一種藥物中苯胺含量的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種藥物中苯胺含量的測定方法，尤其 涉及一種藥物中苯胺含量的測定方法。
【背景技術】
[0002] 苯胺（C6H7N)又稱阿尼林、氨基苯，是最重要的胺類物質之一，主要在制造染料、制 藥工業、樹脂等領域被廣泛應用。但苯胺毒性比較高，僅攝入少量就能引起中毒。主要是通 過皮膚、呼吸道和消化道進入人體，從而破壞血液造成溶血性貧血，損害肝臟引起中毒性肝 炎，甚至導致各種癌癥。因此藥物中對于苯胺這種基因毒性雜質的控制應更加嚴格，但苯胺 在某藥物中的含量測定方法未見報道，因尚無苯胺含量測定的方法，使藥物中苯胺的含量 一直未進行控制。
【發明內容】
[0003] 本發明目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種藥物中苯胺含量的測定方 法。
[0004] 本方法確定了含量質控指標，采用高效液相色譜法進行含量測定，該方法包括色 譜條件與系統適用性試驗、對照品溶液配制、供試品溶液配制及含量計算方法。
[0005] 本發明的藥物中苯胺含量的測定方法，包括如下步驟：取對照品溶液和供試品溶 液，注入液相色譜儀，記錄峰面積，色譜條件如下：
[0006] 液相色譜儀：Agilent 1260 ;
[0007] 色譜柱：Agilent poroshell 120EC_C18 3. 0 X 50mm，2. 7 μ m ;
[0008] 流速：0· 3 ~1.0 ml/min ;
[0009] 柱溫：30 °C ;
[0010] 填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；
[0011] 流動相A :乙腈；
[0012] 流動相B :pH = 5. 0~7. 0磷酸二氫鉀溶液；
[0013] 檢測波長：231nm±2nm ;
[0014] 進樣量：10 ~20μ1;
[0015] 洗脫過程中，流動相A、B濃度配比逐漸變化的線性梯度洗脫和流動相A、B配比恒 定不變的等度洗脫相結合，形成一個特定的梯度洗脫程序，所述的梯度洗脫程序如下：
[0016]
[0017] 對照品溶液連續進樣5次，其峰面積的RSD應不得大于2. 0%。
[0018] 所述的對照品溶液的配制方法如下：精密稱取苯胺對照品適量，置容量瓶中，加 50%的乙腈溶解并稀釋制成每1ml含苯胺0. 09 μ g的溶液，作為對照品溶液。
[0019] 所述的供試品溶液的配制方法如下：精密稱取某藥物樣品適量，置容量瓶中，加 50%的乙腈溶解并稀釋制成每1ml含藥物5mg的溶液，作為供試品溶液。
[0020] 所述的藥物中苯胺含量的測定方法，苯胺含量的計算：
[0021] 以峰面積按外標法，苯胺含量的計算公式如下：
[0023] 式中，Ax為供試品中苯胺的峰面積；
[0024] As為對照品中苯胺的峰面積；
[0025] Ms為對照品的稱樣量，單位mg ;
[0026] Mx為供試品的稱樣量，單位mg ;
[0027] Vs為對照品稀釋倍數；
[0028] Vx為供試品稀釋倍數；
[0029] a為對照品純度。
[0030] 苯胺作為基因毒性雜質，其在藥品中的含量要求極其嚴格，故本發明采用靈敏度 較高的高效液相色譜法檢測藥品中的痕量苯胺，以期更好的保障藥品的用藥安全。
[0031] 本發明的技術效果：經方法學驗證表明，本發明可用于一種藥物中基因毒性雜質 苯胺的含量檢測。
【附圖說明】
[0032] 圖1為實施例1典型圖譜，其中：a.苯胺對照品溶液；b.供試品溶液；
[0033] 圖2為實施例2典型圖譜，其中，c.苯胺對照品圖譜；d.供試品圖譜；
[0034] 圖3為實施例3典型圖譜，其中：e.苯胺對照品圖譜；f.供試品溶液圖譜。
【具體實施方式】
[0035] 下面結合實施例詳細說明本發明，但下面的實施例僅為發明較佳的實施方式，本 發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的人員在本發明披露的技術范圍內， 根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍 之內。
[0036] 實施例1
[0037] 本實施例的藥物中苯胺的測定方法，包括如下步驟：取對照品溶液和供試品溶液， 注入液相色譜儀，記錄峰面積，色譜條件如下：
[0038] 液相色譜儀：Agilent 1260 ;
[0039] 色譜柱：Agilent poroshell 120EC_C18 3. 0 X 50mm，2. 7 μ m ;
[0040] 流速：1.0 ml/min ;
[0041] 柱溫：30 °C ;
[0042] 填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；
[0043] 流動相A :乙腈；
[0044] 流動相B :pH = 5. 0磷酸二氫鉀溶液；
[0045] 檢測波長：231nm±2nm ;
[0046] 進樣量：10μ1;
[0047] 洗脫過程中，流動相A、B濃度配比逐漸變化的線性梯度洗脫和流動相A、B配比恒 定不變的等度洗脫相結合，形成一個特定的梯度洗脫程序，所述的梯度洗脫程序如下：
[0049] 其中，
[0050] 系統適用性試驗方法如下：取對照品溶液連續進樣5次，采用自動積分，其峰面積 的RSD不得大于2. 0%。
[0051] 對照品溶液配制方法如下：精密稱取苯胺對照品適量，加50%乙腈（V/V% )溶解 并定量稀釋制成每1ml含苯胺0. 09 μ g的溶液，作為對照品溶液。
[0052] 供試品溶液配制方法如下：精密稱取某藥物約50mg置IOml量瓶中，加乙腈適量超 聲使溶解，用50%乙腈（V/V% )稀釋至制成每1ml含5mg的溶液，作為供試品溶液。
[0053] 計算苯含量：按上述色譜條件取苯胺對照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀， 供試品溶液色譜圖中如有苯胺色譜峰，以峰面積按外標法計算，苯胺含量不得過18ppm，計 算公式如下：
[0055] 式中，
[0056] 0· 55為供試品中苯胺的峰面積；
[0057] 7. 33為對照品中苯胺的峰面積；
[0058] 36. 46為對照品的稱樣量，單位mg ;
[0059] 50. 32為供試品的稱樣量，單位mg ;
[0060] 400000為對照品稀釋倍數；
[0061] 10為供試品稀釋倍數；
[0062] 1 · 00為對照品純度。
[0063] 計算結果：苯胺含量為I. 36ppm。
[0064] 實施例2
[0065] 本實施例的藥物中苯胺的測定方法，包括如下步驟：取對照品溶液和供試品溶液， 注入液相色譜儀，記錄峰面積，色譜條件如下：
[0066] 液相色譜儀：Agilent 1260 ;
[0067]