一種ABO正反定型及RhD血型檢測卡的制作方法
【專利說明】—種ABO正反定型及RhD血型檢測卡
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技術領域
[0002]本發明涉及醫學領域，尤其涉及一種ABO正、反定型及RhD血型檢測卡。
[0003]
【背景技術】
[0004]人類紅細胞膜上存在很多血型抗原系統，其中以ABO血型抗原系統最重要，Rh血型抗原系統次之。這是因為正確鑒定ABO血型是安全輸血的保證，如果ABO血型不相容，則輸血幾乎毫無例外要發生嚴重的即發性溶血性輸血反應癥狀。ABO血型最常見的表型有四種:A、B、AB和0，ABO血型定型試驗由正定型和反定型試驗組成，正、反定型結果相符，才能正確地判斷ABO血型。
[0005]而Rh血型抗原系統中D抗原是最重要的抗原，人紅細胞膜上存在D抗原，即為RhD陽性,不存在D抗原，即為RhD陰性,在輸血中如果輸入含有相應抗原的血液后,貝U會引起嚴重的免疫性溶血性輸血反應,且IgG性質的Rh系統的抗體通過胎盤能力強，從而破壞胎兒具有與抗體對應抗原的紅細胞，引發嚴重的新生兒溶血病，因此進行準確的Rh分型對于減少免疫性溶血性輸血反應、對新生兒溶血病進行診斷、預防和治療具有重要的臨床意義。
[0006]微柱凝膠免疫檢測技術是20世紀90年代產生的一種免疫檢測技術，其基本原理是利用分子篩技術，離心技術和特異性免疫反應技術原理，把血型血清學技術與凝膠分子篩技術有機結合起來，可靈敏地檢測出可能存在的微弱血型抗原抗體反應，被認為是血型血清學檢驗的里程碑。
[0007]目前國內外已有一些廠家生產ABO正、反定型及RhD血型檢測卡，但是存在以下一些不足:一是采用單一型號的葡聚糖凝膠或聚丙烯葡聚糖凝膠，使得靈敏度與特異性無法兼顧；二是采用生理鹽水或抗體緩沖液溶脹凝膠，使得凝膠無法充分完全溶脹，以及破壞反應體系的離子強度；三是對添加不同抗體的凝膠，凝膠洗滌緩沖液完全一致，無法有效保護抗體穩定性。
[0008]
【發明內容】
[0009]本發明就是要克服以上不足，提供一種靈敏度高、特異型號，穩定性強、保質期長的ABO正、反定型及RhD血型檢測卡。
[0010]為達到上述目的，本發明通過以下技術方案進行解決，一種ABO正反定型及RhD血型檢測卡，包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱中前三個微柱分別裝有等量的抗A凝膠、抗B凝膠和抗D凝膠，其余三個微柱裝有等量的空白凝膠，其通過以下方法制備而成: (1)葡聚糖凝膠的溶脹:選用至少兩種交聯葡聚糖凝膠進行混合，然后加入純化水中進行充分懸浮溶脹，再用純化水洗滌去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的葡聚糖凝膠顆粒；
(2)制備各抗體稀釋液:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10-15g/L、牛血清白蛋白 20-25g/L、蔗糖 15-20g/L，稀釋液的 pH 值為 6.6-6.8 ；
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-20g/L、牛血清白蛋白 15-20g/L、蔗糖 25-30g/L,稀釋液的 pH 值為 6.6-6.8 ；
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10-15g/L、牛血清白蛋白35-40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ；
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75g-2.07g/L、磷酸氫二鈉0.185-0.219g/L、磷酸二氫鈉0.203-0.24g/L、甘氨酸18_21g/L ;并調節pH值為6.6-6.8 ；
(3)制備各抗體工作液:
取抗A單克隆抗體濃縮液與抗A稀釋液進行混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液的效價> 128 ；
取抗B單克隆抗體濃縮液與抗B稀釋液進行混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液的效價> 128 ；
取抗D單克隆抗體濃縮液與抗D稀釋液進行混合，使得到的抗D單克隆抗體工作液的效價> 64 ；
(4)凝膠洗滌:
取六份等量的葡聚糖凝膠顆粒，其中三份分別用等量的抗A稀釋液、抗B稀釋液和抗D稀釋液進行洗滌至少三次，再加入相對應的抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液和抗D單克隆抗體工作液進行混合，得到抗A凝膠、抗B凝膠和抗D凝膠；再將另外三份葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的空白凝膠洗滌緩沖液進行洗滌至少三次，再加入空白凝膠洗滌緩沖液進行混合，得到三份空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管24-32微升的量，將抗A凝膠、抗B凝膠、抗D凝膠依次加到空白檢測卡的前三個微柱中，將三份空白凝膠分別加到空白檢測卡的后三個微柱中，形成ABO正反定型及RhD血型檢測卡。
[0011]優選方案:所述步驟(I)中交聯葡聚糖凝膠為交聯葡聚糖凝膠G-25、交聯葡聚糖凝膠G-50、交聯葡聚糖凝膠G-75或交聯葡聚糖凝膠G-100。
[0012]優選方案:所述步驟(I)中交聯葡聚糖凝膠混合物和純化水的質量體積比為1:2-1:3。
[0013]優選方案:所述步驟(I)中懸浮溶脹的時間為48-72小時。
[0014]優選方案:所述步驟(4)中抗體工作液與洗滌后凝膠的體積比為1:2-1:3。
[0015]本發明選擇至少兩種交聯葡聚糖凝膠用純化水中進行溶脹所得的葡聚糖凝膠顆粒，再用抗A稀釋液、抗B稀釋液和抗D稀釋液分別對其進行洗滌至少三次，再加入相對應的抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液和抗D單克隆抗體工作液進行混合，得到抗A凝膠、抗B凝膠和抗D凝膠。再將三份等量的葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的空白凝膠洗滌緩沖液進行洗滌后與空白凝膠洗滌緩沖液進行混合，得到空白凝膠。將這六份凝膠依次裝入檢測卡中的六個微柱中，形成ABO正反定型及RhD血型檢測卡。該檢測卡用來鑒定ABO血型及RhD血型，從而保證輸血正確性,保障生命安全。
[0016]所以本發明的優點有:
1、本發明采用不同大小、不同篩分范圍的交聯葡聚糖凝膠進行混合，有效避免了單一交聯葡聚糖凝膠的特異性與靈敏度不能兼顧的特點，可實現在保證特異性的同時，仍擁有很高的靈敏度；
2、本發明采用純化水作為交聯葡聚糖凝膠的溶脹溶液，可以使凝膠顆粒完全充分溶脹；
3、本發明用各抗體稀釋液洗滌葡聚糖凝膠顆粒，從而不會破壞抗體的保護液成分，能更有效的保證抗體的穩定性；并保證了緩沖液體系的純粹性，不受其他離子的影響，有效保證了體系的離子強度。
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【具體實施方式】
[0018]實施例一:
一種ABO正反定型及RhD血型檢測卡，包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱中前三個微柱分別裝有等量的抗A凝膠、抗B凝膠和抗D凝膠，其余三個微柱裝有等量的空白凝膠，其通過以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:
選用交聯葡聚糖凝膠G-25、交聯葡聚糖凝膠G-50和交聯葡聚糖凝膠G-75按照質量比I:2:1進行混合得葡聚糖凝膠混合物，然后按照葡聚糖凝膠混合物和純化水的質量體積比為1:3加入純化水，進行懸浮溶脹48小時后；再用純化水對其洗滌三次，去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的凝葡聚糖膠顆粒；
(2)抗體稀釋液的配制:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ；
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖30g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ；
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15g/L、牛血清白蛋白40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ；
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75g/L、磷酸氫二鈉0.185g/L、磷酸二氫鈉0.203g/L、甘氨酸18g/L ;并調節pH值為6.6-6.8 ；
(3)抗體稀釋:
取抗A單克隆抗體濃縮液與(2)制備的抗A稀釋液混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液效價> 128 ；
取抗B單克隆抗體濃縮液與(2)中制備的抗B稀釋液混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液