用于分析紅細胞和血小板的試劑、體系及方法
【專利說明】用于分析紅細胞和血小板的試劑、體系及方法
[ooou交叉引用
[0002] 本申請要求2013年3月12日提交的美國臨時專利申請第61/778, 051號的權益， 該申請通過引用整體并入本文。
[000引 背景
[0004] 稀釋試劑在血液學分析中具有廣泛的應用，在制備用于分析紅細胞（RBC)、血小板 任LT)和/或網織紅細胞（reticulocyte) (RETC)的血樣中用作例如稀釋試劑。稀釋溶液也 用作例如銷溶液、漂洗溶液、防止干燥或鹽沉淀在儀器上的維護溶液、和類似物。因此，用于 與血液學分析儀一起使用的稀釋試劑是迄今為止在血液學領域消耗最大的試劑之一。
[0005] 在當前的配置中，由于消耗率，稀釋溶液典型地存儲在沉重且難W操縱的大容器 中。在一些情況下，例如，使用20升方容器來存儲稀釋試劑。該種容器又大又重，并對那些 使用它們工作的人帶來人體工程學的問題。此外，該些重容器運輸昂貴并占用大量的存儲 空間。因此，對于將消除或至少減少該些問題程度的更濃縮的稀釋試劑有明顯的需求。本 發明解決了該些和其它需求。
[000引發明概述
[0007] 本發明的各方面包括可W用來保持血細胞形態和完整性并提供樣品完整性和光 學透明度W有助于光學分析血樣的血液學分析試劑、體系和方法。在一些實施方案中，所述 試劑包括非磯酸鹽有機緩沖劑和球化表面活性劑。所述試劑的抑和滲透壓可W被調節至 所需的范圍。另外，所述試劑可W在使用之前僅用去離子水稀釋。
[0008] 在一些實施方案中，本公開提供了用于對全血樣品進行光學平均紅細胞容積 (MCV)分析的體系，所述體系包括；(a)血液學分析儀，所述血液學分析儀包括；激發源，其 被布置成激發所述血樣中的顆粒；多個檢測器，其包括（1)被布置成測量來自所述被激發 的血樣的軸向光損失的軸向光損失檢測器、（2)被布置成測量來自所述被激發的血樣的中 等角度散射的中等角度散射檢測器、（3)被布置成測量來自所述被激發的血樣的大角度偏 振側向散射的偏振側向散射檢測器、（4)被布置成測量來自所述被激發的血樣的大角度消 偏振側向散射的消偏振側向散射檢測器；和處理器，其被配置成；（I)接收（1)軸向光損失、 (2)中等角度散射、（3)大角度偏振側向散射、（4)大角度消偏振側向散射的測量結果和 (II)基于從所述檢測器接收的多個數據，進行所述血樣的MCV分析；和化）血液學試劑，其 包含；非磯酸鹽有機緩沖劑；球化表面活性劑；和滲透壓調節組分，其中所述血液學試劑具 有足夠的光學透明度W有助于光學分析所述樣品。在一些實施方案中，所述主題體系可W 被用來在不使用電阻抗測量設備的情況下進行完整的血樣分析，例如像MCV分析。
[0009] 在一些實施方案中，所述非磯酸鹽有機緩沖劑為MES、M0PS、肥陽S或咪挫。在一些 實施方案中，所述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度為至少約0. 5%。在一些實施方案中， 所述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度范圍為約0. 5%至約20%。在一些實施方案中，所 述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度為至少約50mM。在一些實施方案中，所述試劑中非磯 酸鹽有機緩沖劑的濃度范圍為約50至約1，500mM。在一些實施方案中，所述球化表面活性 劑為麥芽糖巧。在一些實施方案中，所述球化表面活性劑的濃度為至少約0.0002%。在一 些實施方案中，所述球化表面活性劑的濃度范圍為約0. 0002%至約2. 0%。在一些實施方 案中，所述球化表面活性劑的濃度為至少約5mg/L。在一些實施方案中，所述球化表面活性 劑的濃度范圍為約5至約1，OOOmg/L。在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分為氯化鋼、 氯化鐘或它們的混合物。在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分的濃度為至少約0. 25 %。 在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分的濃度范圍為約0.25%至約25%。在一些實施方 案中，所述試劑還包含抗微生物劑。在一些實施方案中，所述抗微生物劑的濃度為至少約 0.2%。在一些實施方案中，所述抗微生物劑的濃度范圍為約0.02%至約0.1%。在一些實 施方案中，所述試劑的抑范圍為約6. 0至約8. 0抑單位。在一些實施方案中，所述試劑的 IX濃度溶液的滲透壓范圍為約250至約350m0sm。在一些實施方案中，所述多個檢測器包 括一個或多個光電倍增管和/或雪崩光電二極管（APD)。在一些實施方案中，所述激發源是 激光器。
[0010] 在一些實施方案中，主題體系還包括用于稀釋所述試劑的子體系。在一些實施方 案中，所述子體系被配置成將所述稀釋的試劑與所述血樣混合。在一些實施方案中，所述子 體系被配置成用所述試劑解育血樣歷時范圍為約1至約30秒的時間段。在一些實施方案 中，所述子體系被配置成在范圍為約15°C至約50°C的溫度下用所述稀釋試劑解育血樣。在 一些實施方案中，所述子體系被配置成在室溫下用所述稀釋試劑解育血樣。
[0011] 在一些實施方案中，本公開提供了用自動血液學分析儀進行光學平均紅細胞容積 (MCV)分析的方法，所述方法包括；(a)用血液學分析試劑的IX濃度工作溶液稀釋全血樣 品，其中所述血液學分析試劑包含；非磯酸鹽有機緩沖劑；球化表面活性劑；和滲透壓調節 組分，其中所述血液學試劑具有足夠的光學透明度W有助于光學分析所述樣品；化）將來 自步驟（a)的經解育的樣品遞送至血液學分析儀的流動池；（C)當來自步驟化）的經解育 的樣品穿過流動池時，使用激發源將所述樣品激發；(d)收集來自所述經激發的樣品的多 個光散射信號；和（e)分析在步驟（d)中收集的信號來測定所述樣品的MCV。在一些實施 方案中，所述主題方法設及在不使用電阻抗測量設備的情況下進行完整的血樣分析，例如 像MCV分析。
[0012] 在一些實施方案中，所述非磯酸鹽有機緩沖劑為MES、MOPS、肥陽S或咪挫。在一 些實施方案中，所述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度范圍為約0. 5%至約20%。在一些 實施方案中，所述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度范圍為約50至約1，500mM。在一些實 施方案中，所述球化表面活性劑為麥芽糖巧。在一些實施方案中，所述球化表面活性劑的濃 度范圍為約0. 0002%至約2. 0%。在一些實施方案中，所述球化表面活性劑的濃度范圍為 約5至約1，OOOmg/L。在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分為氯化鋼、氯化鐘或它們的 混合物。在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分的濃度范圍為約0.25%至約25%。在一 些實施方案中，所述試劑還包含抗微生物劑。在一些實施方案中，所述抗微生物劑的濃度范 圍為約0. 02%至約0. 1%。在一些實施方案中，所述試劑的pH范圍為約6. 0至約8.化H單 位。在一些實施方案中，所述試劑的IX濃度溶液的滲透壓范圍為約250至約350m0sm。
[0013] 在一些實施方案中，本公開提供血液學試劑，其包括：非磯酸鹽有機緩沖劑；球化 表面活性劑；和滲透壓調節組分，其中所述血液學試劑具有足夠的光學透明度W有助于光 學分析所述樣品。
[0014] 在一些實施方案中，所述非磯酸鹽有機緩沖劑為MES、M0PS、肥陽S或咪挫。在一些 實施方案中，所述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度為至少約0. 5%。在一些實施方案中， 所述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度范圍為約0. 5%至約20%。在一些實施方案中，所 述試劑中非磯酸鹽有機緩沖劑的濃度為至少約50mM。在一些實施方案中，所述試劑中非磯 酸鹽有機緩沖劑的濃度范圍為約50至約1，500mM。在一些實施方案中，所述球化表面活性 劑為麥芽糖巧。在一些實施方案中，所述球化表面活性劑的濃度為至少約0.0002%。在一 些實施方案中，所述球化表面活性劑的濃度范圍為約0. 0002%至約2. 0%。在一些實施方 案中，所述球化表面活性劑的濃度為至少約5mg/L。在一些實施方案中，所述球化表面活性 劑的濃度范圍為約5至約1，OOOmg/L。在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分為氯化鋼、 氯化鐘或它們的混合物。在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分的濃度為至少約0. 25 %。 在一些實施方案中，所述滲透壓調節組分的濃度范圍為約0. 25%至約25%。在一些實施方 案中，所述試劑還包含抗微生物劑。在一些實施方案中，所述抗微生物劑的濃度為至少約 0.02%。在一些實施方案中，所述抗微生物劑的濃度范圍為約0.02%至約0.1%。在一些 實施方案中，所述試劑的抑范圍為約6. 0至約8. 0抑單位。在一些實施方案中，所述試劑 的IX濃度溶液的滲透壓范圍為約250至約350m0sm。
【附圖說明】
[0015] 并入本文的附圖形成了說明書的部分。結合此書面說明書，附圖還起到解釋本文 所述的試劑、體系和方法的原理，并使本領域