用于確定藥物的改性效力程度的方法
【專利說明】
[0001] 本申請要求2013年3月18日提交的俄羅斯專利申請No. 2013111962的優先權， 以引用的方式將其整體并入本文。
技術領域
[0002] 本發明涉及藥物、特別是制藥領域。本發明用于確定藥物的改性效力、特別是其中 的至少一種組分為以可靠且可重復的方式根據順勢療法技術制備的藥物的改性效力。
【背景技術】
[0003] 活性強化形式
[0004] 根據順勢療法技術制備的藥物包括通過在載體（水或水-醇溶劑）中的多次連 續稀釋（由此降低濃度）以及對各連續稀釋液進行的振蕩由順勢療法強化（也稱為活 化）制備的藥物，參見例如RU 2191601C1;RU2192888C1;RU 2332236C1 (英文版為EP 2123300);以及RU 2438707 C 2 (U.S.專利公開2011/0008452)。通過順勢療法強化獲得 的制劑為含有低劑量或極低劑量的初始藥物的藥物；稀釋可進行至每分子處于分子形式 的初始藥物約為或超過1摩爾載體，需要注意的是，每摩爾的分子總數由阿伏伽德羅常數 (6.(^sxio 23IiioI1)給出。術語分子形式在下文中進一步定義。在固體的上下文中，稀釋指 的是磨碎。通過順勢療法技術，載體可獲得改性效力，當通過所述活性強化形式處理時，顯 示出改變起始物質的物理、化學和/或生物性質的能力（RU 2161955 Cl)。當通過所述活 性強化形式進行處理時，活性強化載體可獲得改變物質的物理、化學和/或生物性質的改 性效力，所述物質含有的分子與起始物質的分子結構相似。
[0005] 術語"分子形式"用于表示特定化學物質的一個或多個分子。因此，阿司匹林的分 子形式可為單個分子的乙酰水楊酸；處于分子形式的1摩爾阿司匹林由6. 022X IO23個乙酰 水楊酸分子組成，重180. 157克。
[0006] 術語"活性強化形式"用于表示含有物質的分子形式的初始溶液的順勢療法強化 產物。換句話說，根據順勢療法技術，使含有物質的分子形式（例如特定的抗體或有機分 子）的溶液接受連續重復稀釋并對每次獲得的溶液進行多次豎直振蕩。優選的稀釋劑（通 常稱為載體）為水或水-乙醇混合物。初始載體中的優選的分子形式的濃度為約〇. 5mg/ml 至約5. Omg/ml。可通過順勢療法強化由初始溶液制備活性強化形式，優選通過1份各在先 溶液的連續稀釋而成比例降低濃度的方法。因此，將1份初始溶液與99份載體混合（百倍 稀釋），并使之接受外部作用。優選外部作用涉及每次稀釋時的多次豎直振蕩（稀釋增效 法，dynamization)。這使得制得第1百倍稀釋液（表示為Cl)。通過將1份的第1百倍稀 釋液Cl與99份載體混合，制備第2百倍稀釋液（C2)。將這一過程另外重復10次，從而制 備第12百倍稀釋液C12。通常將單獨的容器用于后續各次稀釋，直至所需的稀釋系數。以 相應的稀釋系數實施類似程序，從而獲得例如C30、C50和C200稀釋液。這一方法在順勢療 法領域中被廣泛接受。參見例如 V.Schwabe，"Homeopathic medicines"，M.，1967,第 14-29 頁，以引用的方式將其并入本文用于所述目的。C12、C30和C200表示抗體的初級基質溶液 (原始ET劑，mother tincture)分別被稀釋10012、1003°和100 2°°倍的稀釋液。
[0007] 優選的活性強化形式通常為相同分子形式的多種百倍稀釋液的混合物。例如， C12、C30和C50稀釋液的混合物，或者C12、C30和C200稀釋液的混合物。當使用組合物的 各組分的多種順勢療法稀釋液（例如C12、C30、C50和C200)的混合物時，所述稀釋液根據 上述過程分別制備直至獲得倒數第二份稀釋液（例如，分別直至C11、C29和C199)，然后根 據混合物組成將1份的各組分加入一個容器中，并與所需量的載體（如，用97份以進行百 倍稀釋）進行混合。
[0008] 順勢療法強化的實例在US專利號7, 572, 441和7, 582, 294中描述，以引用的方式 將其整體并入本文用于所述目的。術語"活性強化形式"和術語"極低劑量"彼此完全支持 并基本上同義。
[0009] 藥物的定性和/或定量評價
[0010] 本領域已知用于確定物質的生物活性的方法（例如RU 2181890 C 1)。活性以物 質添加之前和之后對測試樣品的酶促應答率之比表示。在體外確定"樣品中的最佳物質濃 度"。然而，該方法不適于確定根據順勢療法技術制備的藥物的效力。
[0011] 本領域已知通過在恒定磁場的存在下向活化藥物施加線性的偏振相干光學輻射， 從而確定順勢療法藥物的效力。利用來自測試介質不同點的光學偏差模式中的偏振成分強 度的時間相關積累值來測量經散射的透射。進行分析以計算透過強度的極低波動的頻譜， 并將數據與標準樣本進行比較。參見例如RU 2112976 C 1。
[0012] 另外已知的是，用于定性測定順勢療法藥物或活性強化形式的方法。該方法包 括對具有標準樣本的測試介質進行處理，并記錄物理和化學參數的改變。使用其結構和 /或組成與已確定的順勢療法藥物或強化物質形式以及這些已知物質的抗體的結構和/ 或組成大體相似或相似的一組已知物質。識別順勢療法藥物或強化物質形式應基于已知 的物質，當將順勢療法藥物或強化物質形式引入反應介質中時，所述已知的物質與合適的 抗體反應并伴有改變，利用基于抗原-抗體反應的免疫化學分析方法記錄這些改變（RU 2195648 C2)。
[0013] 然而，現有技術方法并未提供與活性強化形式有關的藥物特性和效力的可靠且可 重復的定性和定量測定。這包括根據上述順勢療法技術制備的活化藥物。
【發明內容】
[0014] 確定第一物質的活性強化形式活性的方法，所述方法包括：提供第一物質的活性 強化形式；確保在所述活性強化形式中不含物質的分子形式；提供第二（治療）物質的分 子形式，所述第二物質在結構上類似于第一物質；利用合適的分析方法對所述第二物質的 所述分子形式的至少一種物理、化學或生物參數（A)進行測量；用所述第一物質的所述活 性強化形式對所述第二物質的所述分子形式進行處理；以及利用所述分析方法對所述經處 理的所述第二物質的分子形式的至少一種物理、化學或生物參數（A m)進行測量，其中，所述 物質的所述活性強化形式的所述活性為A與Am之間的差異程度。
[0015] 如上所述的方法進一步包括根據式X = C|A-AM|A，以相對單位（X)表示所述第一 物質的所述活性強化形式的所述活性。
[0016] 上述方法進一步包括：i)用所述第一物質的活性強化形式對第三物質的分子形 式進行處理；ii)用所述分析方法對所述第三物質的所述分子形式的至少一種物理、化學 或生物參數（B)進行測量；iii)利用所述分析方法對所述經處理的所述第三物質的分子形 式的至少一種物理、化學或生物參數（B m)進行測量，從而確定所述方法的特異性，其中，當 對于A-Am而言所述至少一種物理、化學或生物參數以統計學上顯著的方式改變而對于B-B m 而言不以統計學上顯著的方式改變時，認為所述方法是特異的。
[0017] 如上所述的方法，其中，所述分析方法為高效液相色譜。
[0018] 如上所述的方法，其中，所述分析方法為酶免疫測定分析。
[0019] 如上所述的方法，其中，所述分析方法為核磁共振。
[0020] 如上所述的方法，其中，所述確保不含物質的分子形式的步驟包括移出所述物質 的分子形式。
[0021] 如上所述的方法，其中，所述物質為抗體。
[0022] 如上所述的方法，其中，所述抗體為多克隆抗體。
[0023] 如上所述的方法，其中，所述物質為有機小分子。
[0024] 如上所述的方法，其中，所述活性強化形式是液體。
[0025] 如上所述的方法，其中，所述活性強化形式被浸漬至固態載體上。
[0026] 如上所述的方法，其中，所述第二物質為第一物質的受體。
[0027] 如上所述的方法，其中，所述第二物質為第一物質的抗體。
[0028] 如上所述的方法，其中，所述第一物質為針對抗原的抗體，并且所述第二物質為所 述抗原的受體。
[0029] 如上所述的方法，其中，所述第一物質為針對抗原的抗體，并且所述第二物質為所 述抗原。
[0030] 如上所述的方法，其中，所述第一物質為針對抗原的抗體，并且所述第二物質為所 述抗原。
[0031] 如上所述的方法，其中，所述第二物質為通過所述第一物質催化的酶。
【附圖說明】
[0032] 圖1示出與安慰劑相比，當添加活性強化載體時，IFN- γ I的化學位移的改變；
[0033] 圖2示出與安慰劑相比，當添加活性強化載體時，IFN-γ II的化學位移的改變；
[0034] 圖3示出與安慰劑相比，當添加活性強化載體時，IFN- γ III的化學位移的改變；
[0035] 圖4示出對于IFN- γ -Rl而言在323nm處的改變的時間進程；以及
[0036] 圖5示出對于IFN- γ -R2而言在323nm處的改變的時間進程。
【具體實施方式】
[0037] 參考所附的權利要求書對本發明進行限定。關于權利要求書，相關定義已在上文 中提供，另外的定義在此提供。
[0038] 本文使用的術語"抗體"意味著特異性地結合至另一分子的特定空間和極性結構、 并因此被定義為與另一分子的特定空間和極性結構互補的免疫球蛋白。權利要求書中所列 舉的抗體可包括完整的免疫球蛋白或其片段，可為天然抗體、多克隆抗體或單克隆抗體，并 可包括多個類及同種型，例如IgA、IgD、IgE、IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。免疫球蛋 白的片段可包括Fab、Fv和F(ab'）2以及Fab'等。單數"抗體（antibody)"包括復數"抗 體（antibodies)"。
[0039] 就第一物質和第二物質而言（其中，第一物質為抗體），術語"生物學上相