一種二十五味珊瑚丸的一測多評快速定性與定量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種二十五味珊瑚丸的一測多評快速定性與定量檢測方法?？焖俣ㄐ?方法是指采用薄層鑒別方法，對紅花、西紅花、打箭菊、甘草、獐牙菜、訶子、木香、丁香和藏 菖蒲9味中藥的快速薄層鑒別；快速定量方法是指用高效液相色譜方法，雙通道不同檢測 波長，對丁香酚、木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的一測三評定量測定。
【背景技術(shù)】
[0002] 在中藥復(fù)方制劑中，特別是二十五味以上組方的復(fù)方制劑，由于藥味多，各藥味的 劑量低，眾多的微量有效成分相互干擾，薄層鑒別率低，定量測定指標(biāo)少，以2010年版中國 藥典一部為例，收載的二十五味以上的復(fù)方制劑，粗略的計算了一下約有14個品種，其薄 層鑒別收載率平均為12%左右，定量測定指標(biāo)，按測定的成分計算，平均不到1種成分。也 就是說在一個二十五味以上組方的制劑中，只有3-4味藥材能夠識別其有無投料，一種成 分能控制其含量，而眾多的藥材與有效成分是無法控制其投料情況與含量的，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)識 別水平太低，無法給質(zhì)量監(jiān)督提供有力支撐。
[0003] 即便在質(zhì)量檢測指標(biāo)相對較多的品種中，薄層鑒別也多是一個品種，如有N項鑒 另IJ，就要制備N種供試品溶液，N塊薄層板，展開N次，鑒別N味藥材的傳統(tǒng)鑒別模式。為排 除干擾，樣品的前處理程序多復(fù)雜、煩瑣，需用大量的有機(jī)試劑反復(fù)純化處理，費力、費時、 費試劑、污染環(huán)境，危害健康，檢測周期長。這樣，一個含6~7項薄層鑒別和二項含量測定 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測完成，一般要花費一周的時間，如遇復(fù)試，時間翻倍，檢測速度嚴(yán)重制約著 中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)速度。所以尋找簡便、快捷的檢測方法、提高檢測效率、降低檢測成本，也是 中藥質(zhì)量控制必須突破的難關(guān)。以中國藥典2010年版一部收載的金蒲膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為例 剖析如下。該品種由24味中藥組成，其標(biāo)準(zhǔn)項下收載了 7項薄層鑒別和兩項含量測定。具 體方法如下：
[0004] 【鑒別】(1)取本品內(nèi)容物4g，加甲醇20ml，浸漬10分鐘，濾過，取濾液10ml，蒸干， 殘渣加水IOml使溶解，再加鹽酸lml，置水浴中加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提 取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。另取 大黃對照藥材0. lg，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅 膠G薄層板上，以體積比為15 : 5 : 1的30~60°C的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層溶 液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變成紅色。
[0005] (2)取本品內(nèi)容物4g，加濃氨試液Iml與三氯甲烷20ml，浸漬1小時，時時振搖，濾 過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品，加乙醇 制成每1ml含Img的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液20 μ 1、對照品溶液1 μ 1，分別 點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為10 : 6 : 1的正己烷-三氯甲烷-甲醇為展開劑，展 開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰，揮盡薄層板上吸附的碘，置紫外光燈365nm 下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
[0006] (3)取本品內(nèi)容物3g，加三氯甲烷25ml，加熱回流5小時，濾過，濾液中加活性炭 0. 3g，振搖，放置30分鐘，濾過，濾液濃縮至干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶 液。另取華蟾酥毒基對照品，加三氯甲烷制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取 供試品溶液10 μ 1、對照品溶液2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為4 : 3 : 3 的環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱 至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0007] (4)取本品內(nèi)容物6g，加80 %丙酮溶液20ml，超聲處理30分鐘，靜置，取上清液， 作為供試品溶液。另取紅花對照藥材〇.5g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各 1〇μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為7 : 0.4 : 2 : 3的乙酸乙酯-甲醇-甲 酸-水為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的斑點。
[0008] (5)取本品內(nèi)容物6g，加甲醇50ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加 水30ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加1 %氫氧化 鈉溶液洗滌2次，每次20ml，取正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗至中性，取正丁醇液，蒸干， 殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含Img 的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液10 μ 1、對照品溶液5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄 層板上，以體積比為13 : 7 : 2的三氯甲烷-甲醇-水的下層溶液為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，l〇5°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；置紫外光燈365nm下檢視，顯相同顏色的熒光斑點。
[0009] (6)取本品內(nèi)容物5g，加三氯甲烷20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加 甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取膽酸對照品，加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作為 對照品溶液。吸取供試品溶液10 μ 1、對照品溶液4 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以 體積比為15 : 7 : 5的異辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的斑點。
[0010] ⑵取本品內(nèi)容物10g，加三氯甲烷30ml，加熱回流4小時，放冷，濾過，濾液蒸干， 殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液。另取穿山甲對照藥材2g，同法制成對照藥 材溶液。吸取上述兩種溶液各1〇μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20 : 1 的甲苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干。噴以體積比為9 : 1的醋酐-硫酸的混合溶液， 80°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 斑點。
[0011] 苦參含量測定
[0012] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為 18 : 18 : 70 : 0.1的乙腈-甲醇-pH6. 8的磷酸鹽緩沖液-三乙胺為流動相，檢測波長為 220nm，理論板數(shù)，按苦參堿峰計算不低于8000。
[0013] 對照品溶液制備取苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含60 μ g的 溶液，即得。
[0014] 供試品溶液制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0. 5g，精密稱定，置具 塞錐形瓶中，加濃氨溶液2ml使?jié)駶?，再加三氯甲?5ml，以功率250w，頻率33kHz，超聲處 理20分鐘，濾過，取濾液，再用三氯甲烷洗滌殘渣、容器及濾器4次，每次5ml，濾過，合并濾 液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù) 濾液，即得。
[0015] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定， 即得。
[0016] 本品每粒含苦參以苦參堿C16H24N2O計，不得少于0. 16mg。
[0017] 蟾酥含量測定
[0018] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為 43.5 : 56. 5的乙腈-水為流動相，檢測波長為292nm，理論板數(shù)，按華蟾酥毒基峰計算應(yīng)不 低于4000。
[0019] 對照品溶液制備取華蟾酥毒基對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含 〇· 16mg的溶液，即得。
[0020] 供試品溶液制備取本品40粒的內(nèi)容物，精密稱定，混勻，研細(xì)，取約5g，精密稱 定，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流5小時，濾過，濾液加活性炭0. 3g，振搖，放 置5分鐘，濾過，用三氯甲烷10ml，分次洗滌濾器及濾渣，合并濾液，蒸干，殘渣加甲醇適量 使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0021] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供