抑制類風濕因子干擾的膠乳增強免疫比濁試劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種免疫檢測試劑，特別是一種抑制類風濕因子干擾的膠乳增強免疫 比濁試劑。
[000引 0. 01-0. 2 % (W/V)指每lOOml溶劑中添加0. 01-0. 2g溶質，本文中類似之處意見 同此之處。
【背景技術】
[0003] 膠乳增強免疫比濁法是在免疫比濁法基礎上發展的一種測定人體液特種標志蛋 白含量的檢測方法。其基本原理是；將待測物質相對應的具有高特異性、高親和力抗體包被 至納米膠乳微球上，當此微球與含有待測樣本混合時，在合適的反應條件下，抗體與樣本中 抗原特異結合，形成抗原-抗體-膠乳微粒復合物，在短時間內迅速聚集在一起，改變反應 液的散光或透光性能，并且在一定范圍內，反應液吸光度值變化與待測樣本中的抗原含量 成正比關系，利用標準品繪制標準曲線，便可根據樣本吸光度值變化測定待測物含量。由于 抗體特異性識別抗原，所W該方法具有很好的檢測特異性；納米膠乳微球的引入使反應液 濁度變化更為顯著，從而提高試驗的靈敏度，能測定體液中微量蛋白含量；同時膠乳增強免 疫比濁法能利用普通生化分析儀進行檢測，操作簡單，容易實現自動化，不易受人為操作和 外界因素干擾，檢測穩定性和重復性好，可快速、準確獲得檢測結果，對疾病早期診斷和治 療具有重要臨床意義。
[0004] 膠乳增強免疫比濁法常規檢測的一個限制是易于受到由可能存在于測試樣品 中的嗜異性抗體引起的干擾，尤其是類風濕因子引起的干擾。類風濕因子（rheumatoid factor,R巧是抗人IgG分子化片段上抗原決定族的特異性抗體，是W變性IgG為祀抗原 的自身抗體。在商業免疫類檢測試劑中所采用的抗體大多是動物來源的IgG類抗體，化段 與人IgG的化段具有較高的同源性，能被RF識別并結合，所W在待測物質為陰性、RF陽性 的檢測樣本中，免疫檢測試劑有可能被RF捕獲產生信號，從而導致假陽性結果。
[0005] 免疫檢測試劑研制中，減少類風濕因子或異嗜性干擾的方法通常有；（1)從樣品 中去除干擾性的免疫球蛋白或使其失活。比如使用IgG固相吸附劑吸附樣本中的類風濕因 子，或使用含有2-琉基己醇的稀釋液稀釋樣本，W降解IgM型類風濕因子，但該會使檢測操 作復雜化，并且有可能在去除干擾蛋白的同時也減少了待測物質的含量或活性。（2)使用減 少干擾的封閉劑，大多為IgG，市場上有許多商品化的封閉劑。但由于類風濕因子或異嗜性 抗體的多樣化，W及各種產品所使用的抗體不同，目前尚未有一種產品可W有效消除所有 干擾，通常需要使用不同產品進行組合、篩選，不但增加工作量、挺高試劑成本，另一方面由 于使用多種不明成分的封閉劑，也不可控制地引入新的干擾檢測結果的因素。（3)修飾測定 抗體W使其更不易與類風濕因子反應。目前最常使用的一種方法是將檢測IgG抗體酶切去 除化片段，用F(油'）2替代完整的IgG，既保留其識別結合抗體的活性，又消除化的干擾， 減少試劑的非特異性反應。但在IgG的酶切、純化制備工藝中會損失一部分抗體且對抗體 活性也有一定程度影響，提高試劑成本，更重要的是試劑制備過程進一步復雜，對控制試劑 批間差設置了不可逾越的障礙，從而限制了此類試劑在臨床上的推廣。
【發明內容】
[0006] 為解決上述問題，本發明公開的抑制類風濕因子干擾的膠乳增強免疫比濁試劑， 試劑組成簡單，且具有良好的通用性，針對膠乳增強免疫比濁試劑具有較為廣泛的通用性， 可W比較有效地消除大多數類風濕因子的干擾，提高檢測結果的特異性和準確性。
[0007] 本發明公開的抑制類風濕因子干擾的膠乳增強免疫比濁試劑，包括試劑R1和試 劑R2,其中試劑R2包括抗體致敏的膠乳微粒，試劑R1的PH值為5. 5-6. 0。優選為試劑R1 的PH值為 5. 5-5. 7。
[000引本發明公開的抑制類風濕因子干擾的膠乳增強免疫比濁試劑的一種改進，試劑R1 還包括0.01-0. 2% (W/V)的蛋白變性劑。優選為試劑R1還包括0.01-0. 1 % (W/V)的蛋白 變性劑。
[0009] 本發明公開的抑制類風濕因子干擾的膠乳增強免疫比濁試劑的一種改進，蛋白變 性劑為十二烷基硫酸鋼、尿素、鹽酸脈中的任一。
[0010] 本發明方案中控制PH和加入蛋白變性劑是基于；類風濕因子或異嗜性抗體多為 多重特異性抗體，相較于一般抗體與抗原的專一地特異性結合反應，其對不同物種的檢測 試劑抗體結合能力相對較弱，利用該種親和力上的差異，適當降低檢測反應抑值或加入適 量的蛋白變性劑均可W解離蛋白間的相互作用，能在不影響檢測抗體與待測抗原特異反應 的前提下，減弱類風濕因子對檢測抗體的非特異結合反應，從而有效消除類風濕因子對檢 測結果的干擾。
[0011] 因此，本發明方案提出一種簡單且通用的膠乳增強免疫比濁檢測試劑的配置，從 多個角度入手可W有效地消除大多數類風濕因子的干擾，提高檢測結果的特異性和準確 性，試劑組成簡單，具有較高的靈敏度，針對大多數膠乳增強免疫比濁試劑具有較為廣泛的 通用性。
【具體實施方式】
[0012] 下面結合【具體實施方式】，進一步闡明本發明，應理解下述【具體實施方式】僅用于說 明本發明而不用于限制本發明的范圍。
[0013] 本發明方案廣泛通用地適用于多種膠乳增加免疫比濁試劑，包括而不限于采用膠 乳增強免疫比濁法的鐵蛋白檢測試劑、胃蛋白酶原I檢測試劑、胃蛋白酶原II檢測試劑、降 巧素原檢測試劑、D二聚體檢測試劑、肌巧蛋白I檢測試劑等，W下實施例僅列舉本發明方 案對鐵蛋白檢測試劑、胃蛋白酶原I檢測試劑、降巧素原檢測試劑=種檢測試劑的應用W 說明本發明方案的優越性，但是該=種舉例并非用于限制本發明方案的保護范圍，需要表 明的是本方案對包括鐵蛋白檢測試劑、胃蛋白酶原I檢測試劑、降巧素原檢測試劑在內絕 大多數膠乳增加免疫比濁試劑均具有良好的通用性。
[0014] 實施例一針對鐵蛋白檢測試劑（膠乳增強免疫比濁法）
[00巧]鐵蛋白檢測試劑R2(pH7. 4) ;10mMPB緩沖液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1 %吐 溫-20、0. 1%疊氮鋼、5%海藻糖、0. 1%鐵蛋白多克隆抗體致敏的納米膠乳微粒。
[0016] 不同類風濕因子含量的鐵蛋白樣本制備：
[0017] 在含有300yg/L鐵蛋白純品的樣品中分別加入0、20、100、400IU/mL的類風濕因 子，類風濕因子有兩種來源，購自兩個不同廠家（RF-I、RF-II)。
[001引 （1)不同抑值鐵蛋白檢測試劑R1的比較
[0019] 鐵蛋白檢測試劑Rl-A(pH7. 4) ;10mMPB緩沖液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1 %吐 溫-20、0. 1%疊氮鋼、1% 陽G6000。
[0020] 鐵蛋白檢測試劑Rl-B(p冊.0)aOOmMMES緩沖液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 溫-20、0. 1%疊氮鋼、1% 陽G6000。
[002U 鐵蛋白檢測試劑Rl-C(p冊.8)aOOmMMES緩沖液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 溫-20、0. 1%疊氮鋼、1% 陽G6000。
[002引 鐵蛋白檢測試劑Rl-D(p冊.7)aOOmMMES緩沖液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 溫-20、0. 1%疊氮鋼、1% 陽G6000。
[002引 鐵蛋白檢測試劑Rl-E(p冊.5)aOOmMMES緩沖液、150mM化Cl、l%BSA、0. 1%吐 溫-20、0. 1%疊氮鋼、1% 陽G6000。
[0024]W上配制的五種鐵蛋白檢測試劑R1 (R1-A、R1-B、R1-C、R1-D、R1-E，各試劑的PH不同）與同一試劑R2配套使用，對待測樣本鐵蛋白含量進行檢測。結果如表11所示，低值 RF(20IU/mL)對鐵蛋白檢測試劑基本沒有干擾，兩種高值RF都會對檢測結果造成干擾，尤 其是當試劑R1抑值在7. 4時，檢測結果受高值RF干擾較大，隨R1抑值降低，RF干擾逐漸 降低，當R1抑值為5. 5時，鐵蛋白含量檢測結果基本不受添加的類風濕因子影響，與祀值一 致。說明在一定范圍內降低R1抑值能有效