一種測定(4r,6r)-6-胺乙基-2,2-二甲基-1,3-二氧六環-4-乙酸叔丁酯含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥化工質量檢測技術領域，具體涉及一種測定（4R，6R)-6-胺乙 基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六環-4-乙酸叔丁酯含量的方法。 【背景技術】
[0002] (4R，6R) -6-胺乙基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六環-4-乙酸叔丁酯，簡寫為ATS-9， 分子式為 C14H27NO4,英文命名為（4R, cis)_l, l-Dimethylethyl-6-aminoethyl_2, 2-dimethy 1-1，3-dioxane-4_acetate，其化學結構式為 ，是合成阿托伐他汀鈣 HeN: 的關鍵中間體。阿托伐他汀鈣商品名為立普妥，屬于他汀類藥物，是治療高膽固醇血癥和混 合型高脂血癥的有效藥物，由Warner-Lambert (華納-蘭伯特，現并入美國輝瑞公司）公司 研制，并于1997年獲FDA批準在美國上市，其專利保護于2011年到期。
[0003] 作為合成阿托伐他汀鈣的關鍵中間體，ATS-9的質量好壞直接影響最終產品阿 托伐他汀鈣的質量和收率。目前ATS-9的合成及檢測已有多篇文獻報道，如Junjie Liu 等用（4R，6R)-6-疊氮乙基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六環-4-乙酸甲酯為原料，堿性條件 水解，再同二碳酸二叔丁酯酯化，最后在三苯基膦催化下生成產物ATS-9 (Junjie Liu, Che-Chang Hsu, Chi-Huey Wong. Tetrahedron Letters, 45, 2439-2441) ;Fang-Jun Xiong等以（R)-2-氯-環氧乙燒為起始原料，經過多步反應最終合成ATS-9 (Fang-Jun Xiong, Jie Li, Xiao-Fei Chen, Wen-Xue Chen, Fen-Er Chen. Tetrahedron:Asymmet ry，25, 1205-1208);Yuji Kawato等以〇?)-5-芐基-3-羥基4，^二烷基戊烷硫代酰胺為原 料，經過多步反應合成出了 ATS-9 (Yuji Kawato, Mitsutaka Iwata, Ryo Yazaki, Naoya Kumagai, Masakatsu Shibasaki. Tetrahedron, 67, 6539_6546);Blackley用FactorFour VF-5MS (30m*0· 25mm)毛細管色譜柱對 ATS-9 進行 GC-MS 檢測（Blackley, US 8563753B2, 2013. 10. 22)，但是沒有對其含量測定的報道。為準確測定其含量，對其進行質量控制，進而 提高并保證阿托伐他汀鈣的質量，建立一種能準確測定ATS-9含量的方法非常必要。
【發明內容】
[0004] 本發明解決的技術問題是提供了一種定量準確、方便可靠且重復性好的測定 (4R，6R)-6-胺乙基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六環-4-乙酸叔丁酯含量的方法，采用該方法 能使ATS-9及其有關物質相互之間實現很好的分離，使該方法也可測定其它有關物質。
[0005] 本發明為解決上述技術問題采用如下技術方案，一種測定（4R，6R)-6_胺乙 基-2, 2-二甲基-1，3-二氧六環-4-乙酸叔丁酯含量的方法，其特征在于具體步驟為： (1) 配制供試品儲備液，精密稱取200mg ATS-9供試品置于IOmL容量瓶中并用溶劑 1，2-二氯乙燒稀釋定容配制成質量濃度為20mg/mL的供試品儲備液； (2) 配制對照品儲備液，精密稱取200mg ATS-9對照品置于IOmL容量瓶中并用溶劑 1，2-二氯乙燒稀釋定容配制成質量濃度為20mg/mL的對照品儲備液； (3) 配制內標儲備液，精密稱取200mg正十六烷置于IOmL容量瓶中并用溶劑1，2-二氯 乙烷稀釋定容配制成質量濃度為20mg/mL的內標儲備液； (4) 配制供試品溶液，精密移取0. 8mL供試品儲備液和0. 4mL內標儲備液置于5mL容量 瓶中并用溶劑1，2-二氯乙烷稀釋定容，搖勻備用； (5) 配制對照品溶液，精密移取0. 8mL對照品儲備液和0. 4mL內標儲備液置于5mL容量 瓶中并用溶劑1，2-二氯乙烷稀釋定容，搖勻備用； (6) 使用Agilent DB-624毛細管氣相色譜柱對供試品溶液和對照品溶液進行檢測，柱 溫采用程序升溫，柱溫150°C保留2min，以40°C /min的升溫速率升溫至220°C保留3min，以 20°C /min的升溫速率升溫至240°C保留8min，以氫火焰離子化檢測器為檢測器，檢測器溫 度為300°C，汽化室溫度為300°C，柱流速為2. 5mL/min，分流比為10: 1，氮氣作為載氣，空氣 流量400mL/min，氫氣流量35mL/min，尾吹氣流量40mL/min，然后分別取步驟（4)和（5)配 制的供試品溶液和對照品溶液注入氣相色譜儀，進樣量分別為2 μ L ; (7) 根據氣相色譜圖采用內標法計算供試品溶液中ATS-9的含量。
[0006] 本發明選用的溶劑為1，2-二氯乙烷，因為ATS-9和內標物在該溶劑中溶解情況 好且不干擾主峰及有關物質的分離；內標物為正十六烷，因為正十六烷沸點（286. 79°C)與 ATS-9的沸點接近，出峰時間接近且與ATS-9能完全分離，在ATS-9及有關物質出峰位置 無干擾；所用毛細管氣相色譜柱為Agilent DB-624,用此型號毛細色譜柱ATS-9峰形較 為對稱，對稱因子為1. 26,且主峰及主要有關物質峰的分離度符合要求；柱溫采用程序升 溫方式，因為恒溫下沸點接近的雜質不能完全分離，故采用程序升溫方式；汽化室溫度為 300°C，在此溫度下供試品能夠完全汽化；柱流速為2. 5mL/min，該流速下產品出峰時間合 適，也是所選用毛細管氣相色譜柱的最佳流速。
[0007] 本發明利用Agilent DB-624 (質量百分含量6%的氰丙基和質量百分含量94%的 甲基聚硅氧烷)毛細管氣相色譜柱，采用GC方法、內標定量法使主成分與有關物質分離并準 確計算供試品溶液中ATS-9的含量。結果表明，ATS-9在0. 8128-4. 0638mg/mL(R2=0. 9992) 范圍內，線性關系良好。本方法能夠快速、準確、簡便地檢測阿托伐他汀鈣關鍵中間體ATS-9 的含量，并且該方法也能夠同時檢測ATS-9中的其它有關物質的含量。
【附圖說明】
[0008] 圖1是本發明實施例1所述的氣相色譜圖； 圖2是本發明實施例2所述的氣相色譜圖； 圖3是本發明實施例3所述的氣相色譜圖； 圖4是本發明實施例5所述色譜條件下各有關物質的保留時間； 圖5是本發明實施例6中ATS-9對照品溶液的氣相色譜圖； 圖6是本發明實施例6中ATS-9供試品溶液的氣相色譜圖； 圖7是本發明實施例7中空白溶劑1，2-二氯乙烷溶液的氣相色譜圖； 圖8是本發明實施例7中ATS-9對照品溶液的氣相色譜圖； 圖9是本發明實施例7中ATS-9供試品溶液的氣相色譜圖。
【具體實施方式】
[0009] 以下通過實施例對本發明的上述內容做進一步詳細說明，但不應該將此理解為本 發明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發明上述內容實現的技術均屬于本發 明的范圍。
[0010] 實施例中所用的儀器及試劑如下： Thermo Scientific Trace 1300氣相色譜儀，配有AI 1310自動進樣器；氫火焰離子 化檢測器（FID);Chr〇mele〇n 7. 1色譜工作站；KQ3200DE數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀 器有限公司）；電子分析天平(梅特勒，十萬分之一）； ATS-9 對照品（Toronto Research Chemicals Inc.批號 20130929,質量百分含 量為 98%) ;ATS-9 供試品（實驗室自制，批號 20141012、20141101、20141205、20141210、 20141220、20150119、20150121、20150202);正十六烷、1，2-二氯乙烷、無水乙醇等試劑均為 國產分析純。
[0011] 實施例1 采用 Thermo Fisher TG-624 毛細管氣相色譜柱（30m*0. 32mm，1. 8 μL?);柱溫 150°C保 留2min，以40°C /min的升溫速率升溫至220°C保留3min，以20°C /min的升溫速率升溫至 240°C保留8min ;汽化室溫度300°C ;柱流速2. 5mL/min，分流比30:1 ;檢測器為氫火焰離子 化檢測器，溫度為300°C ;載氣為高純氮氣；進樣量為2yL;空氣流量400mL/min，氫氣流量 35mL/min，尾吹氣流量40mL/min。精密稱定ATS-9供試品（批號20141012)適量置于IOmL 容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋定容配制成質量濃度約為20mg/mL的供試品儲備液；精密移取 0. SmL上述供試品儲備液置于5mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋定容搖勻即得供試品溶液。取 上述供試品溶液注入氣相色譜儀，平行測定2次。氣相色譜圖如圖1，由圖1可以看出，該色 譜條件下，基線嚴重漂移，嚴重影響了分析結果的準確性。
[0012] 實施例2 采用Agilent DB-624毛細管氣相色譜柱（30m*0. 32mm，l. 8μπι)，柱溫240°C保留 20min ;汽化室溫度250°C;柱流速1.0 mL/min，分流比20:1 ;檢測器為氫火焰離子化檢測器， 溫度為270°C ;載氣為高純氮氣；進樣量為2 μ L ;空氣流量400mL/min，氫氣流量35mL/min， 尾吹氣流量40mL/min。精密稱定ATS-9供試品(批號20141101)適量置于IOmL容量瓶中， 用1，2-二氯乙烷稀釋定容配制成質量濃度約為20mg/mL的供試品儲備液；精密移取0. 8mL 上述供試品儲備液置于5mL容量瓶中，用1，2-二氯乙烷稀釋定容搖勻即得供試品溶液。取 上述供試品溶液注入氣相色譜儀，平行測定2次。氣相色譜圖如圖2,由圖2可以看出，恒定 柱溫時，峰個數明顯偏少，表明這種色譜條件下，分離效果較差。
[0013] 實施例3 采用 Thermo Fisher TG-5MS 毛細管氣相色譜柱（30m*0. 32mm，0.5 μ m)，柱溫 100 °C 保留3min，以10°C /min的升溫速率升溫至320°C保留20min ;汽化室溫度300°C ;柱流速 2.5mL/min，分流比30:1 ;檢測器為氫火焰離子化檢測器，溫度為320°C ;載氣為高純氮氣； 空氣流量400mL/min，氫氣流量35mL/min，尾吹氣流量40mL/min ;進樣量為2. 5 μ L。精密稱 定ATS-9供試品（批號20141205)適量置于IOmL容量瓶中，用DMF稀釋定容配制成質量濃 度約為20mg/mL的供試品儲備液；精密移取供試品儲備液1.0 mL置于5mL容量瓶中，用DMF 稀釋定容搖勻即得供試品溶液。取上述供試品溶液注入色譜儀，平行測定2次。氣相色譜 圖如圖3,由圖3可以看出，盡管該色譜條件下主成分ATS-9與大部分雜質能夠分離，但保留 時間為13. 368的雜質峰與主峰ATS-9 (出峰時間13. 217)過于