3分別獨立的選自：氨、因素、臘