癌癥尿液檢測試劑的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種臨床診斷用的體外檢測試劑，具體涉及一種癌癥尿液檢測試劑。
【背景技術】
[0002]近年來，全世界腫瘤疾病的發病率呈不斷上升趨勢，據美國癌癥學會(AmericanCancer Society)對世界范圍癌癥的統計數據顯示，從2008年至2030年，全球新增癌癥人數將從每年的1270萬增至2140萬，癌癥死亡人數將由760萬上升至1320萬人。與此同時，我國近年的統計資料表明，預計2020年中國癌癥新發病例將達349萬，因惡性腫瘤而死亡的人數將達263萬，較2002年上升60%。由此可見，無論在發達國家還是發展中國家，惡性腫瘤(癌癥)均已取代心血管病成為死亡人數最多的疾病。由于癌癥發病隱匿、進展快、惡性程度高，因此，“早期發現、早期診斷、早期治療”仍是降低癌癥死亡率最主要的措施。
[0003]目前診斷癌癥的方法，基本上是通過特異性不高且操作費時的方法，現在普遍采用的確診手段有CT、B趣.核磁共振、細胞學檢查等，這些手段都直接與人體聯系，或價格昂貴、復雜、痛苦且損傷身體的物理學和病理學檢查。這些都是早期(特別是無癥狀期)人們不易接受的，因而，不能及時檢查或不便多次檢測，不能及時發現和早期發現惡性腫瘤，延誤了早期根治性手術和治療的機會。因此，開展區域性防癌普查，能夠發現早期癌癥病人，對提高癌癥患者的生存率是很重要的。故癌癥早期篩查技術已成為世界各國關注的熱點。鑒于此，研制一種既適合腫瘤普查又適合腫瘤篩查的無創性測試劑和檢測方法已是當務之急O
[0004]由于腫瘤標志物對腫瘤的診斷、分類、預后判斷以及治療有重要的指導意義，因此，對于腫瘤標志物的研究得到了國內外學者的廣泛關注，尿中腫瘤標志物的檢測是目前研究的熱點之一。
[0005]尿中腫瘤標志物主要分兩大類:一類是特異性蛋白質，如本一周氏蛋白、硫酸酯酶等；另一類則是腫瘤代謝產物，如核酸代謝產物多胺、含巰基化合物、氨基酸代謝產物5-羥吲哚乙酸、對羥基苯丙銅酸等。對后者的檢測方法很多，其中包括含汞試劑，最近的相關技術專利為《用于檢測人體尿液中酪氨酸類酚代謝物的試劑盒》CN102004103B (申請號:201010505793.4)和《對羥基苯丙氨酸尿液檢測試劑及其制備方法》CN103323452B (申請號:201310247724.1)。它們分別提出了較為實用的含汞尿檢試劑配方，其共同點是均采用了兩種汞離子Hg+與Hg2+，將二者按一定比例溶解在酸性溶液中，穩定劑的Ni2+，即得專利所述試劑。該試劑中的兩種汞離子分別與尿中的不同成分反應，Hg+與底物單羥酚類代謝物反應生成紅色沉淀，Hg2+與無機鹽(其他陰離子反應如Cl-、N02-等)生成白色沉淀。CN102004103B (申請號:201010505793.4)發明原理是將該試劑中的汞鹽與患者酪氨酸及代謝酚類物反應生成紅色沉淀物。CN 103323452 B (專利申請號201310247724.1 )本發明原理是將該試劑汞鹽與患者尿中酪氨酸、色氨酸及其衍生物及含有此類氨基酸殘基的變性蛋白反應生成具特異性的紅色沉淀物。
[0006]上述專利的發明原理相同，即:被測者處于癌前病變及癌癥早中期時，細胞的異常增殖引發應激反應，導致人體內氨基酸代謝異常，尿液中單羥酚類代謝物(如色氨酸、酪氨酸及其代謝衍生物)含量遠遠超過正常人。基于米倫試劑而改進的檢測試劑與尿液中單羥酚類代謝物發生具特異性顏色的沉淀反應，從而判斷惡性腫瘤發生的可能性。
[0007]上述專利所提供的試劑，在應用中有一定效果，特異性、靈敏度較高，但仍有不足之處。由于該方法在反應離子與其溶解的溶解之間、反應離子之間等方面存在的問題，以及尿樣的顏色、尿中所含蛋白及無機鹽干擾，致使利用所給條件進行重復實驗時，其方法、效果均不太穩定，檢測試劑在腫瘤的普查篩檢應用中，還有待于進一步改進，以提高靈敏度和特異度，減少漏檢率。
【發明內容】
[0008]本發明的目的在于克服已有技術存在的問題，研制一種適用于臨床應用的，穩定性優良的，檢測靈敏度和特異度高、漏檢率低的癌癥尿液檢測試劑，該試劑生產成本低，工藝簡單，只要將試液滴入被檢者的尿液中，即可用肉眼從顏色判斷出被檢者是健康者還是癌癥患者，或其他疾病患者。檢測快速、準確、簡便。
[0009]本發明的目的采用如下方案實現:
對已有技術的癌癥尿檢比色方法加以改進，克服癌癥尿檢試劑的缺點，發明一種新的配方。
[0010]一、該尿液檢測試劑的制備方法包括以下步驟
A溶液制備:稱取碘2-3g，加入10ml蒸餾水中，待溶解后，定容至250ml;
B溶液制備:稱取碘化鉀40-60g，加入10ml蒸餾水中，待溶解后，定容至250ml;
C溶液制備:稱取氯化汞3-6g，加入10ml蒸餾水中，待溶解后，緩慢向內加入60_80ml12N硫酸,而后加蒸懼水至500ml ；
將A溶液、B溶液和C溶液按體積比1: 0.8?1.5: 1.0?1.5進行混合后，即得到目標產品癌癥尿液檢測試劑。
[0011]二、檢測方法
本試劑為目測比色試劑，不受響尿樣的顏色、尿中所含蛋白及無機鹽干擾，試劑滴入尿液后，立即出現沉淀，根據沉淀的有無和沉淀的顏色即可判斷被檢測者是否患有癌癥，其具體檢測方法如下:
取3天禁食高蛋白食物、中西藥物后的新鮮晨尿5ml，加入癌癥相關因子尿液檢測試劑0.5ml,振勻后靜置5-15分鐘,觀察沉淀的有無和沉淀的顏色。
[0012]判斷標準:與標準色板對照做出判斷:沉淀物呈微白色、黃色者為陰性；沉淀呈紅色球、灰紅色球狀、草綠色球狀、紅色球狀者為陽性；沉淀呈乳白色并直接沉入管底者為急、慢性腎炎、囊腫或良性腫瘤。
[0013]在使用中，本試劑對幾種特殊尿液，呈現的顏色不同，應予以注意:
靜脈注射葡萄糖后的尿液呈乳白色，口服利福平后的尿液呈桔紅色的渾濁物等，這都為假陽性，為此特要求所用的尿液必須為在口服中西藥或注射藥物24小時后的尿液。
[0014]癌癥經手術、化療、放療等治療好轉后，亦呈陰性反映。
[0015]本試劑用于病情檢測時，可用上述方法連續定期監測，在此過程中如出現由陰性反應轉為陽性反應，則提示癌癥的復發或轉移。
[0016]本試劑用于療效評價時,可在某治療前后進行檢測,如治療后仍為陽性,則為療效不明顯，如在治療前為陽性反應，轉為治療后的陰性，則說明效果的有效性。
[0017]本發明依據的理論基礎是:
1、致癌因素(物理因索、化學因索、病毒因素和其它因素等)引起細胞畸變，使癌細胞代謝旺盛造成某些物質成分激增。雖然這些特殊成分的質和量隨不同部位類型的癌細胞而異，但仍有其共性，這些與癌變相關的因子統稱為惡性腫瘤相關因子(CAR)，可隨尿液排出體外，并可與某些離子發生絡合反應，形成具有特異性顏色的有色絡合物。
[0018]2、具體的表現為當受檢者體內有癌細胞活動時，細胞的異常增殖引發應激反應，