一種利用胃磨鑒定蝦蟹類年齡的方法與流程

本發明屬于水產學領域，具體地，公開了一種利用胃磨鑒定蝦蟹類年齡的方法，該方法涉及蝦蟹類胃磨生長紋的觀測。

背景技術：

蝦蟹類隸屬于節肢動物門、甲殼綱、十足目，絕大多數種類壽命在1～10歲之間，它們是重要的海洋經濟種類，廣泛分布于世界各大洋和南、北極等海域。年齡鑒定是漁業生物學研究的重要內容，通過對水生生物年齡的鑒定，有助于掌握其生活史和估算其種群數量，為漁業資源管理提供基礎信息。

對于大部分野生水生生物，一般都可以通過硬組織中的生長紋來直接獲得其年齡信息，如魚類的鰭條、脊椎骨等，頭足類的耳石、角質顎和內殼等。早期的研究中，大部分學者使用飼養、標記重捕、體長頻度、脂褐素分析和放射性同位素分析等方法來鑒定甲殼類的年齡，但這些方法均存在一些不足。此外，與魚類和頭足類不同，甲殼類動物是通過脫殼過程得以生長，因此能記錄年齡信息的鈣化結構周期性的消失，給直接鑒定其年齡帶來一定的困難。

胃磨是蝦蟹類脫殼時仍會保留的少數硬組織之一，本領域至今未見利用胃磨來研究蝦蟹類的年齡的報道。本發明通過直接讀取胃磨生長紋數目來鑒定蝦蟹類的年齡，為直接鑒定蝦蟹年齡提供了一個新的有效的方法。

技術實現要素：

本發明要解決的技術問題是，針對現有技術中鑒定蝦蟹類年齡的不足與困難，提供了一種有效的直接鑒定蝦蟹年齡的方法。

為解決上述問題，本發明提供了一種利用胃磨鑒定蝦蟹類年齡的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)標記：選取軛賁門骨，按照圖1在第1齒與近端1/2處畫一條切割線；

(2)包埋：將畫有切割線的軛賁門骨平放于磨具中，倒入壓克力粉和液體固化劑混合配置成的樹脂溶液，使溶液覆蓋整個模具，然后放置室溫避光處待其硬化；

(3)切割：將包埋硬化后的樹脂塊以切割線為中心，將兩側多余的部分切除；

(4)固定：將切割后的樹脂薄片一側朝下，固定在載玻片上；

(5)打磨：將固定在載玻片上的樹脂薄片另一側打磨，先后以120、600、1200、2500目的水磨砂紙，先粗磨后細磨至切割線表面；

(6)拋光：將經打磨的樹脂薄片拋光研磨面，除去油質和雜質，完成所述樹脂薄片一面的研磨；

(7)將以上拋光好的樹脂薄片連同載玻片放在加熱臺上加熱直至樹脂軟化，取下樹脂薄片，干燥后，將樹脂薄片翻面，固定在載玻片上，然后重復(5)和(6)步驟直至截面的生長紋清晰可見；

(8)生長紋觀察：計數鈣化層內生長紋的數目。

進一步地，在步驟(1)標記之前對胃磨進行預處理，包括如下步驟：

(1)提取：揭開蝦蟹類的頭胸甲，將其整個胃取出，用手術剪刀剪開胃取出胃磨；

(2)清洗：用手術剪刀剪開胃磨并展開，用清水將胃磨表面清洗干凈；

(3)去除結締組織：用解剖剪刀和尖頭鑷子剔除與胃磨骨骼相連的結締組織剔除；

(4)保存：將經步驟(3)處理的胃磨在-20℃下冷凍保存。

進一步地，在所述步驟(8)中的生長紋計數步驟為：

(1)圖片制作：將制作好切片置于載玻片上，用膠頭滴管滴上清水；在連接有ccd的顯微鏡100×倍下對胃磨的生長紋進行拍照，用圖像處理軟件對所拍的圖片分別進行拼圖處理；

(2)生長紋計數：對100×倍下采集的圖像對鈣化層的生長紋進行數目計數。

在一些實施方案中，在步驟(1)中用翼賁門骨或中賁門骨作為材料按照圖1選取研磨平面，然后完成包埋、切割、固定、打磨、拋光和實施后續步驟。

優選地，所述的磨具是塑料模具。

優選地，述壓克力粉和液體固化劑的配置體積比為1:1-1:1.5。

定義：

“蝦蟹”，是節肢動物的另一家族，屬于甲殼綱的十足目。這類動物與人類有著十分密切的關系，有些是主要的水產養殖或捕撈對象，其中尤以蝦、龍蝦和蟹等，在海洋漁業捕獲物中產量相當大，特別是對蝦、毛蝦、梭子蟹等，營養豐富，產值很高，地位更為重要。我國的蝦蟹種類非常多，通過大量的調查研究，目前已發現的約有1000多種，其中蝦類400多種，蟹類600多種。根據本發明的教導，本領域技術人員能將本發明方法運用于任何蝦蟹類生物，因此本發明不限于任何具體的蝦蟹類生物。

“胃磨(gastricmill)”，即所謂咀嚼胃，其內面的角質層在一定部位形成胃齒、突出于胃腔內，基于肌肉的控制可將食物磨碎。胃壁上的這種咀嚼結構稱為胃磨。

“壓克力粉”，是一種開發較早的重要熱塑性塑料，具有較好的透明性、化學穩定性和耐候性，易染色，易加工，外觀優美。

“固化劑”固化劑又名硬化劑、熟化劑或變定劑，是一類增進或控制固化反應的物質，可分為液體固化劑和固體固化劑。本領域技術人員根據實際情況，能夠選用合適的液體固化劑，本發明不限于任何具體的液體固化劑。

本發明的有益效果：

1.解決了現有技術中鑒定蝦蟹類的年齡的不足與困難。

2.通過直接讀取胃磨生長紋數目來鑒定蝦蟹類的年齡，為直接鑒定蝦蟹年齡提供了一個新的有效的方法。

附圖說明

結合附圖以及本發明具體實施例，本領域技術人員將會更加明了本發明的上述以及其他目的、優點和特征。

圖1為蝦蟹類胃磨結構與研磨平面選擇示意圖，其中，m：中賁門骨，z：軛賁門骨，p：翼賁門骨，mt：中賁門骨，zt：軛賁門骨，pt：翼賁門骨。

a：截面位于遠端和近端1/2處；

b：截面位于第1齒與近端1/2處；

c：位于左右1/2處。

圖2為三疣梭子蟹軛賁門骨微結構圖。

具體實施方式

實施例中所用原料和設備均為本領域技術人員熟知，且均為市場上能夠購買到或容易獲得或制得。

實施例1.利用胃磨鑒定三疣梭子蟹年齡的方法，操作步驟如下：

(1)提取：揭開蝦蟹類的頭胸甲將其整個胃取出，用手術剪刀剪開胃取出胃磨；

(2)清洗：用手術剪刀剪開胃磨并展開，用清水將胃磨表面清洗干凈；

(3)去除結締組織：用解剖剪刀和尖頭鑷子剔除與胃磨骨骼(1個中賁門骨、1對軛賁門骨和1對翼賁門骨)相連的結締組織；

(4)保存：將經步驟(3)處理的胃磨在-20℃下冷凍保存；

(5)標記：選取1個軛賁門骨，按照圖1在第1齒與近端1/2處用記號筆畫一條切割線；

(6)包埋：將畫有切割線的軛賁門骨平放于塑料磨具中，倒入按1:1-1:1.5的體積比混合的壓克力粉和液體固化劑配置成的樹脂溶液，使溶液覆蓋整個模具，然后放置室溫避光處待其硬化；

(7)切割：將包埋硬化后的樹脂塊以切割線為中心，將兩側多余的部分切除；

(8)固定：將切割后的樹脂薄片一側朝下，固定在載玻片上；

(9)打磨：將固定在載玻片上的樹脂薄片另一側打磨，先后以120、600、1200、2500目的水磨砂紙，先粗磨后細磨至切割線表面；

(10)拋光：將經打磨的樹脂薄片拋光研磨面，除去油質和雜質，完成所述樹脂薄片一面的研磨；

(11)將以上拋光好的樹脂薄片連同載玻片放在加熱臺上加熱直至樹脂軟化，取下樹脂薄片，干燥后，將樹脂薄片翻面，固定在載玻片上，然后重復(9)和(10)步驟直至截面的生長紋清晰可見；

(12)圖片制作：將制作好切片置于載玻片上，用膠頭滴管滴上清水；在連接有ccd的顯微鏡100×倍下對胃磨的生長紋進行拍照，用圖像處理軟件對所拍的圖片分別進行拼圖處理；

(13)生長紋計數：對100×倍下采集的圖像對鈣化層的生長紋進行數目計數。

通過上述步驟，得以直接鑒定三疣梭子蟹的年齡。

以上所述僅是本發明的具體實施例而已，并非對本發明做任何形式上的限制，雖然本發明已以具體實施例揭露如上，然而并非用以限定本發明，任何熟悉本專業的技術人員，在不脫離本發明技術方案的范圍內，當可利用上述揭示的技術內容作出些許更動或修飾為等同變化的等效實施例，但凡是未脫離本發明技術方案的內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發明技術方案的范圍內。