試結果為：1. 05±0. 09 yM。
[0060] (9)用ICP/MS的方法對自來水中的二價銅離子進行檢測，結果為： 0. 97±0. 05 yM。
[0061] 所述A液的配方為：濃度為10mM的HEPES緩沖液，pH7. 4。
[0062] 所述B液的配方為：5mM的L-半胱氨酸，溶于去離子水中，現用現配。
[0063] 所述C液的配方為：50yM的基于花菁的探針，溶于二甲亞砜中。
[0064] 實施例3 :海水中二價銅離子的加標濃度測定。
[0065] 與實施例1不同之處在于：
[0066] (1)樣品的獲取：海水購買于國家海洋局第二海洋研宄所，商品號： GBff(E)080040〇
[0067] (2)海水的加標處理：將二價銅離子加入海水至終濃度為0.5 yM。
[0068] (3)將加標處理的海水865 y 1與100 y 1 A液充分混勻
[0069] (4)與B液溫浴：將步驟（1)所得液與20 y 1 B液在室溫下溫浴5min。
[0070] (5)加入C液反應：將步驟⑵所得液中加入10 y 1 C液。在室溫下反應lOmin。
[0071] (6)二價銅離子濃度的計算：將步驟（5)最終所得液體用紫外分光光度計進行吸 光度檢測，檢測波長：785nm。并將所得數據與標準曲線進行比對計算，獲得海水中二價銅離 子的濃度（參見表1)。
[0072] (7)將以上步驟反復三次。
[0073] (8)最終該反法的測試結果為：0? 58±0. 07 yM。
[0074] (9)用ICP/MS的方法對自來水中的二價銅離子進行檢測，結果為： 0? 51±0. 09 yM。
[0075] 所述A液的配方為：濃度為10mM的HEPES緩沖液，pH7. 4。
[0076] 所述B液的配方為：5mM的L-半胱氨酸，溶于去離子水中，現用現配。
[0077] 所述C液的配方為：50yM的基于花菁的探針，溶于二甲亞砜中。
[0078] 實施例4:海水中二價銅離子的加標濃度測定。
[0079] 與實施例1不同之處在于：
[0080] (1)樣品的獲取：海水購買于國家海洋局第二海洋研宄所，商品號： GBff(E)080040〇
[0081](2)海水的加標處理：將二價銅離子加入海水至終濃度為1yM。
[0082] (3)將加標處理的海水865 y 1與100 y 1 A液充分混勻
[0083] (4)與B液溫浴：將步驟⑴所得液與20 y 1 B液在室溫下溫浴5min。
[0084] (5)加入C液反應：將步驟⑵所得液中加入10 y 1 C液。在室溫下反應lOmin。
[0085] (6)二價銅離子濃度的計算：將步驟（5)最終所得液體用紫外分光光度計進行吸 光度檢測，檢測波長：785nm。并將所得數據與標準曲線進行比對計算，獲得海水中二價銅離 子的濃度（參見表1)。
[0086](7)將以上步驟反復三次。
[0087] (8)最終該反法的測試結果為14±0. 12 yM。
[0088](9)用ICP/MS的方法對自來水中的二價銅離子進行檢測，結果為： 1. 07±0. 16 yM。
[0089] 所述A液的配方為：濃度為lOmM的HEPES緩沖液，pH7.4。
[0090] 所述B液的配方為：5mM的L-半胱氨酸，溶于去離子水中，現用現配。
[0091] 所述C液的配方為：50 yM的基于花菁的探針，溶于二甲亞砜中。
[0092] 實施例5 :菲律賓蛤仔中Cu2+的濃度測定。
[0093] 與實施例1不同之處在于：
[0094] (1)樣品的獲取：菲律賓蛤仔取自煙大市場水產部。
[0095] (2)樣品預處理：將取來的生物樣品清洗移去外殼，獲得需檢測的有效部位待用， 再用二次水清洗三次，然后放入冰箱冷凍成冰，然后再放入冷凍干燥器去除水分，干燥后， 再研缽中磨成粉狀待用。
[0096] (3)菲律賓蛤仔樣品的加標處理：將二價銅離子加入樣品至終濃度為0. 5 yM。
[0097] (4)將加標處理的樣品865 y 1與100 y 1 A液充分混勻；
[0098] (4)與B液溫浴：將步驟⑴所得液與20 y 1 B液在室溫下溫浴5min。
[0099] (5)加入C液反應：將步驟⑵所得液中加入10 y 1 C液。在室溫下反應lOmin。 [0100](6)二價銅離子濃度的計算：將步驟（5)最終所得液體用紫外分光光度計進行吸 光度檢測，檢測波長：785nm。并將所得數據與標準曲線進行比對計算，獲得菲律賓蛤仔海水 中二價銅離子的濃度（參見表1)。
[0101] (7)將以上步驟反復三次。
[0102] (8)最終該反法的測試結果為：0. 52±0. 03 yM。
[0103] (9)用ICP/MS的方法對自來水中的二價銅離子進行檢測，結果為： 0. 47±0. 05 yM。
[0104] 所述A液的配方為：濃度為10mM的HEPES緩沖液，pH 7. 4。
[0105] 所述B液的配方為：5mM的L-半胱氨酸，溶于去離子水中，現用現配。
[0106] 所述C液的配方為：50yM的基于花菁的探針，溶于二甲亞砜中。
[0107] 實施例6 :菲律賓蛤仔中Cu2+的濃度測定。
[0108] 與實施例1不同之處在于：
[0109](1)樣品的獲取：菲律賓蛤仔取自煙大市場水產部。
[0110] (2)樣品預處理：將取來的生物樣品清洗移去外殼，獲得需檢測的有效部位待用， 再用二次水清洗三次，然后放入冰箱冷凍成冰，然后再放入冷凍干燥器去除水分，干燥后， 再研缽中磨成粉狀待用。
[0111] (3)菲律賓蛤仔樣品的加標處理：將二價銅離子加入樣品至終濃度為1 yM。
[0112] (4)將加標處理的樣品865 y 1與100 y 1 A液充分混勻；
[0113] (5)與B液溫浴：將步驟⑴所得液與20 y 1 B液在室溫下溫浴5min。
[0114] (6)加入C液反應：將步驟⑵所得液中加入10 y 1 C液。在室溫下反應lOmin。
[0115] (7)二價銅離子濃度的計算：將步驟（5)最終所得液體用紫外分光光度計進行吸 光度檢測，檢測波長：785nm。并將所得數據與標準曲線進行比對計算，獲得菲律賓蛤仔中二 價銅離子的濃度（參見表1)。
[0116](8)將以上步驟反復三次。
[0117] (9)最終該反法的測試結果為07±0. 09 yM。
[0118] (10)用ICP/MS的方法對自來水中的二價銅離子進行檢測，結果為： 1. 05±0. 06 yM。
[0119] 所述A液的配方為：濃度為l-80mM的HEPES緩沖液，pH7.4。
[0120] 所述B液的配方為：5mM的L-半胱氨酸，溶于去離子水中，現用現配。
[0121] 所述C液的配方為：50yM的基于花菁的探針，溶于二甲亞砜中。
[0122] 表 1
【主權項】
1. 一種基于花菁的探針用于檢測痕量二價銅離子的方法，其特征在于：在待測樣品中 加入緩沖液和L-半胱氨酸溶液在室溫下進行親核反應，而后再加入基于花菁的探針在室 溫下繼續進行親核反應，通過親核反應的變化即可定性的檢測樣品中二價銅離子，再將親 核反應獲取反應液在785nm的紫外分光光度計的吸光度，再通過標準曲線，即定量的獲得 待測樣品中二價銅離子的濃度。
2. 按權利要求1所述的基于花菁的探針用于檢測痕量二價銅離子的方法，其特征在 于： 1) 在IOOmL待測樣品中加入980mL緩沖液和IOmL L-半胱氨酸溶液在室溫下進行親核 反應 5-20min ; 2) 將1)中所得溶液加入IOmL基于花菁的探針在室溫下繼續進行親核反應5-20min， 即可定性的檢測樣品中二價銅離子； 3) 所得反應液在785nm的紫外分光光度計進行吸光度檢測，再通過標準曲線，即定量 的獲得待測樣品中二價銅離子的濃度。
3. 按權利要求1或2所述的基于花菁的探針用于檢測痕量二價銅離子的方法，其特征 在于： 所述緩沖液為濃度為l_80mM的羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖液，pH6-8 ; 所述L-半胱氨酸溶液為50mM的L-半胱氨酸水溶液； 所述基于花菁的探針Cy-NB為50-500 y g的基于花菁的探針，溶于IOmL二甲亞砜中。
【專利摘要】本發明涉及利用有機探針材料進行環境檢測領域。具體地說是一種利用L-半胱氨酸與基于花菁的探針用于檢測痕量二價銅離子的方法。在待測樣品中加入緩沖液和L-半胱氨酸溶液在室溫下進行親核反應，而后再加入基于花菁的探針在室溫下繼續進行親核反應，通過親核反應的變化即可定性的檢測樣品中二價銅離子，再將親核反應獲取反應液在785nm的紫外分光光度計的吸光度，再通過標準曲線，即定量的獲得待測樣品中二價銅離子的濃度。本發明操作簡單方便、肉眼可視、費用低等優點。
【IPC分類】G01N21-78, G01N21-3577
【公開號】CN104849271
【申請號】CN201510275221
【發明人】陳令新, 殷堃, 于法標, 陳浩, 柴百惠
【申請人】中國科學院煙臺海岸帶研究所
【公開日】2015年8月19日
【申請日】2015年5月26日