一種含多菌靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料獲取方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于農藥殘留檢測質控用的自然基體實物標樣制備技術領域，具體涉及一 種含多菌靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料獲取方法。
【背景技術】
[0002] 農藥檢測方面的基體RM十分欠缺。農藥殘留檢測中需要建立純品標準物質與基 體標準物質以滿足檢測質量控制、解決分析中遇到的問題、保證結果準確等要求。歐盟的 殘留檢測法規文件要求采用標準樣品控制檢測質量、驗證檢測方法。采用加料法制備基體 RM，雖制備簡便，但存在目標物和基體結合情形與真實檢測樣品不完全一致的情況，從而可 能會導致提取、凈化行為與真實檢測樣品不同等問題，多菌靈在煙葉生產上使用廣泛，容易 造成殘留，目前未見含多菌靈的煙葉自然基體RM的研宄報道。本發明采用從煙葉施藥、采 樣、烘烤加工到磨粉、包裝、均勻性檢驗、穩定性檢驗等工序，以期制備成預期含量水平的煙 葉中多菌靈殘留自然基體RM，使該RM形態及其目標物與基體結合的情形都與真實檢測樣 品完全一致，從而避免加料基體RM的缺陷，保證檢測結果準確。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種含多菌靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料獲 取方法。
[0004] 本發明的目的是這樣實現的，所述含多菌靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材 料獲取方法，包括施藥、檢測及制樣工序，具體包括： A、 施藥：對栽培的煙株噴灑濃度25%多菌靈可濕性粉劑，每畝施藥量為300g; B、 監測：每株煙株取第10、11、12葉位的煙葉，分別于施藥后的2小時，以及1、3、5、7、 10、14、21、28、35、42天取樣，依據YC/T405. 1-2011檢測多菌靈殘留含量，繪制多菌靈殘留 含量的變化曲線； C、 制樣：根據多菌靈殘留含量的變化曲線在施藥后的第42天采摘煙葉，所摘煙葉經過 烘烤加工成干煙葉，再將干煙葉粉碎成粉狀，通過40目篩后混勻，即得到所述的含多菌靈 殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料；所述烤煙實物標樣自然基體陽性材料中多菌靈的 含量為 6.41 ±0.03mg/kg。
[0005] 本發明所述獲取方法通過調整施藥條件及檢測工藝，可制備出與真實檢測樣品完 全一致的烤煙中多菌靈殘留分析質控用自然/污染基體標準樣品，保證了相同操作條件下 質控樣與檢測樣提取率的一致性。所述獲取方法簡便、高效，所制備的自然/污染基體標準 樣品均勻性、穩定性優異，儲存、運輸、使用方便。
【附圖說明】
[0006] 圖1為多菌靈標準品色譜圖。
[0007] 圖2為施藥后鮮煙葉干基中多菌靈殘留含量的變化曲線。
[0008] 圖3為施藥第3日起鮮煙葉干基和烤后煙葉干基中多菌靈殘留含量與施藥后天數 的對數曲線。
【具體實施方式】
[0009] 下面對本發明作進一步的說明，但不以任何方式對本發明加以限制，基于本發明 教導所作的任何變換或替換，均屬于本發明的保護范圍。
[0010] 本發明所述的含多菌靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料獲取方法，包括施 藥、監測及制樣工序，具體包括： 所述的施藥是對栽培的煙株噴灑濃度25%多菌靈可濕性粉劑，每畝施藥量為300g; 所述的監測是于每株煙株上取第1〇、11、12葉位的煙葉，分別于施藥后的2小時，以及 1、3、5、7、10、14、21、28、35、42天取樣，依據YC/T405. 1-2011檢測多菌靈殘留含量，繪制多 菌靈殘留含量的變化曲線； 所述的制樣是根據多菌靈殘留含量的變化曲線，在施藥后的第42天采摘煙葉，所摘煙 葉經過烘烤加工成干煙葉，再將干煙葉粉碎成粉狀，通過40目篩后混勻，即得到所述的含 多菌靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料；所述烤煙實物標樣自然基體陽性材料中多 菌靈的含量為6. 41±0. 03mg/kg。
[0011] 由于多菌靈在煙葉中消解較慢，施藥后42天殘留量仍然較大，此時采集的樣品多 菌靈與煙葉結合牢固，煙葉成熟度好，獲得的陽性材料穩定性好，且各方面指標更接近待分 析煙葉。
[0012] 所述施藥工序采用的是均勻噴霧法施藥，每畝煙田僅施藥一次。
[0013] 所述施藥工序的天氣條件為：施藥當天及施藥后一周無雨，一周以后可有小雨。
[0014] 所述施藥工序中所設定的煙株行距為50cm*120cm。
[0015] 所述施藥工序中使用的多菌靈可濕性粉劑的施用方法是在75g多菌靈中加入15L 水，混合均勻制成多菌靈水濁液后噴霧施用。
[0016] 所述監測工序中進行煙葉取樣時，煙葉葉位是按從上往下的順序確定的。
[0017] 所述監測工序中多菌靈殘留含量為對干基的含量。
[0018] 所述監測工序中是依據YC/T31檢測煙葉的含水率，以便將鮮煙葉中多菌靈殘留 含量換算成按照干基計算的值，從而在相同的基礎上比較分析煙葉中多菌靈殘留含量的監 測結果。
[0019] 所述監測工序中煙葉樣品摘取后需立即切碎混勻，采用四分法縮樣，留樣200g 于-20°C保存。
[0020] 所述制樣工序中將所摘煙葉經烘烤加工成干煙葉，所采用的烘烤工藝為：三段式 烘烤工藝，具體工藝詳見：劉春奎，煙葉烘烤技術[J]，農家參謀，2008年05期。
[0021] 所述制樣工序中將干煙葉粉碎成粉狀，通過40目篩后混勻，指的是將粉碎后過40 目篩的煙葉粉末經人工攪拌進行粗均勻化，再用V型混合機混勻。
[0022] 所述V型混合機的工作參數為：15r/min，50min。
[0023] 實施例1 一一含多菌靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料的獲取 實驗地點：玉溪市紅塔區黃官現代煙草農業專業合作社，試驗面積166m2。
[0024] 實驗材料： 1)煙株：品種為云煙87,煙株行距為50cm*12〇Cm，按照當地煙葉生產技術正常管理，煙 株生長良好。
[0025] 2)試劑：25%的多菌靈可濕性粉劑，四川國光農化股份有限公司。
[0026] 3)儀器：超高效液相色譜(美國Waters公司），ABSciexQTRAP5500質譜(美國 ABSciex公司）。
[0027] 實驗方法： 1)施藥：施藥天氣：晴朗。施藥方式：采用均勻噴霧法，166m2煙田共噴灑15L配制好的 多菌靈水濁液，農藥配制方法為：稱取75g多菌靈至噴霧器中，加入15L水，混合均勻。
[0028] 2)監測：于每株煙株上按照從上往下的順序取第10、11、12葉位的煙葉，分別于施 藥后的2小時，以及1、3、5、7、10、14、21、28、35、42天取樣。每次取樣量為2kg，煙葉樣品摘 取后立即返回實驗室(約需lh)，切碎混勻，采用四分法縮樣，留樣200g于-20°C保存。
[0029] 依據YC/T405. 1-2011用液相色譜-串聯質譜儀檢測多菌靈殘留含量，液相色 譜-串聯質譜儀的工作參數為： 液相色譜條件：色譜柱：ACQUITYUPLC?HSST3 (柱長100mm，內徑2. 1mm，固定相粒徑 1.8Mm);柱溫：30 °C;進樣量：2ML;流速0. 4mL/min。流動相A:水，流動相B:乙腈。梯度 洗脫：〇 ~2min，10%B;2 ~5min，10%B~70%B;5 ~6min，70%B;6 ~7min，70%B~ 10%B;7 ~8min，10%B〇
[0030] 質譜條件：電離方式：電噴霧ESI;掃描方式：正離子掃描；監測方式：多反應監 測；噴霧電壓：5000V;霧化氣壓力：0? 552MPa;氣簾氣壓力：0? 138MPa;輔助加熱氣壓力： 0.552MPa;離子源溫度：600°C，監測離子對 192. 2/160. 1 (DP:65V，CE:26V)，192. 2/132 (DP:65V,CE:41V)〇
[0031] 同時依據YC/T31檢測煙葉的含水率，以便將鮮煙葉中多菌靈殘留含量換算成按 照干基計算的值，從而在相同的基礎上比較分析煙葉中多菌靈殘留含量的監測結果。
[0032] 3)制樣：在施藥后第42天采摘鮮煙葉100kg，對每株煙進行取樣時，均按照從上往 下的順序采摘第1〇、11、12葉位的鮮煙葉。將摘取的煙葉放入烤房烘烤，所采用的烘烤工藝 為：三段式烘烤工藝，具體工藝詳見：劉春奎，煙葉烘烤技術[J]，農家參謀，2008年05期。
[0033] 將烘烤加工成的干煙葉用粉碎機粉碎并通過40目篩，過篩后的煙葉粉末經人工 攪拌進行粗均勻化，再用V型混合機以15r/min的速度，混合50min，即可得到所述的含多菌 靈殘留的烤煙實物標樣自然基體陽性材料。
[0034] 實驗結果： 1)陽性材料取樣期的預測：施藥后鮮煙葉中多菌靈殘留含量(對干基）的變化曲線如圖 2所示。由圖2可知，煙葉噴施多菌靈水濁液后頭兩天其殘留量迅速下降，而后平緩下降。 施藥后頭2天煙葉中多菌靈殘留含量迅速下降的原因是新噴施的多菌靈在煙葉表面還未 與之牢固