一種制作細胞塊的專用離心管和方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于細胞病理學領域，具體涉及一種從細胞病理學和外科病理學標本中制 作細胞塊的專用離心管和制作方法。
【背景技術】
[0002] 細胞病理學通過分析細胞或者小的細胞團診斷多種疾病和評估健康狀況。
[0003] 最常用的細胞病理學技術是細胞涂片（pap smear)。細胞涂片是將細胞或小的細 胞團涂布于玻片上，用診斷試劑染色后，在顯微鏡下觀察細胞形態從而對多種疾病做出診 斷或者評估健康狀況。細胞涂片方法有明顯的局限性，主要表現在：細胞涂片不能復制，一 旦細胞涂片用一種診斷試劑染色以后，難以同時再進行另外的染色和檢測；難以進行免疫 組化和分子病理等檢測；血液、蛋白沉淀物、粘液干擾以及細胞堆積等因素使細胞的形態和 結構不清楚；細胞在制片過程中因受力扭曲變形難于判讀；不能長期保存等。
[0004] 細胞蠟塊（cell block)是將檢測細胞經過脫水、石蠟包埋等程序后制作而成。細 胞蠟塊經切割制作成細胞切片，進一步染色后對細胞進行檢測。與細胞涂片相比，細胞蠟塊 有許多優點：細胞不變形，結構清楚，易于觀察判讀；能夠像活檢組織切片那樣清楚觀察細 胞的排列，因此，也被稱作微活檢；細胞塊能夠切出多張細胞或小細胞團的切片進行分析； 易于進行特殊染色、免疫細胞化學染色以及分子病理檢測等；能夠長期保存，供進一步診斷 和研宄用。
[0005]有許多種方法制作細胞蠟塊，傳統的方法是用普通的離心管離心沉淀以后，傾倒 去上清液，然后取出沉渣，再用常規病理技術方法制作成細胞蠟塊。也有一些方法對傳統方 法進行改進。但這些現有的方法都有不同的缺陷，其中最明顯的缺陷是：不適于在細胞或細 胞團數量少的情況下制備細胞塊，因此，臨床上的有一部分標本因細胞數量少而無法制作 成細胞蠟塊，不能對患者做出明確診斷；另外，目的細胞(病變細胞）在細胞蠟塊中的位置分 散而不確定，切片時難以切割到病變細胞，或者細胞在切片上的分布面小，密度低；蠟塊大 小、形狀不規則等。
【發明內容】
[0006]本發明提供了一種制作細胞塊的專用離心管和制作方法。
[0007] -種制作細胞塊的專用離心管，由離心管和兩個離心管蓋構成。離心管是兩端開 口，圓柱形中空管，離心管兩端的外表層帶有外螺紋。離心管蓋是密封型蓋，平底(細胞分布 在一個平面上的結構基礎)，底部有密封圈（墊)，內側壁表層設有內螺紋，能夠與離心管兩 端外螺紋擰緊咬合，防止液體滲出，形成密閉的圓柱形空間。設計成一組內外徑不相同的離 心管，離心管內徑從外徑一般在不超過20mm范圍內變化；可以根據需要設計成不 同長度，通常60~80mm比較合適。管壁厚度l~2mm。不同規格離心管能夠滿足不同細胞數 量制作細胞塊的需要，內徑2~5mm的離心管特別適用于臨床微量細胞標本或者分離、培養 獲得的微量細胞制作細胞塊。管壁厚度可以根據需要增加，以達到增強保溫效果的目的，能 夠使基質較長時間在室溫中保持液態。大離心管和小離心管能夠套疊在一起，在操作和離 心時，大離心管作為小離心管的支架，能夠使小離心管保持直立。離心管由玻璃或透明塑料 制成，瓶蓋由透明塑料制成，便于對離心后細胞所處位置和基質情況進行觀察。
[0008]與該專用離心管配合使用的是細胞基質材料，許多種物質可以作為細胞基質，其 中在分子生物學中常用的低熔點瓊脂糖能夠作為該方法有效的細胞基質。選用熔點高于石 蠟的熔點、凝膠溫度接近室溫的低熔點瓊脂糖。這樣，在將細胞塊制作成細胞蠟塊的過程 中，即在脫水、透明、浸蠟、包埋等過程中細胞塊不會熔化；凝膠溫度接近室溫，熔化基質余 熱能夠使基質在室溫中長時間處于液態，離心才夠有效將細胞富集到一個平面上。低熔點 瓊脂糖的熔點溫度在60~70°C，凝膠溫度在15~35°最為合適。過高的凝膠溫度，則需要在 離心過程中使用加熱或保溫措施，防止液態基質凝固成固態，使方法變得復雜。
[0009]用專用離心管和基質材料能夠方便地制作細胞塊。現在以低熔點瓊脂糖作為細胞 基質材料為例子加以說明。將低熔點瓊脂糖用pH=7. 4的磷酸鹽緩沖液配制成1%的瓊脂糖 (常用的濃度為1[3%)，加熱完全溶解后，取內徑為5mm的離心管，直立在桌面或者離心管 架上，擰下上端的離心管蓋，將基質分裝到離心管中，每管lmL，擰上離心管蓋。裝有基質的 離心管可以在4°冰箱中長期保存備用。基質的使用量是根據細胞數量多少和選擇的離心 管規格確定，細胞數量多時應該適當增加細胞基質材料的使用量。
[0010] 制作細胞塊時，將帶基質材料的離心管放入烤片機中，溫度調至高于基質的熔點 溫度(如70°C)以上，加熱20分鐘以上，使固態的基質變成液態。室溫較低時，應該增加熔 化基質的溫度(如80°C)，以便在室溫中基質有較長的時間不會凝固，能夠從容操作和離心。
[0011] 為了在切片時觀察細胞所處位置，標記細胞也是重要的步驟。用一滴伊紅將細胞 或組織碎肩（來自外科標本）標記上顏色。擰下上端的離心管蓋，將細胞懸液約0. 5mL加入 液態基質上表面上，擰上離心管蓋，顛倒離心管混均；或者不混均，直接離心。立即用水平離 心機1000-2000rpm離心2~5分鐘，將細胞富集到基質最底層的一個平面上。另外的方法還 包括，將細胞懸液加到離心管固態基質的上面，將離心管垂直放入烤片機中，70°C以上溫度 加熱20分鐘，使基質變成液態，離心使細胞通過膠墊(層）后，富集到膠的最底層的平面上。 同時細胞能夠與蛋白質沉淀物、粘液等分離。取出離心管，垂直放于4°C冰箱中15min以上， 使基質重新凝固變成固態。
[0012] 取出細胞塊方法也是本項發明的關鍵步驟。待基質凝固以后，擰下離心管兩端的 離心管蓋，如果離心管內徑< 5mm時，用氣體加壓原理推出帶有細胞層的基質端，使用實驗 室中的洗耳球能夠方便地完成操作。離心管內徑>5_時用活塞原理推出帶有細胞層的基 質端。用刀片切下帶有細胞層部分的固體基質，通常的厚度為2~3_，即制作成高質量的細 胞塊。細胞塊通過常規的病理技術方法制作成細胞蠟塊，再制作細胞切片。也可以通過冰 凍切片方法直接制作成細胞切片。
[0013] 該制作細胞塊的方法應用范圍廣泛，適用于所有臨床細胞學標本、部分外科方法 獲得的少量組織碎肩（不能夠用常規方法制作組織切片)、培養的細胞、