腦震寧薄層色譜鑒別方法與流程

本發明涉及一種腦震寧薄層色譜鑒別方法，屬于中藥提取物及制劑的質量控制技術領域。

背景技術：

腦震寧是依據專利號為931007410的專利公開的處方，制成的用于預防和治療腦震蕩、腦外傷后綜合征、神經外科術后恢復期的提取物及中成藥，可制成顆粒劑、膠囊、片劑、軟膠囊等一切適宜劑型。為了控制腦震寧制劑的質量，我們對其進行了薄層鑒別研究。

腦震寧顆粒是依據專利處方制成的顆粒。目前有糖顆粒收錄于《中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑（第十七冊）》第230頁（標準號：ws3-b-3312-98）。該標準中提出：其處方為：當歸200g、地黃200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龍150g、丹參375g、茯苓250g、陳皮250g、竹茹250g、炒酸棗仁250g、柏子仁250g；制法為：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度1.35～1.38(55℃)的清膏，加入適量的蔗糖和糊精，用乙醇制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成1000g即得；規格為：每袋裝10g。其鑒別方法有2個，具體為：

（1）取本品10g，研細，加甲醇30ml，回流提取1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加0.3%鹽酸溶液20ml使溶解，置沸水浴上回流1小時，放冷，用苯20ml提取，棄去苯液，酸水用5g氯化鈉飽和，振搖，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml，分取醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加無水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄vib）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸（8:1:1）為展開劑，展開，取出，晾干，置氨氣中熏后，原兒茶醛斑點顯黃色，再噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取本品10g，研細，加甲醇30ml，回流提取1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水50ml，加熱使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15ml，合并乙醚液，用2%碳酸鈉溶液提取3次，每次15ml，分取堿液，用鹽酸調節ph值至2～3，用苯15ml提取，棄去苯液，再用乙醚提取3次，每次15ml，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄vib）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以苯-冰醋酸-甲醇（30:1:1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

目前無糖顆粒，執行標準為國家食品藥品監督管理局發布的：ws3-b-3312-98-1，每袋含生藥量與《中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑（第十七冊）》第230頁收錄的“腦震寧顆粒（標準號：ws3-b-3312-98）相同，鑒別方法也相同。

腦震寧提取物是依據專利號為931007410的專利公開的處方制成制成的精制物。

腦震寧制劑是是依據專利號為931007410的專利公開的處方制成制成一切適宜劑型的制劑。

經過山西振東安特生物制藥有限公司的深入研究，對已有的鑒別方法進行改進并增加，即對丹參、當歸、川芎、酸棗仁、陳皮五味藥進行了鑒別分析，公開并授權了專利（專利號：zl201310046420.9），然而專利中陳皮的鑒別方法步驟繁瑣，對環境污染較多。

目前已公開發表的其他藥材、制劑中陳皮的鑒別方法中，供試品制備方法較繁瑣，需要加熱回流（中國專利cn200710072856.x），或者乙酸乙酯萃取（中國專利cn201410222870.3），或者水飽和正丁醇萃取（中國專利cn200910020802.8），違背了質量檢測中快速檢測的原則，且在采用上述以公開的其他藥材或制劑的橙皮苷鑒別方法鑒別腦震寧制劑時，均未達到理想狀況，或者所制備的供試品中含糖較高，無法控制點樣量，或者通過展開劑展開后，干擾較多。本發明中所述腦震寧陳皮薄層鑒別方法中，供試品制備過程中通過加入乙醇，產生意想不到的效果，解決了上述問題，使點樣量可控，且目標成分分離效果好，顯色后斑點清晰。

腦震寧是治療腦震蕩、腦外傷后綜合征的唯一藥品，具有獨特性，決定了它的處方的獨特性，藥味及比例均有不同，現有的關于芍藥苷的鑒別方法對腦震寧中牡丹皮的鑒別并無助益，腦震寧鑒別方法中尚沒有丹皮的鑒別方法。根據現有的已公開的其他中藥材或者制劑中芍藥苷的鑒別方法，供試品制備需要加熱有機溶劑回流（中國專利cn200610201379.8、cn200810117041.3），或者水飽和正丁醇與正丁醇飽和的水先后提取（中國專利cn200810046038.7）；萃取后的溶劑通過中性氧化鋁柱洗脫（中國專利cn200810018308.3），步驟繁多，且不環保。

技術實現要素：

本發明旨在提供一種腦震寧薄層色譜鑒別方法，該方法專屬性強，重現性、耐用性好，可用于該中藥提取物及制劑中的相應藥味鑒別。

腦震寧是由生地、當歸、川芎、地龍、丹皮、丹參、茯苓、陳皮、竹茹、炒酸棗仁、柏子仁十一味中藥組成。腦震寧制劑的處方為：

生地7-12份當歸1-12份川芎5-10份地龍5-10份

丹皮5-10份丹參15-20份茯苓10-15份陳皮10-15份

竹茹6-11份酸棗仁（炒）6-11份柏子仁6-11份。

根據所述處方，制成含以上11味中藥的腦震寧提取物或制劑。

本發明提供了上述腦震寧薄層色譜鑒別方法，包括以下鑒別方法中的任一種或者兩種：

（1）腦震寧中陳皮的鑒別：

取腦震寧提取物或制劑0.2~20g，加甲醇5~100ml，超聲處理10～60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1~10ml使溶解，加入3~30ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇0.1~20ml制成供試品溶液；

另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液；

吸取供試品及對照品溶液各0.5~20μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為71~130:10~25:5~19的乙酸乙酯-甲醇-水的混合溶劑為展開劑展開至4~6cm處，取出，晾干，再以體積比為9~30:5~20:5~20:0.5~2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開至8~12cm，取出，晾干；噴以質量分數為0.1~5%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外燈下檢視；

供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（2）腦震寧中牡丹皮的鑒別：

取腦震寧提取物或制劑0.2~20g，加甲醇5~100ml，超聲處理10～60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水5～40ml溶解，用水飽和正丁醇提取1～5次，每次5～40ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加0.1～20ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.1～5g，搖勻，靜置，取上清液，制成供試品溶液；

另取芍藥苷對照品，加甲醇制成含0.2~2mg/ml的對照品溶液；

吸取供試品溶液和對照品溶液各0.5~20μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為19～59:5～20:0.5～5的氯仿-甲醇-水的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以質量分數1~10%香草醛硫酸溶液顯色，60~120℃加熱至斑點清晰；

供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

所述香草醛硫酸溶液配制方法為：取香草醛，加到體積分數為10%的硫酸乙醇溶液中，制成含香草醛質量分數為1~10%的香草醛硫酸溶液。

所述腦震寧包括提取物或片劑、膠囊、顆粒、軟膠囊、分散片、口服液制劑中的一種。

進一步地，所述的腦震寧薄層色譜鑒別方法，包括以下鑒別方法中的任一種或者兩種：

（1）腦震寧中陳皮的鑒別方法為：

取腦震寧提取物或制劑0.4~10g，加甲醇10~60ml，超聲處理15～50分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1~5ml使溶解，加入3~15ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加0.2~10ml甲醇制成供試品溶液；

另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液；

吸取供試品及對照品溶液各1~10μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為80~120:12~22:7~17的乙酸乙酯-甲醇-水的混合溶劑為展開劑展開至4~6cm處，取出，晾干，再以體積比為12~28:8~18:8~18:0.6~2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開至8.5~11.5cm，取出，晾干；噴以質量分數0.5~4.5%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外燈下檢視；

供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（2）腦震寧中牡丹皮的鑒別：

取腦震寧提取物或制劑0.4~10g，加甲醇10~60ml，超聲處理15～50分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水8～30ml溶解，用水飽和正丁醇提取1～4次，每次10～30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加0.2~10ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.2～3g，搖勻，靜置，取上清液，制成供試品溶液；

另取芍藥苷對照品，加甲醇制成含0.4~1.8mg/ml的對照品溶液；

吸取供試品溶液和對照品溶液各1~10μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為20～55:8～18:0.6～4的氯仿-甲醇-水的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以質量分數2~8%香草醛硫酸溶液顯色，65~115℃加熱至斑點清晰；

供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

更進一步地，所述的腦震寧薄層色譜鑒別方法，包括以下鑒別方法中的任一種或者兩種：

（1）腦震寧中陳皮的鑒別方法為：

取腦震寧提取物或制劑0.8~8g，加甲醇20~50ml，超聲處理20~40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1.5~3.5ml使溶解，加入4.5~10.5ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇0.4~4ml溶解，制成供試品溶液；

另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液；

吸取供試品及對照品溶液各2~5μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為90~110:15~20:10~15的乙酸乙酯-甲醇-水混合溶劑為展開劑，展開至4.5~5.5cm處，取出，晾干，再以體積比為15~25:6~15:6~15:0.7~1.5甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開至9~11cm，取出，晾干；噴以1~4%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）腦震寧中牡丹皮的鑒別方法為：

取腦震寧提取物或制劑0.8~8g，加甲醇20~50ml，超聲處理20~40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10~25ml溶解，用水飽和正丁醇提取2~4次，每次18~25ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加0.4~8ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.2~2g，搖勻，靜置，取上清液，制成供試品溶液；

另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5~1.5mg的溶液，作為對照品溶液；

吸取供試品溶液和對照品溶液各2~8μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為30~50:7~15:0.8~3的氯仿-甲醇-水混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以質量分數3~7%香草醛硫酸溶液顯色，80~110℃加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

更進一步地，所述的腦震寧薄層色譜鑒別方法，包括以下鑒別方法中的任一種或者兩種：

（1）腦震寧中陳皮的鑒別方法為：

取腦震寧提取物或制劑3~5g，加甲醇30~40ml，超聲處理25~30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2~3ml使溶解，加入6~9ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇1~2ml溶解，制成供試品溶液；

另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液；

吸取供試品及對照品溶液各2~4μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為95~105:15~20:10~15的乙酸乙酯-甲醇-水混合溶劑為展開劑，展開至4.5~5.5cm處，取出，晾干，再以體積比為18~22:8~12:8~12:0.8~1.2甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開至10cm，取出，晾干；噴以2.5~3.5%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）腦震寧中牡丹皮的鑒別方法為：

取腦震寧提取物或制劑3~5g，，加甲醇30~40ml，超聲處理25~30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15~20ml溶解，用水飽和正丁醇提取2~3次，每次15~20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加1~2ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.3~1.5g，搖勻，靜置，取上清液，制成供試品溶液；

另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1~1.2mg的溶液，作為對照品溶液；

吸取供試品溶液和對照品溶液各2~4μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以體積比為35~45:9~12:1~2氯仿-甲醇-水混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以質量分數4~6%香草醛硫酸溶液顯色，90~105℃加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

本發明提供的腦震寧中陳皮鑒別方法，供試品制備方法簡便、快速、準確、環保，省去了加熱回流、有機溶劑萃取等步驟。供試品制備過程中通過加入乙醇，產生意想不到的效果，使點樣操作易于進行，且點樣量可控，保證了供試品中所含生藥可量化，分離度高，取樣量小，點樣量少，靈敏度高，顯色后斑點清晰，干擾較少。

本發明提供的牡丹皮鑒別方法，簡便、快速、準確、環保，省去了加熱回流、多種有機溶劑萃取、大孔樹脂柱洗脫等步驟，使用甲醇超聲提取，水飽和正丁醇萃取，中性氧化鋁拌樣，通過簡單操作即可獲得供試品，且點樣量少，節省時間，對環境污染少，使鑒別更加快速準確。

附圖說明

圖1為實施例9中牡丹皮薄層鑒別色譜圖；

圖2為實施例9中陳皮薄層鑒別色譜圖。

具體實施方式

下面通過實施例來進一步說明本發明，但不局限于以下實施例。

實施例1：腦震寧顆粒的薄層鑒別方法

根據標準ws3-b-3312-98制備含蔗糖的腦震寧顆粒，用本發明提供的鑒別方法進行鑒別。

處方：當歸200g，地黃200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龍150g，丹參375g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹250g，炒酸棗仁250g，柏子仁250g

制法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度為1.35～1.38(55℃)的清膏，加入蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成1000g；即得腦震寧有糖顆粒。

鑒別：（1）取腦震寧顆粒5g，研細，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，加入6ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各2μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為100:17:13）混合溶劑為展開劑，展開至5cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為20:10:10:1）的上層溶液為展開劑，展開至10cm，取出，晾干。噴以質量分數3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取腦震寧顆粒5g，研細，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加1ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.5g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為40:10:1）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數5%香草醛硫酸溶液顯色，105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

實施例中所述地黃，與前述的生地為同一種藥材。

實施例2：腦震寧顆粒（不含蔗糖）的薄層鑒別方法

根據標準ws3-b-3312-98-1制備不含蔗糖的腦震寧顆粒，用本發明提供的鑒別方法進行鑒別。

處方：當歸200g，地黃200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龍150g，丹參375g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹250g，炒酸棗仁250g，柏子仁250g

以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度為1.35～1.38(55℃)的清膏，加入糊精，制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成600g，即得腦震寧無糖顆粒。

鑒別：（1）取腦震寧無糖顆粒0.6g，研細，加甲醇60ml，超聲處理60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，加入30ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇0.5ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各20μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為130:25:19）混合溶劑為展開劑，展開至6cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為30:5:5:3）的上層溶液為展開劑，展開至12cm，取出，晾干。噴以質量分數5%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取腦震寧無糖顆粒0.6g，研細，加甲醇60ml，超聲處理60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水50ml溶解，用水飽和正丁醇提取5次，每次40ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加0.5ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.2g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各20μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為59:20:5）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數10%香草醛硫酸溶液顯色，120℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

實施例3：腦震寧膠囊的薄層鑒別方法

處方：當歸220g，地黃210g，牡丹皮160g，川芎140g，地龍130g，丹參330g，茯苓260g，陳皮260g，竹茹260g，炒酸棗仁160g，柏子仁160g

制法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，再加入其他藥材水提，水提取后，用80%的乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，加入淀粉混勻、制粒、干燥整粒、加入所得揮發油，攪拌均勻，制得腦震寧膠囊200粒，每粒膠囊裝0.4g。

鑒別：（1）取腦震寧膠囊內容物0.77g，研細，加甲醇10ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，加入3ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇5ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各0.5μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為71:10:5）混合溶劑為展開劑，展開至4cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為9:5:5:0.5）的上層溶液為展開劑，展開至8cm，取出，晾干。噴以質量分數0.1%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。。

（2）取腦震寧膠囊內容物0.75g，研細，加甲醇10ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用水飽和正丁醇提取1次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加10ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁5g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各0.5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為19:5:0.5）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數1%香草醛硫酸溶液顯色，60℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

實施例4：腦震寧片劑的薄層鑒別方法

處方：當歸175g，地黃175g，牡丹皮150g，川芎75g，地龍75g，丹參300g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹150g，炒酸棗仁150g，柏子仁150g

制法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，再加入其他藥材水提，水提取后，用70%的乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，加入淀粉、羧甲基淀粉鈉混勻、制粒、干燥整粒，再加入所得揮發油，攪拌均勻，壓片。制得腦震寧片200片，每片重0.5g。

鑒別：（1）取腦震寧片劑0.8g，研細，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，加入5ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各2μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為98:20:15）混合溶劑為展開劑，展開至5cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為22:15:15:2）的上層溶液為展開劑，展開至10cm，取出，晾干。噴以質量分數3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取腦震寧片劑0.8g，研細，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25ml溶解，用水飽和正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加5ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁2g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為35:9:1）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數3%香草醛硫酸溶液顯色，100℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

實施例5：腦震寧軟膠囊的薄層鑒別方法

處方：當歸300g，地黃300g，牡丹皮275g，川芎250g，地龍250g，丹參500g，茯苓275g，陳皮375g，竹茹275g，炒酸棗仁275g，柏子仁275g

制法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，再加入其他藥材水提，水提取后，用80%的乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，以滴制法制得腦震寧軟膠囊300粒，每片粒0.5g。

鑒別：（1）取腦震寧軟膠囊內容物1g，加甲醇25ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3ml使溶解，加入10ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各1μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為120:20:17）混合溶劑為展開劑，展開至5cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為21:11:10:2）的上層溶液為展開劑，展開至10cm，取出，晾干。噴以質量分數3.5%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取腦震寧軟膠囊內容物0.7g，加甲醇35ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25ml溶解，用水飽和正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加2ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁1g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.8mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為37:9:1）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數6%香草醛硫酸溶液顯色，90℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點

實施例6：腦震寧分散片的薄層鑒別方法

處方：當歸250g，地黃220g，牡丹皮200g，川芎100g，地龍100g，丹參400g，茯苓330g，陳皮300g，竹茹200g，炒酸棗仁190g，柏子仁220g

制法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，再加入其他藥材水提，水提取后，用70%的乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，加入適量的羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、微粉硅膠、用乙醇制粒、干燥、整粒，再加入所得揮發油，混勻后，壓片。制得腦震寧分散片200片，每片重0.65g。

鑒別：（1）取腦震寧分散片0.2g，研細，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，加入3ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各1μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為112:19:15）混合溶劑為展開劑，展開至5cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為21:13:13:0.5）的上層溶液為展開劑，展開至10cm，取出，晾干。噴以質量分數4%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取腦震寧分散片0.3g，研細，加甲醇20ml，超聲處理25分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加1ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.3g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為50:19:3）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數3%香草醛硫酸溶液顯色，112℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

實施例7：腦震寧口服液的薄層鑒別方法

處方：當歸210g，地黃210g，牡丹皮140g，川芎140g，地龍140g，丹參350g，茯苓260g，陳皮280g，竹茹240g，炒酸棗仁230g，柏子仁230g

制法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，再加入其他藥材水提，水提取后，用70%的乙醇醇沉2次，加入蜂蜜、聚山梨酯80、苯甲酸鈉，用枸櫞酸調節ph值至4.5～5.5，攪勻，濾過，得腦震寧口服液1000ml,5ml/支。

鑒別：（1）取腦震寧口服液5ml，加甲醇30ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，加入8ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各2μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為98:15:13）混合溶劑為展開劑，展開至4cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為18:11:11:1.5）的上層溶液為展開劑，展開至9cm，取出，晾干。噴以質量分數3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取腦震寧口服液5ml，加甲醇30ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加1ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.5g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為38:9:1）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數5%香草醛硫酸溶液顯色，85℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

實施例8：小兒腦震寧顆粒的薄層鑒別方法

處方：當歸200g，地黃200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龍150g，丹參375g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹250g，炒酸棗仁250g，柏子仁250g

制法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與其余丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，濃縮至相對密度1.35～1.38(55℃)的清膏，加入蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述揮發油，混勻，制成1000g，即得。

鑒別：（1）取小兒腦震寧顆粒5g，研細，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，加入10ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品及對照品溶液各2μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為100:17:13）混合溶劑為展開劑，展開至5cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（體積比為20:10:10:1）的上層溶液為展開劑，展開至10cm，取出，晾干。噴以質量分數3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（2）取小兒腦震寧顆粒5g，研細，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加1ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.5g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為40:10:1）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，質量分數5%香草醛硫酸溶液顯色，105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

實施例9：取實施例1制備的腦震寧顆粒進行方法學驗證。

（1）牡丹皮鑒別的方法學驗證：

供試品溶液的制備：取腦震寧顆粒5g，研細，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml溶解，用水飽和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加1ml甲醇溶解，加入中性氧化鋁0.5g，搖勻，靜置，取上清液，作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：芍藥苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。

陰性對照溶液的制備：按腦震寧顆粒處方比例及工藝制備缺牡丹皮的陰性對照樣品，取陰性對照樣品5g，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

測定法：吸取供試品溶液和對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-甲醇-水（體積比為40:10:1）混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以質量分數5%香草醛硫酸溶液顯色，105℃加熱至斑點清晰。

試驗結果：三批供試品（此處是指根據實施例1的顆粒做了三批供試品溶液，相當于三組平行實驗）色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；而陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不顯示斑點。

結論：該方法專屬性強、重復性好，可用于腦震寧顆粒中牡丹皮的鑒別。

如圖1所示，樣品1為芍藥苷對照品，樣品2~4為三篇供試品，樣品5為牡丹皮陰性溶液。

（2）陳皮鑒別的方法學驗證：

供試品溶液的制備：取腦震寧顆粒5g，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，加入6ml無水乙醇，過濾，濾液蒸干，加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：另取橙皮苷對照品加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。

陰性對照溶液的制備：按腦震寧顆粒處方比例及工藝制備缺陳皮的陰性對照樣品，取陰性對照樣品5g，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

測定法：吸取供試品及對照品溶液各2μl分別點于同一硅膠g薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為100:17:13）混合溶劑為展開劑，展開至5cm處，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20:10:10:1）的上層溶液為展開劑，展開至10cm，取出，晾干。噴以質量分數3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置365nm紫外燈下檢視。

試驗結果：三批供試品（同上）色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；而陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不顯示斑點。

結論：該方法專屬性強、重復性好，可用于腦震寧顆粒中陳皮的鑒別。

如圖2所示，樣品1~3為三批供試品，樣品4為橙皮苷對照品，樣品5為陳皮陰性溶液。