一種檢測酶活性及化學發光反應底物性能的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物分析化學技術領域，具體涉及一種檢測酶活性及化學發光反應底物性能的方法。
【背景技術】
[0002]化學發光是物質在進行化學反應過程中伴隨的一種光輻射現象，其發光機理是反應體系中的某些物質吸收了反應釋放的能量而由基態躍迀至激發態，從激發態返回基態時將能量以光輻射的形式釋放出來，產生發光現象。化學發光分析法則是依據某一時刻化學發光強度或化學發光總量來確定反應中相應組分含量的一種微量及痕量分析法，具有高靈敏度、線性范圍寬、設備簡單、操作簡便、易于實現自動化和分析快速等特點。近年來，與流動注射、電化學、高效液相色譜和毛細管電泳等方法的聯用，使得化學發光分析法已廣泛應用于藥物分析、臨床分析、環境分析和材料分析等領域。化學發光底物研發，選擇，穩定性測試等工作中，都需要有有效的性能評價手段。一般企業都是采用ELISA或者自制試劑盒中試用的方式進行評價。這兩種方法都存在影響因素太多，費時費力，成本高等問題。
[0003]酶的濃度和活性(或稱酶活力)是生物學領域中被高度關注的課題，如何快速，準確地測定酶的濃度和活性是實現正確使用酶以及酶制劑的基礎。目前大部分廠家采用的測定方法是電泳法，免疫法，生物法等方法。這些方法普遍存在檢測費用高，周期長，不夠準確等缺點。
【發明內容】
[0004]基于此，有必要提供一種快速，簡便，直接檢測酶活性及化學發光反應底物性能的方法以解決上述技術問題中的至少一種。
[0005]—種檢測酶活性及化學發光反應底物性能的方法，包括:發光杯、化學發光反應底物A、化學反應發光底物B、與所述化學發光反應底物A、化學反應發光底物B相配合檢測的酶溶液、感光設備，和所述化學發光反應底物A、化學反應發光底物B與所述酶溶液發光體系的建立，根據所述建立的發光體系檢測所述酶溶液活性或者酶濃度或者所述化學發光反應底物的性能；
[0006]所述發光體系的建立包括以下步驟:
[0007]1)將所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B按一定比例調制混合均勻，并置于所述發光杯中，備用；
[0008]2)將所述酶溶液稀釋至一系列不同的濃度；
[0009]3)將步驟2所述稀釋過的酶溶液至于所述發光杯中與所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B的混合液充分混合，并置入所述感光設備中進行光信號強度的測定，得出光信號強度；
[0010]4)根據步驟3得到的一系列不同濃度時所述的光信號強度確立所述酶溶液濃度或者與化學發光信號強度之間的線性關系。
[0011]進一步的，所述檢測酶溶液活性包括以下步驟:
[0012]1)將所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B按一定比例調制混合均勻，并置于所述發光杯中，備用；
[0013]2)將所述酶溶液稀釋至一定的濃度；
[0014]3)將步驟2所述稀釋過的酶溶液至于所述發光杯中與所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B的混合液充分混合，并置入所述感光設備中進行光信號強度的測定，得出光信號強度X;
[0015]4)將步驟3得到的光信號強度X與所述建立的發光體系進行比較，計算所述酶溶液的活性或者濃度或者所述化學發光反應底物的性能。
[0016]進一步的，所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B可以為能夠與所述酶溶液產生化學發光的任一種化學發光反應底物，包括且不限于魯米諾-雙氧水反應底物、磷酸或磷酸酯類的反應底物、含釕的化學反應底物。
[0017]進一步的，所述酶溶液為能夠與所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B進行化學發光反應并產生光信號的酶，包括且不限于過氧化氫酶、辣根過氧化氫酶或堿性磷酸酶。
[0018]進一步的，所述化學發光反應底物A可以為魯米諾發光液A液，所述化學反應發光底物B可以為魯米諾發光液B液。
[0019]進一步的，所述魯米諾發光液A液包括魯米諾、Tr is-緩沖液，所述魯米諾發光液B液包括過氧化物成分。
[0020]進一步的，所述魯米諾發光液A液和所述魯米諾發光液B液按照1:1的比例調制混合。
[0021]進一步的，所述發光杯的材料為對可見光無吸收的塑料。
[0022]進一步的，所述發光杯的內腔為長方體形，且所述發光杯的壁厚均勻。
[0023]進一步的，所述的感光設備為能夠測定光信號強度的設備，包括且不限于照相機、光電池、光電倍增管、化學發光測定設備。
[0024]進一步的，所述的感光設備為CR-0302型光信號閱讀儀。
[0025]本發明的有益效果:
[0026](一 )本發明提供的基于化學發光法檢測酶活性及化學發光反應底物性能的方法可以快速有效地準確測定多種能引起化學發光現象的酶的活性及濃度。本方法每次檢測只需2-3分鐘的時間，成本低。非常適合酶制劑生產企業或使用企業對酶制劑的性能進行快速評價。
[0027]( 二 )本發明提供的基于化學發光法檢測酶活性及化學發光反應底物性能的方法只要采用已知濃度的酶溶液就可以快速準確地評價化學發光底物的性能。特別是適用于兩種化學發光底物進行比較。
【附圖說明】
[0028]圖1為不同辣根過氧化氫酶濃度時的發光照片圖例。
[0029]圖2為化學發光信號強度與酶的濃度之間的線性關系曲線。
【具體實施方式】
[0030]本發明提供的一種檢測酶活性及化學發光反應底物性能的方法，包括發光杯、化學發光反應底物A、化學反應發光底物B、與所述化學發光反應底物A、化學反應發光底物B相配合檢測的酶溶液、感光設備，和所述化學發光反應底物A、化學反應發光底物B與所述酶溶液發光體系的建立，根據所述建立的發光體系檢測所述酶溶液活性或者所述化學發光反應底物的性能；
[0031 ] 所述發光體系的建立包括以下步驟:
[0032]1)將所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B按一定比例調制混合均勻，并置于所述發光杯中，備用；
[0033]2)將所述酶溶液稀釋至一系列不同的濃度；詳細地，以已知濃度的酶溶液作為參照酶溶液，對待測酶溶液進行測定和評價。將待測酶溶液配成一系列不同濃度的酶溶液，濃度范圍為lpg/ml-lug/ml，優選為lng/ml-100ng/ml，不同濃度的酶溶液產生的化學發光光信號強度不同，且與酶溶液的濃度呈線性關系。
[0034]3)將步驟2所述稀釋過的酶溶液置于所述發光杯中與所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B的混合液充分混合，并置入所述感光設備中進行光信號強度的測定，得出光信號強度；
[0035]4)根據步驟3得到的一系列不同濃度時所述的光信號強度確立所述酶溶液濃度或者與化學發光信號強度之間的線性關系。
[0036]進一步的，所述檢測酶溶液活性包括以下步驟:
[0037]1)將所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B按一定比例調制混合均勻，并置于所述發光杯中，備用；
[0038]2)將所述酶溶液稀釋至一定的濃度；
[0039]3)將步驟2所述稀釋過的酶溶液至于所述發光杯中與所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B的混合液充分混合，并置入所述感光設備中進行光信號強度的測定，得出光信號強度X;
[0040]4)將步驟3得到的光信號強度X與所述建立的發光體系進行比較，計算所述酶溶液的活性或者濃度或者所述化學發光反應底物的性能。
[0041]優選地，所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B可以為能夠與所述酶溶液產生化學發光的任一種化學發光反應底物，包括且不限于魯米諾-雙氧水反應底物、磷酸或磷酸酯類的反應底物、含釕的化學反應底物。
[0042]進一步的，所述酶溶液為能夠與所述化學發光反應底物A和化學反應發光底物B進行化學發光反應并產生光信號的酶，包括且不限于過氧化氫酶、辣根過氧化氫酶或堿性磷酸酶。
[0043]進一步的，所述化學發光反應底物A可以為魯米諾發光液A液，所述化學反應發光底物B可以為魯米諾發光液B液。本發明采用的化學發光反應底物A也可以是異魯米諾或者其衍生類物。所述魯米諾發光液A液包括魯米諾和Tris-緩沖液，所述魯米諾發光液B液包括過氧化物成分。調配混合時魯米諾發光液A液和所述魯米諾發光液B液按照1:1的比例調制混合。
[0044]優選地，所述發光杯采用對可見光基本無吸收的塑料制作。發光杯的內腔為長方體形，且所述發光杯的壁厚均勻。發光杯的內腔容量為300ul左右。整個內腔呈長方體形，使各位置溶液的厚度無顯著差異。使用該發光杯有發光均勻，操作簡便，測定準確等優點。發光杯的內腔具體尺寸為長20_寬5mm厚3_。當然地，發光杯的內腔尺寸可以根據需要進行調整，但最好是厚度均勻的以減少測定誤差。
[0045]優選地，所述的感光設備為能夠測定光信號強度的設備，包括且不限于照相機、光電池、光電倍增管、化學發光測定設備。當然地，其他的能夠檢測光信號強度的設備如高感度拍照系統均可以應用。在本發明的實施例中采用的感光設備為CR-0302型光信號閱讀儀。
[0046]本發明可以應用于檢測酶溶液活性，
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