一種體外評價卷煙及煙草安全性的方法【
技術領域：
】[0001]本發明涉及一種體外評價卷煙及煙草安全性的方法。具體是運用含硫氧還蛋白還原酶(TrxR)活力的溶液，通過檢測不同卷煙及煙草制成的煙氣水提取液(CSE)對TrxR活力的抑制能力，以CSE在340nm處的吸光度值OD34tol作為定量基礎，評價卷煙及煙草安全性的方法。【
背景技術：
】[0002]現代醫學研宄有足夠證據證明吸煙有害健康，而煙氣水提取液CSE也已被廣泛用于研宄煙氣毒理機制(參見文獻1-5)。CSE中含有焦油、煙堿和醛類等4800種已經確定的物質，其中醛類包括乙醛、甲醛和不飽和醛類，不飽和醛類中的丙烯醛和丁稀醛是危害性最大的幾種物質之一。丙烯醛等不飽和醛類是高活潑的親電子化合物，易與親核體發生親核加成反應。研宄表明丙烯醛是卷煙煙氣導致細胞毒性的主要貢獻者(參見文獻6);另外，丙烯醛可增加煙氣中苯丙芘等致癌物誘發癌癥的風險(參見文獻7)。[0003]硫氧還蛋白還原酶TrxR是一種二聚體含砸酶，TrxR的砸半胱氨酸(Sec)對于TrxR催化活性至關重要，它是半胱氨酸的類似物，它的pKa(?5.2)遠低于半胱氨酸的PKa(?8.3)，因此Sec在生理pH時處于非質子化的砸醇鹽狀態，這使它具有極高的親核活力。TrxR在脫氧核苷酸的形成過程中發揮著關鍵作用，是DNA合成和細胞增殖過程中必不可少的物質，同時TrxR具有抑制細胞凋亡、提高轉錄因子的活性等多種生物功能(參見文獻8)。TrxR活力被抑制可導致組織損傷等后果(參見文獻9和10)。[0004]煙氣中的丙烯醛作為活潑的親電子化合物，也已被證實可與含Sec的TrxR結合，抑制TrxR活力(參見文獻11)。[0005]當前對卷煙危害的評價主要依賴成分分析和生物檢測。成分分析在卷煙工業中已廣泛應用，但由于煙氣成分復雜，不同有害物在降焦減害的實踐中此消彼漲，依賴于幾類物質的評價有一定局限性。利用細胞和動物實驗方法評價卷煙安全性周期長，在低危害卷煙研發過程中實用性低。[0006]因此，發展低危害卷煙需要一種即時、迅速、高通量對卷煙及煙草安全性進行評價的手段。[0007]參考文獻:[0008]1.KosmiderB,MessierEMjChuHWjet.Epub2011Dec7.Humanalveolarepithelialcellinjuryinducedbycigarettesmoke.PLoSOne.2011；6(12).[0009]2.ZhuLjBarrettEC,XuY，et.Regulat1nofCigaretteSmoke(CS)-1nducedAutophagybyNrf2.PLoSOne.2013Apr9；8(4).[0010]3.BagloleCJ，SimePJ，PhippsRP.Cigarettesmoke-1nducedexpress1nofhemeoxygenase-1inhumanlungfibroblastsisregulatedbyintracellularglutath1ne.AmJPhys1lLungCellMolPhys1l.20080ct；295(4).[0011]4.YagetaY，IshiiYjMorishimaYjet.Mar2.RoleofNrf2inhostdefenseagainstinfluenzavirusincigarettesmoke-exposedmice.JVirol.2011May；85(10).[0012]5.BertramKMjBagloleCJ，PhippsRPjrt.Molecularregulat1nofcigarettesmokeinduced-oxidativestressinhumanretinalpigmentepithelialcells:1mplicat1nsforage-relatedmaculardegenerat1n.AmJPhys1lCellPhys1l.2009Nov；297(5).[0013]6.NoyaY，SekiK，AsanoH，et.Epub2013Aug24.1dentificat1nofstablecytotoxicfactorsinthegasphaseextractofcigarettesmokeandpharmacologicalcharacterizat1noftheircytotoxicity.Toxicology.2013Dec6；314(1):1-10.[0014]7.FengZ，HuWjHuY，TangMS.Acroleinisamajorcigarette-relatedlungcanceragent:Preferentialbindingatp53mutat1nalhotspotsandinhibit1nofDNArepair.ProcNatlAcadSciUSA.2006，103:15404-15409[0015]8.HolmgrenA，LuJ.Th1redoxinandth1redoxinreductase:currentresearchwithspecialreferencetohumandisease.B1chemB1physResCommun.2010May21；396(I):120-4.[0016]9.WangX，ZhangJ，XuT.Th1redoxinreductaseinactivat1nasapivotalmechanismofifosfamideincancertherapy.EurJPharmacol.2008Jan28；579(1-3):66-73.[0017]10.ZhangJ，LuH.1fosfamideinducesacuterenalfailureviainhibit1noftheth1redoxinreductaseactivity.FreeRadicB1lMed.2007Dec15；43(12):1574-83.[0018]11.ZhangJljLuH.RandallMJ，SpiessPC,HristovaM.Acrolein-1nducedactivat1nofmitogen-activatedproteinkinasesignalingismediatedbyalkylat1nofth1redoxinreductaseandth1redoxin1.RedoxB1l2013，1:265-275.[0019]12.A.D.Smith,0.A.LevanderjHigh-throughput96-wellmicroplateassaysfordeterminingspecificactivitiesofglutath1neperoxidaseandth1redoxinreductase,MethodsEnzymo1.347(2002)113-121.[0020]13.E.S.ArnerjA.Holmgren,Measurementofth1redoxinandth1redoxinreductase,in:M.MainesjL.Costa,D.Reed,S.Sassa(Eds.)，CurrentProtocolsinToxicology,JohnWiley&Sons,Inc.，NewYork,2000，pp.7.4.1-7.4.14.【
發明內容】[0021]本發明的目的是提供一種可即時、迅速、高通量的體外評價卷煙及煙草安全性的方法。[0022]本發明解決技術問題，采用如下技術方案:[0023]本當前第1頁1 2 3