一種 4,5 -二氨基-2,7-萘二磺酸的高效液相色譜分析方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及物質分析技術領域，具體涉及一種4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸的高 效液相色譜分析方法。
【背景技術】
[0002] H酸（1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸)是染料工業的重要中間體，主要用于生產酸 性、直接和活性染料，如酸性品紅6B、酸性大紅G、酸性黑10B、直接黑、活性艷紅K-2BP、活性 紫K-3R、活性深藍K-R等90余種染料，這些染料用于毛紡，棉織物的染色，亦可用于生產藥 物，全球年需求量達十五萬噸以上。
[0003] 傳統的H酸生產方法是以精萘為原料，經過磺化、硝化、還原等步驟得到產品，其 中在還原步驟采用鐵粉加酸還原，產生大量的鐵泥，難以處理，為了解決傳統制備工藝帶來 的環保問題，提出了新的制備思路：
利用4, 5-二硝基-2, 7-萘二磺酸進行還原生成4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸，其是合 成H酸的重要中間體之一，也是H酸綠色合成過程中的重要步驟之一，同時，其也是重要的 化工產品，目前準確測定4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸及其雜質含量的技術還不太成熟，在 藥物分析領域中準確測定4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸及其雜質含量還屬于空白區。
【發明內容】
[0004] 本發明所要解決的技術問題是提供一種4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸的高效液 相色譜分析方法。
[0005] 為解決上述技術問題，本發明提供以下技術方案：一種4, 5 -二氨基-2, 7-萘二 磺酸的高效液相色譜分析方法，包括以下分析步驟：（1)采用反相高效液相色譜法，高效液 相色譜條件如下：色譜柱：XDB-C18反相柱，5 μπι，150X4. 6mm ;流動相組成（體積比）和 梯度條件：〇min 10% 甲醇-90%Li2S04，流速為 0· 8mL · min 1Jmin 10% 甲醇 _90%Li 2S04， 流速為 〇· 8mL · min SSmin 20% 甲醇-80%Li 2S04，流速為 0· 8mL · min 40% 甲 醇-60%Li2S04，流速為 0· 8mL · min SlOmin 20% 甲醇-80%Li 2S04，流速為 0· 8mL · min S llmin 5% 甲醇-95%Li2S04，流速為 0· 8mL · min S 12min 1% 甲醇-99%Li 2S04，流速為 0.8mL · min S (2) 配置樣品溶液，分別配制4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸的標準溶液及樣品溶液； (3) 制作標準曲線； (4) 樣品含量的測定以及精密度的確定。
[0006] 所述樣品的進樣量優選20 μ L。
[0007] 所述樣品的檢測波長為233nm。
[0008] 本發明中的4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸標準品為自制藥品，其制備方法如下： 取一定量的4, 5 -二硝基-2, 7-萘二磺酸，在一定的溫度和壓力下，采用可回收還原劑 催化，保持反應一定時間，即得到粗產品，然后純化，經液相色譜一質譜聯用及核磁共振檢 測方法檢測證實，粗產品為4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸和4, 5-二硝基-2, 7-萘二磺酸及 少許4-硝基-2, 7-萘二磺酸的混合物，若原料的純度不夠，有可能混有少量的2, 7-萘二磺 酸，純化后，4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸純度可達98%，按照本發明高效液相色譜分析的色 譜條件，4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸的保留時間為5. 608min ;2, 7-萘二磺酸的保留時間 為8. 938min ;4_硝基-2, 7-萘二磺酸保留時間為14. 556min ;4, 5-二硝基-2, 7-萘二磺酸 保留時間為15. 408min，分離度好。
[0009] 所述甲醇優選HPLC級，異丙醇優選HPLC級。
[0010] 試驗中流動相和溶液用水優選二次石英蒸餾水。
[0011] 本發明與現有技術相比具有的有益效果是：本發明的分析方法可以準確測定4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸主體含量，同時準確測定原料4, 5-二硝基-2, 7-萘二磺酸及原料 雜質2, 7-萘二磺酸的含量，方法簡單，分離度好，分析時間短，為監控H酸生產過程的質量 提供了可靠的保障。
【附圖說明】
[0012] 圖1為本發明中各標準品混合溶液的液相色譜圖； 圖2為產品4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸的標準曲線圖； 圖3為原料4, 5-二硝基-2, 7-萘二磺酸的標準曲線圖； 圖4為雜質2, 7-萘二磺酸的標準曲線圖； 圖5為實驗室制備4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸的樣品圖。
【具體實施方式】
[0013] 為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對 本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并 不用于限定本發明。
[0014] 本發明中的主要實驗儀器及色譜條件為：Agilent 1100高效液相色譜儀DAD檢測 器；XDB-C18反相柱，規格為5 μπι，150X4. 6mm ;流動相組成體積比和梯度條件：0minl0%甲 醇-90%Li2S04,流速為 0· 8mL · min 1Jmin 10% 甲醇-90%Li 2S04,流速為 0· 8mL · min SSmin 20% 甲醇-80%Li2S04,流速為 0· 8mL .min 1Wmin 40% 甲醇-60%Li 2S04,流速為 0· 8mL .min S IOmin 20% 甲醇-80%Li2S04,流速為 0· 8mL · min Sllmin 5% 甲醇-95%Li 2S04,流速為 0· 8mL .min SUmin 1%甲醇-99%Li 2S04，流速為0· 8mL .min \本發明中的進樣量為20 yL ; 用紫外可見分光光度計在200-700nm進行連續掃描，2, 7-萘二磺酸、4-硝基-2, 7-萘二磺 酸、4, 5 -二硝基-2, 7-萘二磺酸及4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸均在233nm處有特征吸 收，故確定檢測波長為233nm。
[0015] 本法明中的試劑與藥品為：4,5 -二硝基-2, 7-萘二磺酸，生產過程硝化步驟純 化產品；4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸標準品，傳統方法制備純化，并經過液相色譜-質譜 鑒定；4-二硝基-2, 7-萘二磺酸標準品，傳統方法制備純化，并經過液相色譜-質譜鑒定； 2, 7-萘二磺酸，標準品，國藥集團；甲醇：HPLC級；異丙醇：HPLC級；硫酸鋰：分析純，國藥集 團；實驗中流動相和溶液用水均為二次石英蒸餾水。
[0016] 本發明中的4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸標準品的制備方法如下：取一定量的4, 5 -二硝基-2, 7-萘二磺酸，在一定的溫度和壓力下，采用可回收還原劑催化，保持反應一定 時間，即得到粗產品，然后純化，經液相色譜一質譜聯用及核磁共振檢測方法檢測證實，粗 產品為4, 5 -二氨基-2, 7-萘二磺酸和4, 5-二硝基-2, 7-萘二磺酸及少許4-硝基-2, 7-萘 二磺酸的混合物，若原料的純度不夠，有可能混有少量的2, 7-萘二磺酸，純化后，4, 5 -二 氨基-2, 7-萘二磺酸純度可達98%，按照本發明高效液相色譜分析的色譜條件，4, 5 -二 氨基-2, 7-萘二磺酸的保留時間為5. 608min ; 2, 7-萘二磺酸的保留時間為8. 938min ; 4-硝基-2, 7-萘二磺酸保留時間為14. 556min ;4, 5-二硝基-2, 7-萘二磺酸保留時間為 15. 408min，分離度好，具體分離情況可參見圖1。
[0017] 本發明中標準溶液配制的方法為：準確稱取0. 1590g 4, 5 -二氨基-2, 7-萘 二磺酸標準品，置于50mL容量瓶中，溶解，再用二