一種利用CdTe量子點定量檢測沙丁胺醇的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種利用CdTe量子點定量檢測沙丁胺醇的方法，屬于沙丁胺醇的檢 測領域。
【背景技術】
[0002] 沙丁胺醇屬于受體激動劑，能使動物體內的營養成分由脂肪向肌肉轉移，表 現出營養再分配效應，進而調控動物體的物質代謝，增強脂肪分解，促進蛋白質合成，顯著 提高胴體瘦肉率和飼料報酬。但是，β -受體激動劑易在動物組織，特別是內臟中蓄積殘留， 其通過食物鏈進入人體后可引發肌肉震顫、心律失常、頭痛等癥狀，嚴重者可能危及生命。 鑒于以上原因，我國已于1997年將沙丁胺醇、克倫特羅、萊克多巴胺等β-受體激動劑列為 禁止在飼料和養殖家畜飲用水中使用的藥品。但是，目前仍有養殖者將其違法使用在畜牧 業中，引發藥物殘留，從而對消費者健康造成嚴重損害。
[0003] 中國專利CN104251898公開了一種膜透析-液相色譜串聯質譜測定畜產品中多 種β-受體激動劑殘留的方法，具體步驟如下：（1)樣品前處理：準確稱取5g粉碎好的樣 品，加入20ml0. 02mol/L乙酸銨緩沖液（用乙酸調成pH4-5)，混勻，超聲20分鐘，8000轉 離心5分鐘，上清液移入透析袋中，將透析袋浸入盛有400-500ml0. 02mol/L乙酸銨緩沖液 (PH4-5)的棕色燒杯中，放入轉子，將燒杯置于磁力攪拌器上進行透析，攪拌轉速以杯內形 成渦旋帶動透析袋轉動，透析袋不下沉為準，杯外罩上不透明袋子，時間為6h。透析完成后 取出透析袋，將燒杯中的透析液調至pH至9-10,移入IL的梨形分流漏斗中，加入40ml溶 劑（環己烷：乙酸乙酯=4:1)，萃取2次，合并萃取液進行旋蒸，用0. 1 %甲酸水溶液（v/v) 定容成I. 0ml，供HPLC-MS/MS測定分析；（2)HPLC-MS/MS測定：采用外標法測定β -受體激 動劑的含量，液相色譜柱采用Thermo Hypersil Gold(2. ImmX IOOmrn, 3 μπι)，填料選自十八 烷基鍵合相硅膠，流動相為〇. 1 %甲酸水溶液A-乙腈Β，流速為0. 2ml/min，梯度洗脫條件 為：t = 0min，96% A，4% B ;t = 2min，96% A，4% B ;t = 5min，77% A，23% B ;t = 12min， 5% A,95% B ；t = 28min,44% A,56% B ；t = 24min,5% A,95% B ；t = 24. lmin,96% A, 4% B ;t = 32min，96% A，4% B ;質譜條件為：電噴霧電離源正離子掃描ESI+，多反應監測模 式MRM;電噴霧電壓：5. 5kV;離子源溫度：550°C，霧化氣壓力GSI :40psi ;輔助氣流速GS2 : 60psi，氣簾氣壓力CUR :40psi ;碰撞室入口電壓EP :10V ;碰撞室出口電壓CXP :13V，監測分 析物的離子對進行藥物殘留確證分析。
[0004] 上述方法先采用膜透析進行樣品前處理，之后再采用液相色譜串聯質譜測定畜產 品中多種β-受體激動劑，然而，上述檢測方法存在樣品前處理復雜、檢測過程繁瑣、分析 成本高、檢測周期長、儀器昂貴、難以操作等問題，難以進行現場操作，在實際應用中受到限 制。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的技術問題在于現有技術中采用液相色譜串聯質譜檢測畜產品 中β-受體激動劑時，存在樣品前處理復雜、檢測過程繁瑣、分析成本高、檢測周期長、儀 器昂貴、難以操作等問題，從而提出一種操作簡單、成本低并能夠實現快速測定沙丁胺醇的 CdTe熒光傳感器及其制備方法和應用。
[0006] 為解決上述技術問題，本發明的技術方案如下：
[0007] 一種用于沙丁胺醇檢測的CdTe量子點的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)分別稱取0· 12g-0. 13g碲粉和0· 07g-0. 09g硼氫化鈉，并加入l-2ml高純水， 在冰水浴條件下進行攪拌反應，即得透明的NaHTe溶液；
[0009] (2)稱取0. 1-0. 2gCdCl2 · 2. 5H20溶于200ml高純水中，再加入100 μ L巰基乙酸， 形成乳白色懸濁液體系；
[0010] ⑶先用〇· Imol · T1NaOH溶液調節所述懸濁液體系的pH為10-12,預充氮氣 3〇min，再在氮氣保護下加入步驟（1)所述的NaHTe溶液，控制Cd 2+、HIV、巰基乙酸的摩爾比 為0. 8-1. 0:0. 4-0. 5:1. 5-2. 5,即得褐色的CdTe量子點前驅體；
[0011] (4)將所述的CdTe量子點前驅體轉移至反應釜中，在140-160°C加熱5-60min，經 冷卻、洗滌、離心即得所述的CdTe量子點。
[0012] 一種利用所述的CdTe量子點定量檢測沙丁胺醇的方法，其包括如下步驟：
[0013] (a)制作Stern-Volmer曲線的線性回歸方程：
[0014] 配制一系列不同濃度的沙丁胺醇標準工作溶液，并將其分別移至5ml的比色管 中，向每個所述比色管中均加入I. 5ml濃度為I. 45X 10_3mol/L的CdTe溶液，用pH = 7. 4 的磷酸鹽緩沖溶液定容，搖勻后用分子熒光光度計檢測上述各個體系的熒光強度F ;同時， 取I. 5ml濃度為I. 45X 10_3mol/L的CdTe溶液加入到5ml的比色管中，用pH = 7. 4的磷酸 鹽緩沖溶液定容，搖勻后用分子熒光光度計檢測體系的熒光強度Ftl;
[0015] 以沙丁胺醇濃度為橫坐標，以FcZF為縱坐標，即得沙丁胺醇對CdTe量子點熒光淬 滅的Stern-Volmer曲線的線性回歸方程；
[0016] (b)分別取I. 5ml所述的CdTe溶液和含沙丁胺醇的樣品液加入到5ml的比色管 中，用pH = 7. 4的磷酸鹽緩沖溶液定容，搖勻使其充分反應后用分子熒光光度計檢測得到 體系的熒光強度，與Stern-Volmer曲線的線性回歸方程對照，即得所述樣品液中沙丁胺醇 的含量。
[0017] 步驟（a)和步驟（b)中，所述熒光強度的檢測條件均為：激發波長為365nm，激發 和發射狹縫寬度均為5nm。
[0018] 所述沙丁胺醇的標準工作溶液的濃度分別為0. 042X ΙΟ'Ο. 084X 10' 0· 126X 10-6、0· 168X 10-6、0· 210X 10-6、0· 252X 10-6、0· 420X 10-6、0· 630X 10-6、0· 84X 10' L 26Χ10_6、1· 68Χ10_6、2· 10X10_6mol/L。
[0019] 所述Stern-Vo Imer曲線的線性回歸方程分為兩部分，所述沙丁胺醇的濃度 范圍為0. 042 X KT6-O. 420 X KT6時，所述的Stern-Volmer曲線的線性回歸方程為 0. 8428 X 106C+1. 0434,線性相關系數為 0. 976 ;
[0020] 所述沙丁胺醇的濃度范圍為 0· 420 X lCT6-2. IOX lCT6mol/L 時，Stern-Volmer 曲線 的線性回歸方程為FcZF = 0. 1491 X 106C+1. 3078,線性相關系數為0.999。
[0021] 所述含沙丁胺醇的樣品液為豬尿。
[0022] 所述豬尿經過如下預處理：
[0023] 取豬尿樣品液，用NaOH溶液調節pH為7. 0,過濾并將收集濾液，即得待測樣品液。
[0024] 本發明的上述技術方案相比現有技術具有以下優點：
[0025] (1)本發明所述的利用CdTe量子點定量檢測沙丁胺醇的方法，通過將表面修飾 巰基乙酸的CdTe量子點與待測物質沙丁胺醇在磷酸鹽緩沖液進行混合均勻，之后采用分 子熒光光度計對體系的熒光強度檢測，即可實現對沙丁胺醇的痕量檢測，這是由于在弱堿 性的溶液體系中，表面修飾了帶負電的羧基的CdTe量子點與帶正電荷的目標分子沙丁胺 醇通過靜電相互作用形成新的復合體系，造成熒光淬滅，從而利用CdTe量子點熒光強度的 改變，實現對沙丁胺醇的定量檢測，結果顯示，沙丁胺醇在〇. 042 X KT6-O. 420 X l(T6m〇l/L 的范圍內和0. 420X 10-6-2. 09X l(T6m〇l/L的范圍內，沙丁胺醇的濃度與相對熒光強度Ftl/ F均呈現良好的線性關系，線性相關系數分別高達0. 976和0. 999,從而說明沙丁胺醇對 CdTe量子點的熒光淬滅具有較高的靈敏度和較寬的線性范圍，本發明所述的利用CdTe量 子點定量檢測沙丁胺醇的方法，實驗操作非常簡單，檢測時間短，分析成本低，檢出限較低 為2X 10_8mol/L，加標回收率較高為86. 6% -95. 8%，能夠有效避免現有技術中采用液相色 譜串聯質譜檢測畜產品中β -受體激動劑時，存在樣品前處理復雜、檢測過程繁瑣、分析成 本高、檢測周期長、儀器昂貴、難以操作等問題。
[0026] (2)本發明所述的CdTe量子點定量檢測豬尿中沙丁胺醇的方法，還對所述豬尿進 行預處理，以有效去除豬尿樣品中金屬離子的干擾。
【附圖說明】
[0027] 為了使本發明的內容更容易被清楚的理解，