乙醇基體標準物質及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及計量測試的量值傳遞領域，特別涉及乙醇基體標準物質及其制備方 法。
【背景技術】
[0002] 2008年世界衛生組織的事故調查顯示，大約50% -60%的交通事故與酒后駕駛有 關，酒后駕駛已經被列為車禍致死的主要原因。當乙醇在人體血液內達到一定濃度時，人對 外界的反應能力及控制能力就會下降，處理緊急情況的能力也隨之下降。對于酒后駕車者 而言，其血液中乙醇濃度越高,發生交通事故的幾率越大。
[0003] 根據國家質量監督檢驗檢疫局發布的《車輛駕駛人員血液、呼氣酒精含量閾值 與檢驗》（GB19522-2004)中規定，駕駛員血液中的乙醇濃度大于等于20mg/100ml，小于 80mg/100ml時，屬于飲酒駕駛。駕駛員血液中的乙醇濃度大于等于80mg/100ml時屬于醉酒 駕駛。《中華人民共和國道路交通安全法》最新規定，飲酒駕駛處以暫扣駕駛證、罰款等行政 處罰，而醉酒駕駛嚴重得多，不但吊銷駕駛證，還要依法追究刑事責任。因此準確測定血液 中的乙醇濃度，特別是在接近法律規定的臨界值時，顯得尤為重要。
[0004] 對于血液中乙醇濃度的測定方法，主要有醇脫氫酶氧化法、色譜法或免疫測定方 法等，目前最準確的方法是頂空進樣-氣相色譜法，這也是進行司法鑒定時采用的標準方 法。
[0005] 標準物質Reference Material (RM):是一種已經確定了具有一個或多個足夠均勻 的特性值的物質或材料，作為分析測量行業中的"量具"，在校準測量儀器和裝置、評價測量 分析方法、測量物質或材料特性值和考核分析人員的操作技術水平，以及在生產過程中產 品的質量控制等領域起著不可或缺的作用。標準物質的制備途徑主要有：人工合成、自然界 物質提純、人或動物組織來源提純品或者基因工程重組標準物質。作為質控物質，最好選用 天然的物質，與待測標本具有盡可能的相似性，否則將不具有充分的代表性。但是針對血液 酒精檢測項目，目前國內沒有基體標準物質，因此司法鑒定實驗室在進行相關檢測時，所用 的標準物質是乙醇純度標準物質，該物質與待測標本相似性不夠，并不具有充分的代表性。 另外，人血液樣品獲得的難度大、成本高，難以保證標準物質的復制，因此，本領域亟需一種 乙醇基體標準物質，其中的血液樣品容易獲取、成本低，且該標準物質穩定性好，以有效地 解決上述技術難題。
【發明內容】
[0006] 本發明所要解決的技術問題是為了克服現有技術中針對血液酒精的檢測使用的 標準物質均是乙醇純度標準物質，該物質與待測標本相似性不夠，并不具有充分的代表性， 且目前尚無乙醇基體標準物質的缺陷，而提供了一種乙醇基體標準物質及其制備方法。本 發明的乙醇基體標準物質的基體更加接近實際樣品，具有很好的基體代表性，能夠保證血 液酒精檢測項目更好的量值溯源，解決基體效應引起的檢測結果差異問題，結果更加可靠 和可比，提高量值溯源水平，為酒駕案件的處罰判決提供依據，并且該乙醇基體標準物質中 的血液樣品容易獲得，成本低，另外，本發明的乙醇基體標準物質的穩定性好，可在-20°C下 長期保存。
[0007] 本發明通過以下技術方案解決上述技術問題：
[0008] 本發明的目的之一在于：提供一種乙醇基體標準物質的制備方法，其包括以下步 驟：
[0009] 將同一頭牛的牛血與抗凝劑混合均勻得基體牛血，分別向5份所述的基體牛血中 添加乙醇至量值水平，混合均勻，即得乙醇基體標準物質；其中，所述的量值水平為乙醇基 體標準物質中乙醇濃度，所述的乙醇濃度以mg/100mL計分別為XI、X2、X3、X4和X5,其中 XI = 0 ~15, X2 = 10 ~40, X3 = 30 ~70, X4 = 60 ~100, X5 = 80 ~120,且滿足以下 條件:X1 < X2 < X3 < X4 < X5。
[0010] 本發明中，以mg/100mL計，所述的量值水平較佳地為：X1 = 0~2、X2 = 15~25、 X3 = 35 ~45、X4 = 75 ~85 和 X5 = 85 ~95 ;更佳地為 XI < 0? 2、X2 = 20. 0、X3 = 40. 0、 X4 = 80. 0 和 X5 = 90. 0。
[0011] 本發明中，所述的牛血為本領域常規的健康且新鮮的牛血，其離體時間小于72小 時，乙醇殘余量一般要求為小于0. 2mg/100mL。所述的牛血中的乙醇殘余量的檢測方法為本 領域常規方法，較佳地為頂空進樣_氣相色譜法。本發明之所以選擇同一頭牛的牛血，其原 因在于：經實驗發現，將不同牛的牛血混合后制得的乙醇基體標準物質，其中的乙醇在一周 內幾乎全部降解。
[0012] 本發明中，所述的抗凝劑為本領域常規的抗凝劑；所述的抗凝劑較佳地為乙二胺 四乙酸二鈉。本發明中，所述的抗凝劑一般以溶液的形式與牛血混合。所述的抗凝劑溶液 的配置方法一般為：將抗凝劑與生理鹽水混合均勻，即可。所述的抗凝劑與生理鹽水的質量 體積比較佳地為〇.〇15g/mL。所述的抗凝劑的添加量為本領域常規的添加量，所述的抗凝劑 的添加量較佳地為每升牛血中添加1~2g抗凝劑，更佳地為每升牛血中添加1~1. 5g抗 凝劑。所述的抗凝劑一般經高壓滅菌處理后再使用。所述的高壓滅菌的條件可為本領域常 規的條件，其中，所述的高壓滅菌的溫度較佳地為121°C ;所述的高壓滅菌的時間較佳地為 25min~35min，更佳地為30min ;所述高壓滅菌的壓力較佳地為0? 122MPa。
[0013] 本發明中，所述的將牛血與抗凝劑混合均勻的方法為本領域常規的方法，所述的 將牛血與抗凝劑混合均勻的方法較佳地為晃動容納牛血與抗凝劑的容器，即可。所述的將 牛血與抗凝劑混合均勻的時間較佳地為3~lOmin，更佳地為5min。所述的基體牛血中的 乙醇殘余量一般要求為小于〇. 2mg/100mL。所述的基體牛血中的乙醇殘余量的檢測方法為 本領域常規方法，較佳地為頂空進樣_氣相色譜法。
[0014] 本發明中，所述的乙醇在使用時的用料純度較佳地為乙醇標準物質，所述的乙醇 標準物質較佳地為有證乙醇標準物質，即乙醇純度標準物質（純度99. 8%，GBW06112)。
[0015] 本發明中，在制得乙醇基體標準物質后，較佳地置于-20°C下保存。
[0016] 本發明中，在制得乙醇基體標準物質后，較佳地還可進一步包括下列操作：乙醇基 體標準物質的定值，均勻性檢測和分裝。所述的乙醇基體標準物質的定值，即準確確定乙醇 基體標準物質中的乙醇的濃度。所述的乙醇基體標準物質的定值的方法為本領域常規的方 法，較佳地包括以下步驟：取乙醇標準工作溶液0. 50mL，至10mL頂空進樣瓶中，加入100uL 內標叔丁醇標準溶液，加蓋鋁蓋后用密封鉗加封；混勻，置頂空進樣器中70°C加熱lOmin 待測；根據被測物與內標的峰面積比值繪制標準曲線，乙醇標準工作溶液每個濃度重復2 次，取平均值，得標準曲線1 ;根據標準曲線1，測定乙醇基體標準物質中的乙醇濃度；乙醇 基體標準物質中，同一量值水平取3份樣品進行檢測，每份樣品檢測2次，將6次結果，取 平均值，即為乙醇基體標準物質中的乙醇濃度。其中，所述的乙醇標準工作溶液的制備方 法可為本領域常規的方法，較佳地包括下列步驟：（1)配置濃度為8000mg/100mL乙醇儲備 液；⑵將所述的乙醇儲備液用水稀釋配制成濃度為2mg/100mL、20mg/100mL、40mg/100mL、 8Omg/10OmL、16Omg/10OmL的乙醇標準工作溶液。所述的叔丁醇標準溶液的制備方法可為本 領域常規的制備方法。所述的叔丁醇標準溶液的濃度較佳地為200mg/100mL。
[0017] 所述的均勻性檢測的方法為本領域常規的方法；較佳地為：隨機取7份乙醇基體 標準物質，檢測乙醇基體標準物質中乙醇濃度，再以方差檢驗法對乙醇基體標準物質進行 均勻性檢驗。
[0018] 所述的分裝的方法為本領域常規的方法。所述的分裝較佳地為使用滴管、移液管、 瓶口分液器或移液器分裝；所述的分裝更佳地為使用3mL的一次性無菌滴管分裝。本發明 中，所述的分裝后較佳地于-20°C保存。
[0019] 本發明的目的之二在于，提供如上所述的乙醇基體標準物質的制備方法制得的乙 醇基體標準物質。
[0020] 本發明中，所述的水若無特殊說明，一般為超純水。所述的室溫一般為10~30°C。
[0021] 在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實 例。
[0022] 本發明所用試劑和原料均市售可得。
[0023] 本發明的積極進步效果在于：本發明首次公開了乙醇血液基體標準物質及其制備 方法。本發明的乙醇基體標準物質的基體更加接近實際樣品，具有很好的基體代表性，能夠 保證血液酒精檢測項目更好的量值溯源，解決基體效應引起的檢測結果差異問題，結果更 加可靠和可比，提高量