六叔丁基-六己氧基-六苯并[ab,de,lm,op,rs,uv]暈蒄作為MALDI-TOF MS基質在小分子 ...的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于MALDI-TOF MS的應用技術領域，具體涉及一種六叔丁基-六己氧 基-六苯并[ab, de, lm, op, rs, uv]暈蔻（HBCCs)作為MALDI-TOF MS基質在小分子（分子 量小于500Da)檢測中的應用。
【背景技術】
[0002] 80年代末發展起來一種新型軟電離生物質譜即基質輔助激光解吸/電離飛行時 間質譜（MALDI-TOF MS)，其具有準確度好、靈敏度及分辨率高等特點。MALDI-TOF MS是一種 簡單快速的技術，主要用于分析大的生物分子，因此它已經廣泛地用于分析蛋白質、多肽、 核甘酸等。它具有較好的鹽的耐受性，對樣品前處理要求較低，極大地節省了勞力。
[0003] 在MALDI-TOF MS中，基質起著吸收及傳遞激光能量、使樣品離子化的作用。然而 傳統的基質如a-氰基-4-羥基肉桂酸（CHCA)、二羥基苯甲酸（DHB)以及2, 4, 6-三羥基苯 乙酮（THAP)等在激光輻射下易裂解，因而在低分子量區域（<500Da)會產生不理想的基質 離子干擾，同時由于基質與分析物異相共結晶而使檢測器形成飽和熱點，從而造成小分子 的觀察和表征的困難，以至于很難利用傳統的基質去分析小分子物質。近年來研究發現新 型碳材料如石墨烯，氧化石墨烯，氮參雜的石墨烯，碳點以及碳納米管等皆可作為MALDI基 質用于小分子的測量，然而碳材料作為新的MALDI基質與靶板結合的不牢固，離子化過程 中容易飛離靶板污染離子源，同時石墨烯與碳納米管等材料在溶液中分散性不好，易團聚， 存在重現性不理想的問題。
[0004] 2014年，魏俊發課題組對納米石墨稀的合成研究取得了新的突破（J. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 5057-5064)，利用自底而上的方法合成了多種多環芳烴化合物，例如具有25 個苯環的多環芳烴化合物HBCCs，其結構如下所示。
[0005]
[0006] 該類多環芳烴化合物具有與石墨烯類似的光學性質和電學性質，同時可溶于有機 溶劑，被認為在下一代電子設備和熒光方面具有潛在的應用。
【發明內容】
[0007] 本發明所要解決的技術問題在于為HBCCs提供一種新用途，即其作為MALDI-T0F MS基質在小分子檢測中的新應用，以克服MALDI-TOF MS的傳統基質只能分析大分子物質 的缺點。
[0008] 解決上述技術問題所采用的技術方案是：六叔丁基-六己氧基_六苯并 [ab, de, lm, op, rs, uv]暈蔻作為MALDI-TOF MS基質在檢測小分子中的用途，所述的小分子 為氨基酸、藥物小分子、糖類小分子、芳香烴化合物等。
[0009] 上述的氨基酸為丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴 氨酸、精氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、組氨酸、苯丙氨酸等。
[0010] 上述的藥物小分子為喹諾酮類藥物、磺胺類藥物、雜環類藥物、留體激素類藥物、 中藥有效成分等，其中所述的磺胺類藥物為磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲 惡唑、酞磺胺噻唑、磺胺醋酰等，喹諾酮類藥物為環丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、依諾沙星、 加替沙星、培氟沙星等。
[0011] 上述的糖類小分子為木糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖等。
[0012] 上述的芳香烴化合物為單環芳烴、多環芳烴、非苯系芳烴等。
[0013] 采用HBCCs檢測小分子的方法是：將HBCCs直接用作MALDI-TOF MS基質對氨基 酸、藥物小分子、糖類小分子以及芳香族類化合物等進行檢測。
[0014] 本發明克服了 MALDI-TOF MS的傳統基質只能分析大分子物質的缺點，采用HBCCs 作為MALDI-TOF MS基質用于分析小分子物質。HBCCs具有強的紫外吸收，可溶于有機溶劑， 作為MALDI-TOF MS基質不易飛離靶板，不聚合，對離子源幾乎沒有污染。
【附圖說明】
[0015] 圖1是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質的質譜圖。
[0016] 圖2是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測天冬氨酸的質譜圖。
[0017] 圖3是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測精氨酸的質譜圖。
[0018] 圖4是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測苯丙氨酸的質譜圖。
[0019] 圖5是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測磺胺噻唑的質譜圖。
[0020] 圖6是HBCCs作為MALDI-TOFMS基質檢測磺胺甲嘧啶的質譜圖。
[0021] 圖7是HBCCs作為MALDI-TOFMS基質檢測磺胺二甲嘧啶的質譜圖。
[0022] 圖8是HBCCs作為MALDI-TOFMS基質檢測環丙沙星的質譜圖。
[0023] 圖9是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測氧氟沙星的質譜圖。
[0024] 圖10是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測諾氟沙星的質譜圖。
[0025] 圖11是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測黃芩苷的質譜圖。
[0026] 圖12是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測乙酰丙嗪的質譜圖。
[0027] 圖13是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測恩曲他濱的質譜圖。
[0028] 圖14是HBCCs作為MALDI-TOF MS基質檢測木糖的質譜圖。
[0029] 圖15是HBCCs作為MALDI-TOFMS基質檢測對硝基酚的質譜圖。
[0030] 圖16是HBCCs作為MALDI-TOFMS基質檢測間苯二酚的質譜圖。
[0031] 圖17是HBCCs作為MALDI-TOFMS基質檢測1，5-二氨基萘的質譜圖。
[0032] 圖18是HBCCs作為MALDI-TOFMS基質檢測蒽的質譜圖。
【具體實施方式】
[0033] 下面結合附圖和實施例對本發明進一步詳細說明，但本發明的保護范圍不僅限于 這些實施例。
[0034] 實施例1
[0035] HBCCs作為MALDI-TOF MS基質在檢測天冬氨酸中的用途，具體檢測方法如下：
[0036] 將lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超聲5min，得到黃色透明的HBCCs三氯甲烷 溶液；將lmg天冬氨酸溶于lmL二次蒸餾水中，超聲10min，得到無色透明的天冬氨酸水溶 液。取1 y L HBCCs三氯甲烷溶液快速滴到MALDI-TOF MS樣品靶板上，自然風干，吹去表面 浮塵，進行MALDI-TOF MS分析，分析結果如圖1所示。由圖可見，在分子量小于500的范圍 內，HBCCs作為MALDI-TOF MS基質幾乎沒有分子離子峰，說明其對小分子檢測不會產生干 擾。
[0037] 取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L天冬氨酸水溶液，混合均勻，取2 y L混合液 快速滴到MALDI-TOF MS樣品靶板上，常溫下自然晾干，進行MALDI-TOF MS分析，分析結果 見圖2。由圖可見，在m/z為133處是天冬氨酸分子的信號峰，且分子離子峰的強度明顯，說 明HBCCs對天冬氨酸的檢測效果良好，可用于天冬氨酸的檢測。
[0038] 實施例2
[0039] HBCCs作為MALDI-TOF MS基質在檢測精氨酸中的用途，具體檢測方法如下：
[0040] 將lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超聲5min，得到黃色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；將lmg L-精氨酸溶于lmL二次蒸餾水中，超聲10min，得到無色透明的L-精氨酸水溶 液。取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L L-精氨酸水溶液，混合均勻，取2 y L混合液快速 滴到MALDI-TOF MS樣品靶板上，常溫下自然晾干，進行MALDI-TOF MS分析，分析結果見圖 3。 由圖可見，在m/z為175、197及213三處分別是精氨酸分子加氫咼子、鈉咼子以及鉀咼 子的信號峰，三處分子離子峰的強度明顯，說明HBCCs對精氨酸的檢測效果良好，可用于精 氨酸的檢測。
[0041] 實施例3
[0042] HBCCs作為MALDI-TOF MS基質在檢測苯丙氨酸中的用途，具體檢測方法如下：
[0043] 將lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超聲5min，得到黃色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；將lmg苯丙氨酸溶于lmL二次蒸餾水中，超聲lOmin，得到無色透明的L-苯丙氨酸水溶 液。取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L苯丙氨酸水溶液，混合均勻，取2 y L混合液快速 滴到MALDI-TOF MS樣品靶板上，常溫下自然晾干，進行MALDI-TOF MS分析，分析結果見圖 4。 由圖可見，在m/z為188及204兩處分別是L-苯丙氨酸分子加鈉尚子以及鉀尚子的信 號峰，兩處分子離子峰的強度明顯，說明HBCCs對苯丙氨酸的檢測效果良好，可用于苯丙氨 酸的檢測。
[0044] 實施例4
[0045] HBCCs作為MALDI-TOF MS基質在檢測磺胺噻唑中的用途，具體檢測方法如下：
[0046] 將lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超聲5min，得到黃色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；將lmg磺胺噻唑溶于lmL甲醇中，超聲10min，得到無色透明的磺胺噻唑甲醇溶液。取 2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L磺胺噻唑甲醇溶液，混合均勻，取2 y L混合液快速滴到 MALDI-TOF MS樣品靶板上，常溫下自然晾干，進行MALDI-TOF MS分析，分析結果見圖5。由 圖可見，在m/z為294處是磺胺噻唑分子加鉀離子的信號峰，分子離子峰的強度明顯，說明 HBCCs對磺胺噻唑的檢測效果良好，可用于磺胺噻唑的檢測。
[0047] 實施例5
[0048] HBCCs作為MALDI-TOF MS基質在檢測磺胺甲嘧啶中的用途，具體檢測方法如下：
[0049] 將lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超聲5min，得到黃色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；將lmg磺胺甲啼啶溶于lmL甲醇中，超聲10min，得到無色透明的磺胺甲啼啶甲醇溶液。 取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L磺胺甲嘧啶甲醇溶液，混合均勻，取2 y L混合液快速 滴到MALDI-TOF MS樣品靶板上，常溫下自然晾干，進行MALDI-TOF MS分析，分析結果見圖 6。由圖可見，在m/z為303處是磺胺甲嘧啶分子加鉀離子的信號峰，分子離子峰的強度明 顯，說明HBCCs對磺胺甲嘧啶的檢測效果良好，可用于磺胺甲嘧啶的檢測。
[0050] 實施例6
[0051] HBCCs作為MALDI-TOF MS基質在檢測磺胺二甲嘧啶中的用途，具體檢測方法如 下：
[0052] 將lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超聲5min，得到黃色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；將lmg磺胺二甲啼啶溶于lmL甲醇中，超聲10min，得到無色透明的磺胺二甲啼啶甲醇 溶液。取2 y L HBCCs三氯甲烷溶液和2 y L磺胺二甲嘧啶甲醇溶液，混合均勻，取2 y L混 合液快速滴到MALDI-TOF MS樣品靶板上，常溫下自然晾干，進行MALDI-TOF MS分析，分析 結果見圖7。由圖可見，在m/z為317處是磺胺二甲嘧啶分子加鉀離子的信號峰，分子離子 峰的強度明顯，說明HBCCs對磺胺二甲嘧啶的檢測效果良好，可用于磺胺二甲嘧啶的檢測。
[0053] 實施例7
[0054] HBCCs作為MALDI-TOF MS基質在檢測環丙沙星中的用途，具體檢測方法如下：
[0055] 將lmg HBCCs溶于lmL三氯甲烷中，超聲5min，得到黃色透明的HBCCs三氯甲烷溶 液；將lmg環丙沙星鹽酸鹽溶于lmL二次蒸餾水中，超聲lOmin，得到無色透明的環丙沙星 鹽酸鹽水溶液。取2