一種藥材中總重金屬含量檢測的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種藥材中總重金屬含量檢測的方法，具體涉及一種建立熒光探針標 記法藥材中總重金屬含量檢測的數學模型的方法和利用模型測定藥材中總重金屬含量檢 測的方法，屬于中藥材質量全檢測領域。
【背景技術】
[0002] 重金屬通常是指比重大于5g?cnT3的一類金屬元素，如銅、鎘、金、銀、鉛、鋅、鎳、 鈷、鉻和汞等。目前隨著城市化工業化進程的加快，環境污染日益加劇，使中藥材重金屬含 量日益增高，中藥材品質降低，嚴重危害人體健康。重金屬可以通過空氣、水、食物等渠道進 入體內，與體內有機成分、蛋白質、核糖、維生素、激素、生物酶等結合成或反應，使其喪失或 改變了原來的生理化學功能而產生病變或表現出毒性，從而對人體造成危害。
[0003] 目前，重金屬的檢測方法仍以傳統的重金屬檢測方法如紫外分光光度法、電感耦 合等離子體質譜法和高效液相色譜法等為主，所用儀器基本為大型儀器。近年來對于特定 金屬離子的定性或半定量的熒光檢測方法有報道，但不能夠快速、簡便的進行總重金屬的 定量測定。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種建立藥材中總重金屬含量檢測的模型的方法，同時本發 明還提供了一種藥材中總重金屬含量檢測的模型及其檢測的方法，本發明能快速測定藥材 中總重金屬含量。
[0005] 本發明提供的建立藥材中總重金屬含量檢測的模型的方法，包括如下步驟：
[0006] 1)取已知等梯度濃度的鉛離子溶液，與HEPES緩沖溶液和熒光探針溶液混合得混 合液，然后分別測定所述混合液的熒光強度值，以所述混合液的熒光強度比值1 45(|/138(|為橫 坐標，鉛離子濃度為縱坐標，繪制出線性標準曲線I，得到線性標準曲線I的方程；
[0007] 2)將藥材與HEPES緩沖溶液和熒光探針溶液混合反應后，測定反應后體系的熒光 強度值，將所述反應后體系的熒光強度比值1 45〇/138(1代入所述線性標準曲線I的方程，得到 所述藥材中金屬離子濃度C值；
[0008] 3)用現有方法測定與步驟2)中所述藥材的同一批的藥材中總重金屬含量，以該 藥材中總重金屬含量為縱坐標，以步驟2)中所述藥材中金屬離子濃度C值為橫坐標，繪制 出線性標準曲線II，得到線性標準曲線II的方程，所述線性標準曲線I的方程和所述線性 標準曲線II的方程即為所述藥材中總重金屬含量檢測的數學模型。
[0009] 本發明中，步驟1)得到的所述線性標準曲線I的方程，需要分別考察其穩定性、 精密性和重現性。
[0010] 上述的方法，所述鉛離子溶液為硝酸鉛溶液；
[0011] 所述熒光探針溶液中熒光探針的結構式為式I所示。
[0012]
[0013] 上述的方法，所述鉛離子溶液的濃度可為0~5. Omg/L，具體可為0、0. 5、1. 0、1. 5、 2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5和5. Omg/L，所述鉛離子溶液的濃度梯度可為0~1. Omg/L，優選 為 0? 5mg/L;
[0014] 步驟1)中，所述熒光探針溶液的濃度可為1. 6~2mM，優選為1. 8mM;
[0015] 所述HEPES緩沖溶液的濃度為0.75M~1. 25M;
[0016] 所述藥材為天麻、丹參、木通、金銀花、茯苓、白芥子、梔子、厚樸、青蒿和鹿茸中的 至少6種；
[0017] 步驟2)中，所述熒光探針溶液的濃度可為1. 6~2mM，優選為1. 8mM;
[0018] 所述HEPES緩沖溶液（即羥乙基哌嗪乙硫磺酸的緩沖溶液）的濃度可為0.75~ 1. 25M，優選為 1. 0M。
[0019] 上述的方法，所述藥材、所述熒光探針溶液和所述HEPES緩沖溶液的體積比可為 5 :3 ~5 :0? 5 ~1. 5,優選為 5 :4 :1。
[0020]步驟1)和步驟2)中，所述熒光強度值測定的激發波長可為340nm，所述熒光強度 值測定的掃描波長可為350~600nm。
[0021] 本發明中，步驟3)中，所述藥材中總重金屬含量采用紫外分光光度法測定。
[0022] 上述的方法，所述藥材中總重金屬含量檢測的數學模型中，所述線性標準曲線I 的方程如下式II所示，
[0023] y= 0. 1165x+0. 5413 式II
[0024] 式II中，y為所述混合液的熒光強度比值145(|/138(|，x為所述鉛離子的濃度；
[0025] 所述線性標準曲線II的方程如下式III所示，
[0026] z = 1. 2335x+28. 355 式III
[0027] 式III中，x為與步驟2)中所述藥材中金屬離子濃度C值，z為與步驟2)中所述藥 材同一批的藥材中總重金屬離子濃度。
[0028] 本發明還提供了一種載體，其上記載了上述的方法建立的藥材中總重金屬含量檢 測的模型。
[0029] 本發明進一步提供了一種藥材中總重金屬含量檢測的方法，包括如下步驟：1)將 待測藥材與ffiPES緩沖溶液和熒光探針溶液混合反應后，測定反應體系的熒光強度值；
[0030] 2)采用權利要求6所述藥材中總重金屬含量檢測的數學模型，將所述待測藥材的 熒光強度比值1 45(1/138(1代入所述線性標準曲線I的方程中，得到所述待測藥材中金屬離子 濃度C值；再將所述待測藥材中金屬離子濃度C值代入所述線性標準曲線II的方程中，即得 到所述測藥材中總金屬含量。
[0031] 上述的方法，所述待測藥材可為天麻、丹參、木通、金銀花、茯苓、白芥子、梔子、厚 樸、青蒿或鹿茸；
[0032] 所述熒光探針溶液中熒光探針的結構式為式I所示；
[0033]
[0034] 所述熒光探針溶液的濃度可為1. 6~2mM，優選為1. 8mM;
[0035] 所述HEPES緩沖溶液的濃度可為0.75~1. 25M，優選為1. 0M。
[0036] 上述的方法，所述待測藥材、所述HEPES緩沖溶液和所述熒光探針溶液的體積比 可為5 :3~5 :0. 5~1. 5,優選為5 :4 :1;
[0037] 所述反應體系的熒光強度值測定的激發波長可為340nm，所述反應體系的熒光強 度值測定的掃描波長可為350~600nm。
[0038] 本發明藥材中總重金屬含量檢測的數學模型應用于采用熒光探針測定藥材中重 金屬含量中。
[0039] 本發明中，藥材中重金屬離子與熒光探針結合，對藥材進行熒光標定，利用熒光探 針的反應靈敏、快速的特點，建立了藥材中重金屬離子含量測定的模型，利用該模型測定待 測藥材中總重金屬含量。
[0040] 本發明具有以下優點：
[0041] 本發明中藥材中重金屬離子與熒光探針結合，對藥材進行熒光標定，利用熒光探 針的反應靈敏、快速的優點，建立了藥材中重金屬離子含量測定的模型，利用該模型測定待 測藥材中總重金屬含量，對藥材含量進行測定；本發明測定藥材中總重金屬含量準確，操作 簡便、用時短。
【附圖說明】
[0042] 圖1為本發明實施例1中線性標準曲線I。
[0043] 圖2為本發明實施例1中線性標準曲線II。
【具體實施方式】
[0044] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0045] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0046] 下述實施例中的儀器：LD-250中藥打粉機（長沙長宏藥機，中國），SB-800DTD超 聲儀（寧波新芝生物科技有限公司，中國），WD-9403C紫外分析儀（北京市六一儀器廠，中 國），F-4500熒光光度計（日立，日本）。
[0047] 下述實施例中試劑：乙腈（分析純），硝酸鉛標準品；
[0048] 熒光探針結構如式I。
[0049]
[0050] 實施例1、藥材中總重金屬含量檢測的數學模型的建立
[0051] -、溶液的配制
[0052] 熒光探針溶液的配制：精密稱取熒光探針晶體0. 380g使其完全溶于乙腈中，置于 1L容量瓶中，然后加入乙腈定容，得到濃度為1. 8mM的熒光探針溶液，在紫外光下該熒光探 針溶液顯綠色熒光。4°C