一種高效液相色譜法檢測3-氨基-2-己內酰胺的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及氨基酸注射液的檢測方法，特別是涉及一種高效液相色譜法檢測 3-氨基-2-己內酰胺的方法。
【背景技術】
[0002] 氨基酸（amino acid)是含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱，是生物功能大 分子蛋白質的基本組成單位，是構成動物營養所需蛋白質的基本物質，是含有堿性氨基和 酸性羧基的有機化合物。氨基酸注射液（Amino Acid Injection)，由18種氨基酸配制而成 的滅菌水溶液，用于蛋白質攝入不足、吸收障礙等氨基酸不能滿足機體代謝需要的患者，亦 用于改善手術后病人的營養狀況。靜脈滴注，每次250~500ml，兒童35~50ml/kg。具有 促進人體蛋白質代謝正常，糾正負氮平衡，補充蛋白質，加快傷口愈合的作用。氨基酸輸液 在能量供給充足的情況下，可進入組織細胞，參與蛋白質的合成代謝，獲得正氮平衡，并生 成酶類、激素、抗體、結構蛋白等生理活性物質，促進組織愈合，恢復正常生理功能。本品可 致疹樣過敏反應，一旦發生應停止用藥。偶有惡心、嘔吐、胸悶、心悸、發冷、發熱或頭痛等。 嚴重肝腎功能不全、肝昏迷、嚴重氮質血癥、嚴重尿毒癥患者及氨基酸代謝障礙者禁用。嚴 重酸中毒、充血型心力衰竭者慎用。注意事項：應嚴格控制滴注速度；本品系鹽酸鹽，大量 輸入可能導致酸堿失衡；大量應用或并用電解質輸液時，應注意電解質與酸堿平衡；用前 必須詳細檢查藥液，如發現瓶身有破裂、漏氣、變色、發霉、沉淀、變質等異常現象絕對不應 使用；本品打開后，不可貯存再使用。
[0003] 3_氨基-2-己內酰胺（3-Amin〇-2_azepanone)，另丨」名：DL- α -氨基-ε-己內酰 胺，CAS :671-42-1，MDL :MFCD00064475,化學式為 C6H12N2O,分子量為 128. 17,熔點 77°C，沸 點168~172°C。賴氨酸（lysine)，別名第一限制性氨基酸，化學式為C6H 14N2O2，分子量為 146. 19,為堿性氨基酸，是人體8種必需氨基酸之一，具有L-型和D-型兩種同分異構體。 3_氨基-2-己內酰胺是賴氨酸的降解產物，通過精確檢測氨基酸注射液中3-氨基-2-己 內酰胺的含量，可以嚴格控制氨基酸注射液的產品質量。但是目前檢索未發現有采用高效 液相色譜法檢測3-氨基-2-己內酰胺含量的方法。高效液相色譜法（HighPerformance LiquidChromatography，HPLC)又稱"高壓液相色譜"、"高速液相色譜"、"高分離度液相色 譜"、"近代柱色譜"等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓 輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相栗入裝有 固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。 該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。
[0004] 申請號為201010513639. 1的中國專利申請公開了復方氨基酸注射液及其制備方 法、檢測方法，該注射液由18種氨基酸、亞硫酸氫鈉、木糖醇及水組成，同時本發明還公開 了復方氨基酸注射液（18AA)的制備方法，在保證產品質量的同時，具有節能、增效的特點； 本發明通過對精密度、檢測限、定量限和線性范圍等反復驗證，確定了清洗驗證簡便快速可 靠的方法；并且該發明還根據離子色譜法原理，檢測復方氨基酸注射液中抗氧劑亞硫酸氫 鈉的殘留量，以及亞硫酸氫鈉降解產生的硫酸根離子，從而準確測定原料配比中投入的抗 氧劑量，并根據測定結果判斷原料配比工藝的穩定性；該發明提供的復方氨基酸注射液檢 測方法是一種在線衍生氨基酸含量測定方法，速度快，適合大生產的規模檢驗。但是該發明 不能在線檢測氨基酸注射液中有機物比如3-氨基-2-己內酰胺的含量。
[0005] 申請號為CN201110023106. X的中國專利申請公開了 一種聚賴氨酸的檢測方法， 該發明首先以標準溶液的擴散圈直徑與聚賴氨酸濃度對數值計算出標準曲線，然后測定 樣品溶液產生的擴散圈直徑，從標準曲線上計算未知樣品中聚賴氨酸的濃度。該發明可 通過調整檢測條件分別可以達到快速檢測發酵液中聚賴氨酸含量和高靈敏度檢測食品中 聚賴氨酸含量的目的。但是該發明應用范圍較窄。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種高效液相色譜法檢測3-氨 基-2-己內酰胺的方法。
[0007] 本發明的目的通過以下技術方案來實現：一種高效液相色譜法檢測3-氨基-2-己 內酰胺的方法，采用如下色譜條件：
[0008] 色譜柱：ODS柱；
[0009] 流動相A :磷酸二氫鉀溶液；
[0010] 流動相B :甲醇、乙腈的水溶液；
[0011] 流速：0· 4 ~I. 2ml/min ;
[0012] 檢測波長：100 ~300nm ;
[0013] 柱溫：20 ~60 Γ;
[0014] 進樣量：5 ~20 μ 1。
[0015] 所述檢測波長為200nm，柱溫為35°C，進樣量為10 μ 1。
[0016] 所述流動相A為0. 01~0. 09mol/L的磷酸二氫鉀溶液，所述流動相B為甲醇、乙 腈的混合水溶液，且甲醇、乙腈和水的體積比為1~5:1~5:1。
[0017] 所述的一種高效液相色譜法檢測3-氨基-2-己內酰胺的方法，它包括以下步驟：
[0018] SI.流動相制備：
[0019] (1)稱取磷酸二氫鉀5. 44~48. 99g，加水稀釋至4000ml，用磷酸調節pH至2~ 4,抽濾超聲后得到流動相A ;
[0020] (2)配制甲醇、乙腈和水的體積比為1~5:1~5:1的溶液，搖勻得到流動相B ;
[0021] S2.對照品溶液制備：
[0022] (1)稱取3-氨基-2-己內酰胺10~30mg加入到50ml容量瓶中，用流動相A溶解 并定容至容量瓶刻度線，搖勻后得到3-氨基-2-己內酰胺對照品儲備液；
[0023] (2)量取3-氨基-2-己內酰胺對照品儲備液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 動相A定容至容量瓶刻度線，搖勻后得到對照品溶液；
[0024] S3.供試品溶液制備：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度線，搖勻后得到供試品溶液；
[0025] S4.色譜檢測：取供試品溶液和對照品溶液，注入高效液相色譜儀，按照權利要求 1~4中任一項中所述的條件進行高效液相色譜分析。
[0026] 本發明具有以下有益效果：
[0027] (1)本發明能準確測定3-氨基-2-己內酰胺的含量，專屬性好；
[0028] (2)本發明3-氨基-2-己內酰胺液相色譜峰面積與其濃度的回歸方程為線性相 關，且其線性擬合較好，因此使用方便；
[0029] (3)本發明定量限重復性好，RSD(η = 6)為1. 86% ;
[0030] (4)本發明3-氨基-2-己內酰胺回收率高，平均回收率達到99. 42 % ;
[0031] (5)本發明溶液穩定性好，供試溶液于室溫下放置36h后3-氨基-2-己內酰胺濃 度保持穩定，RSD為0. 54% ; 3-氨基-2-己內酰胺回收率保持穩定，RSD為0. 55% ;
[0032] (6)本發明耐用性好，在柱溫、檢測波長、流速發生細微改變時，測定出3-氨 基-2-己內酰胺的回收率與基本條件下測定結果相差很小。
【附圖說明】
[0033] 圖1是本發明的3-氨基-2-己內酰胺一元線性回歸分析圖；
[0034] 圖2是本發明的對照品溶液液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0035] 下面結合實施例及附圖對本發明做進一步的描述，本發明的保護范圍不局限于以 下所述。
[0036] 實施例1 :一種高效液相色譜法檢測3-氨基-2-己內酰胺的方法，它包括以下步 驟：
[0037] SI.流動相制備：
[0038] (1)稱取磷酸二氫鉀5. 44g，加水稀釋至4000ml得到0· 01mol/L的磷酸二氫鉀溶 液，用磷酸調節PH至2,抽濾超聲后得到流動相A ;
[0039] (2)配制甲醇、乙腈和水的體積比為1:5:1的溶液，搖勻得到流動相B ;
[0040] S2.對照品溶液制備：
[0041] (1)稱取3-氨基-2-己內酰胺IOmg加入到50ml容量瓶中，用流動相A溶解并定 容至容量瓶刻度線，搖勻后得到3-氨基-2-己內酰胺對照品儲備液；
[0042] (2)量取3-氨基-2-己內酰胺對照品儲備液Iml加入到100mL容量瓶中，加入流 動相A定容至容量瓶刻度線，搖勻后得到對照品溶液；
[0043] S3.供試品溶液制備：量取氨基酸注射液Iml加入到IOml容量瓶中，加水定容至 容量瓶刻度線，搖勻后得到供試品溶液；
[0044] S4.色譜檢測：取供試品溶液和對照品溶液，注入高效液相色譜儀進行分析。采用 的色譜條