一種附甘藥物的鑒別方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥品，具體涉及一種附甘藥物的鑒別方法，屬藥品技術領域。 技術背景
[0002] 中國發明專利（ZL201210536161. 3) -種治療過敏性鼻炎和支氣管哮喘的藥物， 由附子6 - 18份，甘草1 一 9份為原料制成(簡稱"附甘藥物")，對于過敏性鼻炎和支氣管 哮喘有很好的療效。
[0003] 附甘藥物制成制劑后，其外表形態、顏色與其它藥物制劑近似，本領域技術人員， 以外觀鑒別不易區分真假，偽劣。現有技術用高效液相色譜法鑒別麻黃、附子與甘草的方 法眾多，通過實驗證明用于附甘藥物制劑的專屬性均較差，因此，為了保證附甘藥物質量和 臨床用藥效果，提供一種簡便、可靠的鑒別方法非常重要。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是為了提供一種附甘藥物的鑒別方法，為生產、流通、使用及檢驗、 監督管理部門提供一種簡便、可靠的鑒別方法。
[0005] 本發明的目的通過以下技術方案實現： 一種附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：采用高效液相色譜法測定，使用以極性乙醚連 接苯基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(簡稱：苯基柱)。
[0006] 本發明所述的一種附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：系統適用性試驗，以乙腈： 0. 1%~0. 2%的磷酸溶液=20~25 : 75~80為流動相，檢測波長為222~242nm，理論板數按苯甲 酰新烏頭原堿峰計算應不低于5000 ; 對照品溶液的制備取苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿對照品 適量，精密稱定，分別加乙腈制成每lml含0.2mg的溶液，作為對照品貯備液；分別精密量 取上述對照品貯備液各10ml、5ml和5ml，置同一 100ml的量瓶中，用0. 1%~0. 2%的磷酸溶 液稀釋至刻度，搖勻，作為固相萃取柱系統適用性試驗用對照品溶液；分別精密量取上述對 照品貯備液各3~301111、1~51111、1~51111，置同一 2001111的量瓶中，加乙腈至401111，用0.1%~0.2% 的磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，制備成每lml含苯甲酰新烏頭原堿3~30yg、苯甲酰烏頭原 堿]-5yg、苯甲酰次烏頭原堿]-5yg的對照品溶液； 固相萃取柱系統適用性試驗精密量取苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次 烏頭原堿的對照品1C備液各l〇ml、5ml和5ml，混勾，室溫減壓回收至干，用0.lmol/L鹽酸溶 液適量溶解并定容至200ml，精密量取10ml，置于處理好的固相萃取柱上，此固相萃取柱以 混合型陽離子交換反相吸附劑為填充劑，規格為100~200mg、4~8ml，預先依次用乙腈、水各 6ml洗脫；依次以水3ml，1. 25%的氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脫，待洗脫液流盡后，放置 5分鐘，再用乙腈：濃氨試液=90 : 10的混合溶液10ml洗脫，收集洗脫液，于40°C以下減 壓回收溶劑至干，殘渣加入流動相5ml使溶解，濾過，取續濾液作為固相萃取柱系統適用性 試驗溶液； 分別精密吸取上述系統適用性試驗溶液與對照品溶液各10~20yl，注入液相色譜 儀，測定，計算系統適用性試驗溶液與對照品溶液中各相應成分峰面積的比值，不得小于 0. 95 ； 供試品溶液的制備：取檢品研細，稱取〇. 2~0. 6g，置具塞錐形瓶中，加入0.lmol/L鹽酸 溶液25ml，密塞，超聲處理40分鐘并時時振搖，后4000轉/分鐘離心30分鐘，濾過，量取續 濾液l〇ml，照固相萃取柱系統適用性試驗，自"置于處理好的固相萃取柱"起，依法操作，制 備供試品溶液； 鑒別：分別吸取對照品溶液與供試品溶液各l〇~25yl，注入液相色譜儀測定，供試品 色譜中呈現與苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿對照品色譜峰保留 時間相對應的色譜峰，即確定制劑中含有附子，否則制劑中不含附子。
[0007] 本發明的一種附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：理論板數按苯甲酰新烏頭原堿 峰計算應不低于10000。
[0008] 本發明的一種附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：制備供試品溶液時取樣量是 0. 5g〇
[0009] 本發明的一種附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：供試品溶液的制備過程中，所用 固相萃取柱填料為混合型陽離子交換反相吸附劑，規格為100~200mg，容積為4~8ml，并預 先依次用乙腈、水各6ml洗脫處理。
[0010] 本發明的一種附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：供試品溶液的制備過程中，固相 萃取柱的洗脫過程依次為水3ml，1. 25%的氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml，待洗脫液流盡后， 放置5分鐘，再用乙腈：濃氨試液=90 : 10的混合溶液10ml洗脫，收集洗脫液。
[0011] 本發明的一種附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：用薄層色譜法鑒別甘草：取檢 品研細，稱取0. 5~2. 5g，加乙醚40ml，加熱回流1小時，濾過，棄去醚液，藥渣加甲醇30ml， 加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合 并正丁醇液，用等體積水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為 供試品溶液；另取甘草對照藥材0. 5~1. 5g，同法制成對照藥材溶液；再取甘草苷對照品，加 甲醇制成每lml含1. 5~3mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述四種溶液各3~10y1，分別 點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正丁醇：濃氨試液：乙醇=5 : 2 :1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在l〇5°C加熱至斑點顯色清晰，置 365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同 顏色的熒光斑點，即確定是含有甘草的制劑。
[0012] 本發明的有益效果是：提供了系統適用性良好、簡便準確、專屬性強、耐用性好的 附甘藥物的鑒別方法。為相關監督管理部門在藥品的生產、流通、使用過程中提供了一種鑒 別真假、優劣的依據。
[0013] 為了更好的理解本發明，以下通過本發明鑒別方法的方法學研宄進一步說明本發 明的有益效果。方法學研宄旨在進一步說明本發明的作用，而非本發明的限制。
[0014] 一、制備樣品 1、制備附甘顆粒劑 取附子15kg，甘草6kg，加水煎煮兩次，第一次加8倍量水，煎煮2小時，第二次加6倍 量水，煎煮1小時，合并兩次煎液，濾過，濃縮、減壓干燥，粉碎，加入糊精適量，混勻，濕法制 粒，干燥，整粒，得附甘藥物的顆粒劑。
[0015] 2、制備不含附子的陰性顆粒劑 取甘草300g，照制備附甘顆粒劑的方法制成不含附子的陰性顆粒劑。
[0016] 3、制備不含甘草的陰性顆粒劑 取附子750g，照制備附甘顆粒劑的方法制成不含甘草的陰性顆粒劑。
[0017] 二、附子鑒別方法及方法學驗證 1、固相萃取柱系統適用性試驗 色譜條件與系統適用性試驗：以極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；以乙 腈：0. 14%的磷酸溶液=23 : 77為流動相；檢測波長為232nm。理論板數按苯甲酰新烏頭原 堿峰計算為13054。
[0018] 對照品溶液的制備取苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿對 照品適量，精密稱定，分別加乙腈制成每lml含0.2mg的溶液，作為對照品貯備液；分別精 密量取上述對照品貯備液各l〇ml、5ml和5ml，置同一 100ml的量瓶中，用0. 14%的磷酸溶液 稀釋至刻度，搖勻，作為固相萃取柱系統適用性試驗用對照品溶液。
[0019] 固相萃取柱系統適用性試驗：精密量取苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯 甲酰次烏頭原堿的對照品1C備液各l〇ml、5ml和5ml，混勾，室溫減壓回收至干，用0.lmol/L 鹽酸溶液適量溶解并定容至200ml，精密量取10ml，置于處理好的固相萃取柱（以混合型陽 離子交換反相吸附劑為填充劑，150mg，6ml，預先依次用乙腈、水各6ml洗脫）上，依次以水 3ml，1. 25%的氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脫，待洗脫液流盡后，放置5分鐘，再用乙腈： 濃氨試液=90 : 10的混合溶液10ml洗脫，收集洗脫液，于40°C以下減壓回收溶劑至干，殘 渣加入流動相5ml使溶解，濾過，取續濾液作為固相萃取柱系統適用性試驗溶液。
[0020] 分別精密吸取上述固相萃取柱系統適用性試驗溶液與對照品溶液各10~20y1，注 入液相色譜儀，測定。
[0021] 結果：固相萃取柱系統適用性試驗溶液中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯 甲酰次烏頭原堿峰面積分別是：