一種病理組織透明脫蠟液及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于病理學組織切片技術領域，具體涉及一種病理組織透明脫蠟液及其制備方法與應用。
【背景技術】
[0002]目前，絕大多數病理組織切片的制作過程仍采用傳統的石蠟切片制作技術，其過程包括固定、脫水、第一次透明、浸蠟、切片、脫蠟、染色、第二次透明、封片等步驟的處理才能完成病理切片的制作。其中，第一次透明是指通過透明液的媒介作用，而達到石蠟浸入組織塊的目的，這一過程中，組織塊中的親水組分被透明液取代，使得組織塊變得透亮；而脫蠟是指組織切片染色前須通過脫蠟液溶解切片中的石蠟，以使染料易于浸入組織和細胞的操作；第二次透明是指組織切片經過染色、脫水后必須經透明液處理，使切片透明，以利于光線透過，才能封片，否則在顯微鏡下組織結構模糊不清，這是第二次透明。透明、脫蠟效果的好壞直接影響到石蠟制片的質量。在病理組織切片的制作過程中，組織的透明和切片染色前后的脫蠟、透明三個環節，需要大量透明脫蠟試劑。
[0003]目前最常用的組織透明脫蠟液主要是二甲苯，二甲苯在病理科手工制片、自動脫水機及自動染色機上均大量使用。雖然二甲苯具有良好的脫蠟和透明效果，但是由于二甲苯屬于具有強烈刺激性氣味的神經毒素，其毒性主要是對中樞神經和植物神經的麻醉及粘膜的刺激作用，對長期接觸的人員生理系統具有選擇性的特殊傷害，產生靶器官效應，可出現眼及上呼吸道明顯的刺激癥狀、眼結膜及咽充血、頭暈、惡心、嘔吐、胸悶、四肢無力、意識模糊等癥狀，此外，還可引起免疫功能低下、貧血、皮炎、濕疹和皮膚干燥等癥狀，對病理工作人員的身體健康產生嚴重危害和造成環境污染，二甲苯引起的健康損害已列入了我國職業病中毒范圍，而且在病理組織處理過程中，使用二甲苯容易使得病理組織收縮、硬化變脆，因此，為了相關實驗人員的身體健康，二甲苯并不適宜用于人體、動物組織病理切片制備過程中的透明、脫蠟之用。
[0004]雖然現有技術中存在以松節油為主要成分的脫蠟液作為二甲苯脫蠟液的替代品，其具有一定透明脫蠟效果，但松節油自身難聞的異味依然難以讓人接受，加上松節油自然資源的枯竭，這一僅有少量應用的替代品已基本退出病理組織切片制作行業；硬脂酸也曾經被用于透明脫蠟，但因其容易脫片、切片透明欠佳、長期存放蠟塊組織收縮等原因沒有得到廣泛應用。
【發明內容】
[0005]為此，本發明所要解決的技術問題在于現有技術中病理組織透明脫蠟液有毒及有刺激性氣味，長時間浸泡組織會使組織變脆和收縮不利切片，進而提供一種無毒、無刺激性氣味且長時間浸泡組織不會使組織變脆和收縮的病理組織透明脫蠟液及其制備方法與應用。
[0006]為解決上述技術問題，本發明的病理組織透明脫蠟液，包括如下重量份的組分:高度支鏈飽和烷烴92.5-98重量份、穩定劑0.5-5重量份和增效劑0.1-2.5重量份。
[0007]優選的，所述病理組織透明脫蠟液包括如下重量份的組分:高度支鏈飽和烷烴為95-97重量份、穩定劑2-3重量份和增效劑1-2重量份。
[0008]優選的，所述高度支鏈飽和烷烴為環烷油、四環庚烷、順-1-異丙基-4-甲基環己烷、反-1-異丙基-4-甲基環己烷中的一種或幾種的混合物；
[0009]優選的，所述的穩定劑為環氧大豆油、三羥甲基丙烷、環氧硬脂酸丁酯中的一種或幾種的混合物；
[0010]優選的，所述的增效劑為聚醚改性七甲基三硅氧烷(CAS:27306-78-1)、丁基醚聚二甲基硅氧烷(CAS: 67762-87-2)、二甲基-3-羥丙基甲基(硅氧烷與聚硅氧烷)(CAS: 117272-76-1)中的一種或幾種的混合物。
[0011]在上述的病理組織透明脫蠟液中，所述病理組織透明脫蠟液組成為:
[0012]環烷油98重量份、環氧大豆油0.5重量份、聚醚改性七甲基三硅氧烷1.5重量份；或
[0013]四環庚烷94.9重量份、三羥甲基丙烷5重量份、丁基醚聚二甲基硅氧烷0.1重量份；或
[0014]順-1-異丙基-4-甲基環己烷92.5重量份、環氧硬脂酸丁酯5重量份、二甲基-3-羥丙基甲基(硅氧烷與聚硅氧烷)2.5重量份；或
[0015]反-1-異丙基-4-甲基環己烷97.5重量份、環氧硬脂酸丁酯0.5重量份、二甲基-3-羥丙基甲基(硅氧烷與聚硅氧烷)2重量份；或
[0016]環烷油96重量份、環氧硬脂酸丁酯3.5重量份、丁基醚聚二甲基硅氧烷0.5重量份。
[0017]一種制備上述病理組織透明脫蠟液的方法，包括按照選定的重量份取所述高度支鏈飽和烷烴、穩定劑和增效劑，在室溫至60°C進行調和的步驟。
[0018]上述病理組織透明脫蠟液在制作病理學組織切片技術領域的應用。
[0019]一種病理組織石蠟切片的制作方法，包括以上述的病理組織透明脫蠟液對病理組織進行第一次透明、脫蠟和第二次透明的步驟。
[0020]在上述的病理組織石蠟切片的制作方法中，所述脫蠟步驟具體為:將處理好的病理組織石蠟切片放入所述的病理組織透明脫蠟液中，于20-28°C溫度下恒溫浸泡10-15分鐘，重復浸泡2次；
[0021]在上述的病理組織石蠟切片的制作方法中，所述的第一次透明的具體步驟:將酒精脫水后的病理組織放入所述的病理組織透明脫蠟液中，于32-37°C溫度下恒溫浸泡40-50分鐘，優選45分鐘，重復浸泡I次；
[0022]所述的第二次透明的具體步驟:將酒精脫水后的病理組織放入所述的病理組織透明脫蠟液中，于20-28°C溫度下恒溫浸泡2-5分鐘，優選3分鐘，重復浸泡2次。
[0023]本發明的上述技術方案相比現有技術具有以下優點:
[0024](I)本發明所述的病理組織透明脫蠟液，包括高度支鏈飽和烷烴92.5-98重量份、穩定劑0.5-5重量份和增效劑0.1-2.5重量份；本發明所述的病理組織透明脫蠟液無毒，無刺激性氣味，并且本發明的病理組織透明脫蠟液既能用于透明，又能用于脫蠟，與二甲苯的透明、脫蠟效果相當，是臨床上二甲苯的理想替代品；
[0025](2)本發明所述的病理組織透明脫蠟液，通過篩選得到的所述高度支鏈飽和烷烴為環烷油、四環庚烷、順-1-異丙基-4-甲基環己烷、反-1-異丙基-4-甲基環己烷；所述的穩定劑為環氧大豆油、三羥甲基丙烷、環氧硬脂酸丁酯；所述的增效劑為聚醚改性七甲基三硅氧烷、丁基醚聚二甲基硅氧烷、二甲基-3-羥丙基甲基；使得本發明的病理組織透明脫蠟液無毒、無刺激性氣味，經小鼠急性毒性灌胃劑量32000mg/kg體重，優于世界衛生組織的產品微毒標準(5000mg/kg)，且通過實驗例可知，本發明的病理組織透明脫蠟液與二甲苯的透明脫蠟效果相當，且本發明的病理組織透明脫蠟液可以長時間浸泡病理組織，不會使組織變脆和收縮，能增強浸蠟效果，有利于切片，在潮濕的環境中可以正常使用；
[0026](3)本發明所述的病理組織透明脫蠟液，通過調整高度支鏈飽和烷烴、穩定劑和增效劑的添加量，獲得病理組織的透明脫蠟效果更顯著，組織細胞結構清晰、背景對比度高，可長期存放，對組織抗原無影響，可適用于臨床制作病理學組織切片；
[0027](4)本發明所述的病理組織透明脫蠟液對病理組織進行第一次透明、脫蠟和第二次透明的操作，并篩選了適宜使用的浸泡溫度和浸泡時間，獲得了組織細胞結構清晰、背景對比度高的顯著技術效果。
[0028]實驗例I
[0029]以下通過實驗例更好地說明本發明與現有技術中的透明脫蠟液二甲苯相比透明、脫蠟效果基本相同，且本發明的透明脫蠟液具有無毒、無刺激性氣味的顯著技術效果。
[0030]1.實驗材料
[0031]實驗材料:子宮肌瘤平滑肌組織和腸上皮生化組織。
[0032]實驗試劑:試驗組的透明脫蠟液為本實施例1中制備的透明脫蠟液；對照組的透明脫蠟液為二甲苯。
[0033]2.實驗方法及結果:
[0034]2.1實驗方法
[0035]試驗組和對照組均按照常規方法將上述病理組織制作成石蠟切片，區別僅在于試驗組所采用的透明脫蠟液及石蠟切片制作過程中的第一次透明、脫蠟、第二次透明步驟為本發明實施例1制備的病理組織透明脫蠟液及實施例1的石蠟切片的制作過程中的第一次透明、脫蠟、第二次透明的步驟，所述第一次透明的步驟為:將酒精脫水后的病理組織放入所述病理組織透明脫蠟液中，于32°c溫度下恒溫浸泡45分鐘，重復浸泡I次；所述脫蠟步驟為:將處理好的病理組織石蠟切片放入所述的病理組織透明脫蠟液中，于28°C溫度下恒溫浸泡10分鐘，重復浸泡2次；所述第二次透明的步驟為:將酒精脫水后的病理組織放入所述的病理組織透明脫蠟液中，于20°C溫度下恒溫浸泡3分鐘，重復浸泡2次。
[0036]2.2 結果
[0037]2.2.1對子宮肌瘤平滑肌組織的觀察
[0038]將試驗組制作的子宮肌瘤平滑肌組織石蠟切片和對照組制作的子宮肌瘤平滑肌組織石蠟切片比較發現，試驗組與對照組相比透明、脫蠟效果基本相同，如試驗組用本發明實