一種測定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法
【專利說明】一種測定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法
[技術領域]
[0001] 本發明屬于分析化學技術領域，具體地說是一種測定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘 留量的方法。
[【背景技術】]
[0002] 中藥主要由植物藥（根、莖、葉、果）、動物藥（內臟、皮、骨、器官等）和礦物藥組 成。因植物藥占中藥的大多數，所以中藥也稱中草藥。中國各地使用的中藥已達5000種左 右，把各種藥材相配伍而形成的方劑，更是數不勝數。
[0003] 然而，隨著中藥生產、銷售和使用越來越廣泛，中藥中農藥殘留的問題也漸漸顯 現，并引起各國相關部門的重視。中藥的農藥殘留主要來源自三個方面，即種植過程中濫用 農藥而造成的直接污染，環境污染引起的間接污染和采收、加工、貯存及運輸過程產生的污 染。中草藥病蟲害種類繁多，用于中草藥的殺蟲劑種類也多不勝數，且不斷有新的殺蟲劑品 種被研制并投入使用。
[0004] 烯啶蟲胺殺蟲劑，是1995年日本武田藥品工業株式會社合成，繼吡蟲啉、啶蟲咪 之后開發的又一種新型產品，為新煙堿類殺蟲劑，具有獨特的化學與生物性質。主要作用于 昆蟲神經，對昆蟲的軸狀突觸受體具有神經阻斷作用，與其它的新煙堿類化合物相似，用于 水稻、蔬菜、草藥等作物，對各種蚜蟲、粉虱、水稻葉蟬和薊馬顯示了卓越活性，具有高效、低 毒、內吸和無交互抗性四大優點，而且殺蟲譜較廣，殘留期較長（以l〇〇mg/kg施用，可持續 15d)，對稻飛虱，在0. 5~0. 8mg/kg時，致死率仍可達100%，使用安全，害蟲不易產生抗體。 目前，在國內已有8家農藥企業取得了烯啶蟲胺原藥登記，含量為95%。烯啶蟲胺的合 成路線有4條，目前烯啶蟲胺的生產工藝主要由2-氯-5-氯甲基吡啶與乙胺胺化，得到 N-(6-氯-3-氯甲基吡啶）-N-乙胺，再與1，1-二氯-2-硝基乙烯、甲胺在堿性條件下縮 合，合成稀啶蟲胺原藥。
[0005] 作為低毒型殺蟲劑，烯啶蟲胺仍然對眼睛、皮膚等有刺激性。2014年8月開始實施 的GB2763-2014《食品中農藥最大殘留限量》（簡稱GB2763-2014)中雖沒有對中草藥中 烯啶蟲胺的最大殘留量做明確要求，但對油料和油脂及水果等食品明確規定了最大殘留限 量要求。
[0006] 對于烯啶蟲胺殘留量的檢測，已經有一些相關的報道。如用帶堿熱離子檢測器或 高靈敏度氮磷檢測器（CPMA及CPMF)的氣相色譜儀檢測其殘留量；采用高效液相色譜法，高 效液相色譜-質譜（或串聯質譜）法測定其殘留量；還有采用氣相色譜-質譜法測試其殘 留量等。但是這些方法針對的樣品基質僅涉及蔬菜（如甘藍）、水果（如蘋果、桔子等）或 土壤，并沒有針對中草藥中烯啶蟲胺殘留量檢測的相關文獻報道。然而，因基質復雜，中藥 中的重金屬、藥用成分均對檢測產生很大的干擾，一般的檢測方法難以應用于中草藥基質 的檢測。因而建立一個方法，對中草藥中烯啶蟲胺的殘留量進行準確檢測是非常必要的。
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【發明內容】
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[0007] 本發明的目的就是要解決上述的不足而提供一種有機溶劑提取、液相色譜-串聯 質譜聯用儀測定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法，不僅測定方法快速、簡單，而且能 夠實現中草藥中稀啶蟲胺殺蟲劑殘留量的準確測定，最低定量濃度可達〇. 〇lmg/kg。
[0008] 為實現上述目的設計一種測定中草藥中烯啶蟲胺殺蟲劑殘留量的方法，包括以下 步驟：
[0009] 1)樣品預處理：稱取適量樣品，將樣品粉碎并混合均勻，加入乙腈作為提取液，用 渦旋儀混勻，經振蕩浸泡后，在恒溫下超聲提取，將樣品提取溶液離心過濾；
[0010] 2)采用液相色譜-串聯質譜聯用儀測定所得的樣品提取溶液中烯啶蟲胺的濃度；
[0011] 3)根據所得的樣品提取溶液中烯啶蟲胺的濃度，計算樣品中烯啶蟲胺的殘留量。
[0012] 步驟1)中，樣品為中草藥固體樣品，稱取3g樣品于50mL旋蓋離心管中，加入30mL 乙腈，用禍旋儀混勾2min，振蕩浸泡30min后，再于40°C超聲萃取30min，禍旋2min后，以 6000r/min轉速離心lOmin，上清液過0. 20μm的聚四氟乙稀濾膜。
[0013] 步驟2)中，液相色譜-串聯質譜聯用儀的測定條件為：
[0014] 1)液相色譜儀采用EclipseplusC18色譜柱，柱長為150mm，柱內徑為2. 1mm，顆 粒內徑為3. 5μπι;
[0015] 2)液相流動相采用2mM醋酸銨水溶液和甲醇；
[0016] 3)串聯質譜儀采集選擇多反應監測正模式掃描模式，掃描離子對為271.D225. 2， 27L1>126· 0,27L1>56· 1，其中離子對 27L1>225· 2 用于定量。
[0017] 液相色譜儀中，柱溫箱溫度為40°C，載氣流速為0. 4mL/min，進樣體積為2μL。 串聯質譜儀中，離子源為ESI電噴霧離子源，采集方式為多反應監測模式，干燥氣溫度為 350°C，鞘氣溫度為375°C，干燥氣流速為6mL/min，噴霧針壓力為40psi，鞘氣流速為10mL/ min，毛細管電壓為正模式3000V，倍增管電壓為300V。
[0018] 步驟2)中，根據化合物在色譜柱上的保留時間及各化合物特有的質譜圖和離子 對峰度比，進行定性分析，對于經定性分析確認為陽性的農藥，采用外標法定量，最終結果 經過基質樣品加標回收率進行校正。
[0019] 步驟3)中，根據經標準曲線得到的樣品提取溶液中烯啶蟲胺的濃度，計算得到中 草藥樣品中稀啶蟲胺的殘留量，其最低定量濃度為〇. 〇lmg/kg。
[0020] 本發明同現有技術相比，具有如下有益效果：本發明是一項針對中草藥樣品經有 機溶劑提取，采用液相色譜-串聯質譜聯用儀測定其中烯啶蟲胺殘留量的方法，不僅測定 方法快速、簡單，而且能夠實現中草藥中烯啶蟲胺殘留量的準確測定，并可達到很低的檢出 限；本發明解決了目前對于中草藥樣品類型，沒有方法準確測定其中烯啶蟲胺殘留量的問 題，值得推廣應用。
[【附圖說明】]
[0021] 圖1是本發明的實施例1中使用液相色譜-串聯質譜聯用儀檢測銀杏葉中烯啶蟲 胺殘留量所得的MRM色譜圖。
[【具體實施方式】]
[0022] 本發明屬于分析化學領域中對中草藥中烯啶蟲胺殘留量的測定，其原理為：將中 草藥樣品中的烯啶蟲胺經有機溶劑提取，再由液相色譜-串聯質譜聯用儀測定烯啶蟲胺的 殘留量。
[0023] 其中，液相色譜-串聯質譜聯用儀的測定條件為：
[0024] 1)液相色譜柱采用EclipseplusC18色譜柱，規格為柱長150mm，柱內徑2. 1mm， 顆粒內徑3. 5μm;
[0025] 2)液相色譜使用的流動相采用2mM醋酸銨水溶液和甲醇；
[0026] 3)串聯質譜儀采集選擇多反應監測正模式掃描模式，掃描離子對為271.D225. 2， 27L1>126· 0,27L1>56· 1，其中離子對 27L1>225· 2 用于定量。
[0027] 實施例1:銀杏葉中烯啶蟲胺的測定
[0028] 1.樣品的制備：
[0029] 將銀杏葉樣品用食品料理器粉碎，混合均勻后于潔凈干燥樣品袋中密封保存。準 確稱取3g混合均勾的銀杏葉試樣（精確至0.Olg)于50mL旋蓋離心管中，加入30mL乙腈， 用渦旋儀混勻2min。將離心管置于搖床上振搖30min，充分浸泡試樣，再于40°C超聲萃取 30min，禍旋2min后以6000轉速離心lOmin。上層清液經0. 20μm的聚四氟乙稀濾膜過濾， 用液相色譜-串聯質譜聯用儀分析。
[0030] 2.設定儀器參數：
[0031] 1)液相色譜儀檢測條件
[0032]色譜柱：EclipseplusC18, 2.ImmX150mm，3. 5μm
[0033] 柱溫箱溫度：40°C
[0034]載氣流速：0·4m