一種蝦中磺胺類藥物殘留的快速檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種水產品中磺胺類藥物殘留的檢測方法，特別涉及一種蝦中磺胺類藥物殘留的快速檢測方法。
【背景技術】
[0002]磺胺類藥物是以對氨基苯磺酰胺結構為主體的合成抗菌素的總稱，是一類用于預防和治療細菌感染性疾病的化學治療藥物。近年來，隨著國內外對磺胺類藥物殘留的分析進行了多方面研究，出現了許多檢測磺胺類藥物的方法，包括高效液相色譜法(如CN101639466A)、液相色譜-質譜法、膠體金免疫層析法、免疫分析法和近紅外光譜法等。但只注重于實驗室傳統檢測，且存在樣品前處理步驟復雜、耗費時間長、低通量、成本高的限制。然而，水產品中藥物殘留的快速檢測技術十分匱乏，當前實驗室傳統的檢測方式很難實現快速、高效的檢測效果，越來越不適應食品的生產、流通和銷售特點。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于提供一種蝦中磺胺類藥物殘留的快速檢測方法，前處理簡單，檢測時間短，檢測成本低，無需大型儀器，可現場檢測，肉眼觀察顏色變化即能快速得到檢測結果，能夠快速、高效檢測蝦中磺胺類藥物殘留。
[0004]本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:
一種蝦中磺胺類藥物殘留的快速檢測方法，包括如下步驟:
(O樣品前處理:取新鮮對蝦的蝦肉，將蝦肉研磨勻漿得蝦肉漿，取蝦肉漿5.0g，加入5.0g的無水硫酸鈉和甲醇20mL，振搖2分鐘后，靜置分層或4000轉/min離心5min，所得上清液作為樣品處理液；
(2)檢測:在5mL樣品處理液中加入2mL衍生化試劑01，振搖5分鐘后加入0.1mL衍生化試劑02，振搖I分鐘，靜置5分鐘，觀察衍生后的上層液體顏色，若上層液體顯紅色則表明樣品中含有磺胺類藥物，其含量在lOOyg/kg以上；若上層液體不顯紅色，則采用層析柱處理后二次檢測。
[0005]發明人經過長期研究，開發了適合蝦中磺胺類藥物殘留的特定快速檢測方法。本發明的原理:采用柱前衍生，化學顯色法。本發明采用甲醇提取蝦肉中的磺胺類藥物殘留，通過磺胺類藥物殘留與特定的衍生化試劑快速衍生反應，形成穩定的紫紅色衍生物，肉眼觀察顯色結果從實現快速檢測，檢測靈敏度最低可達50 μ g/kg。該方法檢測限滿足歐盟及我國對磺胺類藥物檢測的需求，且能夠實現蝦中多種磺胺類藥物的現場快速檢測。
[0006]本發明在蝦肉漿中同時加入無水硫酸鈉和甲醇，甲醇用于提取蝦肉中的磺胺類藥物殘留，無水硫酸鈉能排除水分的干擾，同時，無水硫酸鈉能使得蝦肉組織分散的更均勻，利于甲醇更快速、高效的提取磺胺類藥物殘留。
[0007]樣品處理液經本發明選擇的衍生化試劑衍生后，磺胺類藥物含量在100 μ g/kg以上的樣品即能看到明顯的顯色反應，從而能快速得出檢測結果。而為了進一步提高檢測的精度，對磺胺類藥物含量在100 μ g/kg之下的樣品，樣品處理液經本發明選擇的衍生化試劑衍生后，其基本不顯色或肉眼難以觀察到顯色，本發明采用特定的層析柱處理對衍生后的上層液體濃縮，洗脫后再觀察顯色結果，對于磺胺類藥物含量在50 μ g/kg以上，100 μ g/kg之下的樣品，能看到明顯的顯色反應，進一步提尚了本發明的檢測精度，滿足更尚的檢測需求。
[0008]作為優化方案，一種蝦中磺胺類藥物殘留的快速檢測方法，包括如下步驟:
(O樣品前處理:取新鮮對蝦的蝦肉，將蝦肉研磨勻漿得蝦肉漿，取蝦肉漿5.0g，加入5.0g的無水硫酸鈉和甲醇20mL，振搖2分鐘后，靜置分層或4000轉/min離心5min，所得上清液作為樣品處理液；
(2)檢測:在5mL樣品處理液中加入2mL衍生化試劑01，振搖5分鐘后加入0.1mL衍生化試劑02，振搖I分鐘，靜置5分鐘后直接采用層析柱處理后檢測。層析柱處理后檢測操作為:A、層析柱活化:依次加入2mL甲醇及5mL蒸餾水于層析柱中，控制流速為1_2滴/秒，棄去流出液；B、層析檢測:將上層液體加入A步活化后的層析柱中，再加入2mL去離子水淋洗柱子，抽干；最后加0.SmL乙酸乙酯洗脫，觀察洗脫液顏色，若洗脫液顯紫紅色，則表明樣品中含有磺胺類物質，其含量在50 μ g/kg以上。
[0009]作為優選，層析柱處理后二次檢測操作為:
A、層析柱活化:依次加入2mL甲醇及5mL蒸餾水于層析柱中，控制流速為1_2滴/秒，棄去流出液；
B、層析檢測:將上層液體加入A步活化后的層析柱中，再加入2mL去離子水淋洗柱子，抽干；最后加0.SmL乙酸乙酯洗脫，觀察洗脫液顏色，若洗脫液顯紅色，則表明樣品中含有磺胺類物質，其含量在50 μ g/kg以上，100 μ g/kg之下。
[0010]作為優選，步驟(2)中上層液體顯紅色具體為上層液體顯紫紅色。
[0011]作為優選，步驟B中洗脫液顯紅色具體為洗脫液顯紫紅色。
[0012]作為優選，所述層析柱內裝填HLB反相色譜填料和硅膠填料的混合物，HLB反相色譜填料與硅膠填料的質量比為4:1。本發明層析柱裝填的填料有特定要求，要適合衍生后的上層液體才能起到明顯的濃縮，提高檢測效果的作用。HLB反相色譜填料對衍生物具有很強的萃取濃縮衍生物的能力，硅膠填料不僅具有很強的萃取濃縮衍生物的能力，并且還能抑制蝦樣中蛋白質的吸附力，降低蛋白質的干擾。二者結合使用，取得良好的濃縮作用。
[0013]作為優選，所述HLB反相色譜填料平均粒度:40-60 μ m，平均孔徑:8θΑ。
[0014]作為優選，所述硅膠填料平均粒度:40-60 μ m，平均孔徑:5θΑ。
[0015]作為優選，步驟(2)中加入2mL第一衍生化試劑后調節體系pH值為12。
[0016]本發明的有益效果是:前處理簡單，檢測時間短，檢測成本低，無需大型儀器，可現場檢測，肉眼觀察顏色變化即能快速得到檢測結果，能夠快速、高效檢測蝦中磺胺類藥物殘由ο
【具體實施方式】
[0017]下面通過具體實施例，對本發明的技術方案作進一步的具體說明。
[0018]本發明中，若非特指，所采用的原料和設備等均可從市場購得或是本領域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規方法。
[0019]磺胺類藥物標準品(市售):磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺甲基異惡唑；樣品為新鮮對蝦，購于舟山水產品批發市場。
[0020]實施例:
1、磺胺類藥物標準物質的檢測
用甲醇將磺胺類藥物標準品溶解并稀釋到50 μ g/L、100 μ g/L的濃度。分別取ImL濃度為50 μ g/L、100 μ g/L磺胺類藥物標準溶液，加入4mL的甲醇和2mL衍生化試劑01 (市售，購自北京六角體科技發展有限公司)，振搖5分鐘后加入0.1mL衍生化試劑02 (市售，購自北京六角體科技發展有限公司)，振搖I分鐘，靜置5分鐘，觀察上層液體顏色；每個做5個重復，同時做試劑空白試驗。
[0021]2、樣品檢測
2、I取新鮮對蝦的蝦肉，將蝦肉研磨勻漿得蝦肉漿，取蝦肉漿5.0g,加入5.0g的無水硫酸鈉和甲醇20mL，振搖2分鐘后，靜置分層或4000轉/min離心5min，所得上清液作為樣品