本發明涉及藥物檢測領域,具體是一種冠脈樂片含量測定方法。
背景技術:
1、冠脈樂片具有增加冠狀動脈血流量,調節心律,降低心肌耗氧量的功效。主要用于治療冠心病、心絞痛。
2、麥角甾醇是大型真菌中普遍存在的甾體類化合物,也是真菌類的特征甾醇,主要存在于真菌的細胞膜中,可增強人體免疫力,具有明顯的抑菌、抗腫瘤功效,其含量與真菌生物數量有相關性,可以通過檢測麥角甾醇的含量來控制菌類提取物的質量。
3、現有技術中缺乏檢測冠脈樂片中麥角甾醇含量的方法,需要改進。
技術實現思路
1、本發明的目的在于提供一種冠脈樂片含量測定方法,以解決上述背景技術中提出的問題。
2、為實現上述目的,本發明提供如下技術方案:
3、一種冠脈樂片含量測定方法,包括以下步驟:
4、步驟1,設定色譜條件;
5、步驟2,對供試品溶液進行制備;
6、步驟3,色譜條件的選擇;
7、步驟4,供試品溶液的制備選擇;
8、步驟5,對冠脈樂片中麥角甾醇含量進行驗證;
9、步驟4包括:
10、步驟41,對提取溶劑考察,并選擇提取溶劑;
11、步驟42,對提取方式考察,選擇提取方式;
12、步驟43,對超聲時間比較,選擇超聲時間;
13、步驟44,對提取體積比較,選擇提取體積;
14、步驟5包括:
15、步驟51,對麥角甾醇準確度驗證,精密稱取麥角甾醇對照品1.111mg,置5ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為214.6452μg/ml的對照品儲備液;取供試品(批號:20230601,麥角甾醇含量為0.0116%)0.05、0.1、0.2g各三份分別置10ml量瓶中,分別精密加入對照品儲備液30μl、60μl、120μl,自“加甲醇至近刻度”,依據步驟2制得回收率測定用溶液,進樣;基于麥角甾醇含量在0.006-0.025%范圍內的平均回收率來判斷準確度(結果麥角甾醇含量在0.006-0.025%范圍內的平均回收率為98.0%,rsd為2.1%,說明本品準確度較好);
16、步驟52,對麥角甾醇精密度驗證;
17、步驟53,對麥角甾醇專屬性考察,取冠脈樂片輔料按比例依步驟2制備供試品溶液,即得陰性對照溶液;進樣測定并與對照品溶液和樣品溶液的色譜圖進行比較,判斷專屬性(結果在陰性色譜圖中,與麥角甾醇色譜峰相同的位置上未見有色譜峰干擾,說明專屬性好);
18、步驟54,對麥角甾醇線性考察;精密稱取麥角甾醇對照品1.111mg置5ml量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為214.6452μg/ml的對照品儲備溶液;取對照儲備液稀釋,得系列標準溶液,濃度分別為0.5366、1.0732、2.1465、5.3661、10.7323μg/ml,分別進樣10μl,以對照品溶液濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,麥角甾醇線性方程為:y=0.2127x+0.0032,r=0.9999,來判斷線性關系(結果麥角甾醇在0.5366~10.7323μg/ml范圍內,線性關系良好);
19、步驟55,對麥角甾醇耐用性考察。
20、作為本發明再進一步的方案:步驟1中,設定色譜條件為色譜柱:phenomenexlunac18(4.6×250mm,5μm);流動相:甲醇和水以99︰1比例混合;柱溫:35℃;流速:1ml/min;檢測波長:280nm。
21、作為本發明再進一步的方案:步驟2中包括:
22、步驟21,對冠脈樂片片劑而言,除去糖衣,研細,取粉末0.2g;對冠脈樂片原料而言,取粉末0.2g;
23、步驟22,將0.2g冠脈樂片粉末置于10ml量瓶中,加甲醇至近刻度,超聲40min,放冷,定容,取續濾液過0.45μm微孔濾膜過濾,即得獲得冠脈樂片溶液。
24、作為本發明再進一步的方案:步驟3中,結合步驟1預備試驗結果,擬定本品檢測色譜條件,設定色譜條件為色譜柱:phenomenex?lunac18(4.6×250mm,5μm);流動相:甲醇和水以99︰1比例混合;柱溫:35℃;流速:1ml/min;檢測波長:280nm,陰性樣品無干擾,色譜峰分離度好且洗脫時間適中;
25、波長選擇:對樣品色譜圖中與對照品相對的色譜峰進行dad光譜檢測,結果在272-281nm處有最大吸收波長,選擇280nm作為檢測波長。
26、作為本發明再進一步的方案:步驟41中,麥角甾醇不溶于水,能溶于有機溶劑(乙醇、甲醇等),使用不同濃度的乙醇或甲醇作為提取溶劑,結果50%乙醇、50%甲醇提取效果較差,而甲醇或乙醇提取峰面積明顯升高,甲醇提取又稍高于乙醇,因此選擇甲醇作為提取溶劑。
27、作為本發明再進一步的方案:步驟42中,取樣冠脈樂片粉末1.0g各兩份,精密稱定,加甲醇各50ml,比較了超聲和回流的提取效果,結果兩者差異不大,峰面積分別為202789、203968,考慮到實際操作的方便性,選擇超聲提取方式。
28、作為本發明再進一步的方案:步驟43中,取樣冠脈樂片粉末1.0g各三份,精密稱定,加甲醇各50ml,甲醇超聲時間20、40、60min的提取效果,結果主峰的峰面積分別為195919、215483、202446,說明提取40min可提取完全,故選擇超聲時間為40min。
29、作為本發明再進一步的方案:步驟44中,取樣冠脈樂片粉末1.0g各三份,精密稱定,加甲醇各25、50、100ml的提取效果,結果主峰的峰面積分別為399896、192150、100050,說明提取溶劑甲醇50ml可提取完全,故選擇甲醇的提取體積為50ml。
30、作為本發明再進一步的方案:步驟52包括:
31、步驟521,對重復性驗證,取供試品(批號:20230601),按供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液,進樣,測定,結果麥角甾醇的含量是0.0116%,rsd(n=6)是1.7%;重復性rsd低于3%,說明該方法的重復性良好;
32、步驟522,對中間精密度驗證,取供試品(批號:20230601),在thermo?vanquish和島津lc40兩臺液相色譜儀上分別檢測,并比較檢測結果,判斷中間精密度是否良好(結果麥角甾醇的含量分別為是0.0117%、0.0115%,說明該方法的中間精密度良好)。
33、作為本發明再進一步的方案:步驟55包括:
34、步驟551,對穩定性檢測,精密吸取同一供試品溶液(批號:20230601),分別在0、4、8、12及24小時,注入液相色譜儀,記錄峰面積,判斷穩定性(結果表明,供試品溶液在24小時內,麥角甾醇峰面積的rsd小于2%,溶液基本穩定)。
35、步驟552,對不同色譜柱比較,精密吸取同一供試品溶液(批號:20230601),分別在三根不同色譜柱a:phenomenex?luna?c18(4.6×250mm,5μm);b:venusil?mp?c18(4.6×250mm,5μm);c:kromasil?c18(4.6×250mm,5μm)進樣檢測,計算含量測定結果(結果三根色譜柱分別為0.0115%、0.0115%、0.0116%,三根色譜柱檢測結果基本一致,適用性優良,且分離度均較好,主峰的理論塔板數均在15000以上)。
36、與現有技術相比,本發明的有益效果是:本發明對冠脈樂片及類似藥品的麥角甾醇含量檢測領域提供參考,能夠對藥品性能獲得更全面的認知。