一種陰道分泌物染色液及其制備方法與染色方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及細胞染色技術領域，尤其涉及一種陰道分泌物染色液及其制備方法與染色方法。
【背景技術】
[0002]細胞核內的染色質主要是脫氧核糖核酸(DNA)，在DNA雙螺旋結構中，兩條鏈上的磷酸基朝向外側，帶負電荷，容易與帶正電荷的堿性染料以離子鍵或氫鍵結合，從而使染色質附著相應的顏色。細胞核是染色質的儲存場所，染色質致密，則細胞核著色深；染色質疏松，則細胞核著色淺。分泌物細胞質中蛋白等電點PI為3?6，當pH>PI時，蛋白中游離的羧基基團增多，可以與帶正電荷的堿性染料結合，從而使細胞質附著相應的顏色。細胞質所帶負電荷多，則細胞質染色相對較深；細胞質所帶負電荷少，則細胞質染色相對較淺。并且由于分泌物中的細胞并非同步增殖，因此處于不同細胞周期內的細胞著色程度存在差異。處于生長期和分裂期的細胞由于DNA和蛋白質合成旺盛而呈現細胞核著色深，細胞質著色相對較淺的現象。而處于凋亡時期的細胞由于細胞膜通透性加強、蛋白質中酸性氨基酸位點暴露、染色質DNA片段降解而使細胞核質染色區分不明顯。
[0003]目前，國內應用較為廣泛的陰道分泌物染色液主要是瑞氏-姬姆薩染色液和革蘭氏染色液，但這兩種染色液都具有操作步驟繁瑣、染色時間長等缺點，不利于大規模臨床應用。
[0004]因此，現有技術還有待于改進和發展。
【發明內容】
[0005]鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種陰道分泌物染色液及其制備方法與染色方法，旨在解決現有染色液存在操作步驟繁瑣、染色時間長，及不利于大規模臨床應用的問題。
[0006]本發明的技術方案如下:
一種陰道分泌物染色液的制備方法，其中，包括步驟:
A、按重量份計，分別稱取藍色喊性染料1~3份、紅色喊性染料6~8份、緩沖鹽1~3份，醇溶劑8~12份、去離子水75~85份；
B、將上述稱取的藍色堿性染料、紅色堿性染料、緩沖鹽，醇溶劑和去離子水在22~28°C下混合均勻，并靜置過夜；
C、向靜置過夜后的混合液中加入堿性物質0.02-0.5份、細胞膜保護劑0.01-0.5份、染色促進劑0.01-0.5份、表面活性劑0.002-0.2份、滲透壓調節劑0.01-0.5份，最后再靜置過夜，得到染色液。
[0007]所述的陰道分泌物染色液的制備方法，其中，所述藍色堿性染料為亞甲藍、天青
I1、甲基綠、甲基紫、甲苯胺藍中的一種或多種。
[0008]所述的陰道分泌物染色液的制備方法，其中，所述紅色堿性染料為中性紅、藏紅T、曙紅Y、甲基紅中的一種或多種。
[0009]所述的陰道分泌物染色液的制備方法，其中，所述堿性物質為無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、醋酸鉀、醋酸鈉、醋酸鈣、硼砂中的一種或多種。
[0010]所述的陰道分泌物染色液的制備方法，其中，所述細胞膜保護劑為海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘氨酸中的一種或多種。
[0011]所述的陰道分泌物染色液的制備方法，其中，所述染色促進劑為細胞溶解酶、粘液分解劑溴己新、氨溴索、乙酰半胱氨酸中的一種或多種。
[0012]所述的陰道分泌物染色液的制備方法，其中，所述表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、高碳脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪酸甲酯乙氧基化物、聚丙二醇的環氧乙烷加成物、失水山梨醇酯、蔗糖酯中的一種或多種。
[0013]所述的陰道分泌物染色液的制備方法，其中，所述滲透壓調節劑為甘油、PVP、葡萄糖、果糖、多聚葡萄糖中的一種或多種。
[0014]一種陰道分泌物染色液，其特征在于，采用如上任一所述的陰道分泌物染色液的制備方法制備而成。
[0015]一種陰道分泌物染色液的染色方法，其中，采用濕片染色法對陰道分泌物進行染色，所述濕片染色法為:將經洗脫液洗脫的陰道分泌物滴加到載玻片上或樣本管中，之后將如上所述染色液與陰道分泌物混合均勻，使所述染色液對陰道分泌物進行染色。
[0016]有益效果:本發明由于采用藍色堿性染料和紅色堿性染料混合制得染色液，使得制得的染色液具有通用染色液的染色效果，并且能大大縮短染色時間，使通常在5~30分鐘內完成的染色時間縮短為20s，極大提高了染色效率，加快了臨床樣本的篩查速度。
【附圖說明】
[0017]圖1為傳統方法的染色效果圖。
[0018]圖2~圖9為本發明方法的染色效果圖。
【具體實施方式】
[0019]本發明提供一種陰道分泌物染色液及其制備方法與染色方法，為使本發明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0020]本發明提供一種陰道分泌物染色液的制備方法，其包括步驟:
A、按重量份計，分別稱取藍色喊性染料1~3份、紅色喊性染料6~8份、緩沖鹽1~3份，醇溶劑8~12份、去離子水75~85份；
B、將上述稱取的藍色堿性染料、紅色堿性染料、緩沖鹽，醇溶劑和去離子水在22~28°C下混合均勻，并靜置過夜；
C、向靜置過夜后的混合液中加入堿性物質0.02-0.5份、細胞膜保護劑0.01-0.5份、染色促進劑0.01-0.5份、表面活性劑0.002-0.2份、滲透壓調節劑0.01-0.5份，最后再靜置過夜，得到染色液。
[0021]進一步地，按重量份計，分別稱取藍色堿性染料I份、紅色堿性染料8份、緩沖鹽I份，醇溶劑10份、去離子水80份，以制備陰道分泌物染色液。
[0022]進一步地，所述藍色堿性染料可以為亞甲藍、天青I1、甲基綠、甲基紫、甲苯胺藍中的一種或多種。
[0023]進一步地，所述紅色堿性染料可以為中性紅、藏紅T、曙紅Y、甲基紅中的一種或多種。
[0024]本發明的主要改進之處在于，染色液中包含藍色堿性染料和紅色堿性染料，所述藍色堿性染料和紅色堿性染料為堿性染料，所述堿性染料可充分浸潤細胞，對分泌物中的各類細胞的細胞核和細胞質均可進行染色，并對分泌物中各類細胞可進行區分。
[0025]進一步地，所述緩沖鹽可以為MES、硼酸鹽、磷酸鹽、Tris-HCU Bistris-HCUHEPES, PIPES中的一種或多種。且所述緩沖鹽的濃度為2~500mmol/L，緩沖鹽pH為5.0?7.8。
[0026]進一步地，所述醇溶劑可以為無水乙醇、甲醇、乙二醇中的一種。
[0027]進一步地，所述堿性物質可以為無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、醋酸鉀、醋酸鈉、醋酸鈣、硼砂中的一種或多種。
[0028]進一步地，所述細胞膜保護劑可以為海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘氨酸中的一種或多種。
[0029]進一步地，所述染色促進劑可以為細胞溶解酶、粘液分解劑溴己新、氨溴索、乙酰半胱氨酸中的一種或多種。
[0030]進一步地，所述表面活性劑可以為烷基