一種檢測氯霉素的SnSe/SWNT修飾電極光致電化學傳感器制備方法及應用與流程

本發明屬于分析化學與光致電化學傳感器領域，具體為一種檢測氯霉素的snse/swnt修飾電極光致電化學傳感器制備方法及應用。另外，本發明還涉及采用所述的光致電化學傳感器測氯霉素的方法。
背景技術：
：氯霉素(chloramphenicol，cap)是一種由委內瑞拉鏈絲菌產生的抗生素類物質，歸于抑菌性廣譜抗生素類，用于治療傷寒及厭氧菌感染類病癥。根據醫學數據，氯霉素在使用過程中會產生比較嚴重的副作用，對人體的造血功能有一定的抑制作用。此外，氯霉素還可能引發貧血，這使氯霉素這種廣譜抗生素類藥物的應用有了一定的局限性。由于氯霉素抑菌普遍廣泛、作用效果好、與其他藥物相比價格相對廉價，所以在我國的使用較為廣泛。為了保障人類的健康以及減少毒副作用的產生，創建準確度高、單一性好、簡捷可行的氯霉素檢驗方法成為分析研究工作者的一大挑戰。近年來，涌現出如微生物學方法、放射免疫法、色譜法和酶免疫分析法等分析方法的氯霉素的檢測方法。其中最常用的方法是微生物學方法，該方法操作起來比較簡單，價格相對廉價，但此方法存在靈敏度低、特異性差等不足之處；放射免疫法具有同位素半衰期短、可能產生放射性污染及儀器設備復雜昂貴等缺點。這些方法各有其優點，能不同程度的滿足對氯霉素的檢測要求，但這些方法各有其缺點。所以必須發展一種靈敏度高，簡單的新型檢測方法。技術實現要素：鑒于現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種檢測氯霉素的snse/swnt修飾電極光致電化學傳感器制備方法及應用，以及提供一種采用所述的光致電化學傳感器測氯霉素的方法。本發明的目的是這樣實現的：用swnt/snse修飾碳糊電極，將dna/aunps/met通過dna與swnt/snse吸附作用固定在修飾電極表面，構建光致電化學傳感器以實現對氯霉素的測定；一種檢測氯霉素的snse/swnt修飾電極光致電化學傳感器制備方法及應用，包括如下步驟：(1)硒化錫制備及剝離a.稱取0.4513g的二氯化錫(sncl2﹒2h2o)與0.1579g固體錫(se)于小燒杯中，用量筒量取5ml～100ml乙二醇倒入燒杯中，于通風櫥中量取2ml～50ml的乙二胺倒入燒杯中，用玻璃棒攪拌一會兒后，用保鮮膜封住小燒杯口后置于電磁攪拌器一段時間后，倒入反應釜中，裝好反應釜蓋，擰緊，放入烘箱(80℃～280℃)中烘，10h后取出得硒化錫；b.剝離：將制備好的硒化錫(snse)溶液與n，n-二甲基甲酰胺(dmf)，按照體積比為0.2:1～2:1混合后置于離心管中超聲4-5h；將超聲后的溶液取出后離心，用無水乙醇洗滌3次，加以等量的去離子水，備用。(2)探針的制備a.納米金(aunps)的制備：用分析天平準確稱取檸檬酸三鈉50mg，將其加入到2ml～250ml去離子水中；用分析天平準確稱取5mg氯金酸(haucl4·4h2o)，將其加入到2ml～250ml去離子水中。將氯金酸溶液加熱至沸騰，攪拌下快速加入0.2ml～5ml檸檬酸三鈉溶液，加熱30min，期間溶液顏色發生以下變化：黃→無→淺紫→紫紅→酒紅。冷卻至室溫，得到納米金，轉移至棕色容量瓶中，置于4℃下保存；b.探針的制備：首先，用分析天平準確稱量0.0060g甲硫氨酸(met)，加入到5ml的離心管中，加0.2ml～5ml去離子水，搖勻。此時配制的為10-2m的甲硫氨酸溶液。將此溶液稀釋1000倍至濃度10-5m備用。然后，另取2ml離心管依次加入aunps、dna、甲硫氨酸溶液，混合搖勻。將其放入搖床輕搖反應20h-22h，使巰基與aunps連接起來。最后15000r，離心30min，得到紅色沉淀后，用水洗滌兩次，即制備好dna/aunps/met探針，置于4℃下避光保存。(3)光致電化學傳感器的構建a.碳糊電極的制備：稱取9g碳粉、3g石蠟混合于研缽中研磨均勻，套袋密封，置于烘箱中(80℃)，加熱30min后取出，研磨均勻，如此反復操作三次直至該混合物混合均勻。將玻璃管截取至10-12cm長度，兩端磨平，將碳粉和石蠟的混合物裝入玻璃管中，裝至1-2cm位置時將銅絲放入，并繼續將碳粉和石蠟的混合物裝入玻璃管直至距頂端約2cm位置，擠壓。將制備的電極底端在平滑的白紙上磨平，備用。b.光致電化學傳感器的構建：將制備好的碳糊電極用二次蒸餾水沖洗干凈，吹干電極表面，備用；取單壁碳納米管溶液與剝離后的硒化錫溶液以體積比1：1超聲混合后的溶液40μl滴涂在碳糊電極表面，得snse/swnt修飾碳糊電極，即snse/swnt/cpe，置于避光處自然晾干。取40μl上述制備好的dna/aunps/met探針滴涂在snse/swnt/cpe表面，置于避光處，自然晾干，從而制得光致電化學傳感器。一種利用上述方法制備的光致電化學傳感器檢測氯霉素含量的方法，當將光致電化學傳感器插入含10-4m的多巴胺的溶液中，進行光致電化學測試，得光致電化學信號i0；當光致電化學傳感器插入含一定濃度的氯霉素時，氯霉素與dna作用，使得探針從電極表面脫落，獲得作用后的光致電化學傳感器，經氯霉素與dna作用后的光致電化學傳感器再經光致電化學檢測，得光致電化學信號i，以i-i0為分析信號，進行氯霉素的測定。由于上述方法制備的光致電化學傳感器可以檢測氯霉素，因此，本發明提供了上述的光致電化學傳感器在檢測氯霉素含量中的應用。與現有技術相比，本發明涉及的光致電化學傳感器具有如下優點和顯著地進步：納米金提供相對大的比表面積用于負載met，使光致電化學信號得以淬滅，使得本發明設計的光致電化學傳感器具有高靈敏度。因此，本發明涉及的一種檢測氯霉素的snse/swnt修飾電極光致電化學傳感器制備方法及應用有良好的發展前景。dna從北京賽百盛基因技術有限公司獲得。它們的核苷酸序列如下：dna,5`-cattctagggtggatcattgtgatcta-sh-3`。當利用其它相應的適體時，這種檢測技術還可以測量其他分析物，因此，這樣一種簡便的技術將會變成一種新的光致電化學傳感器。這種傳感器具有高靈敏度和選擇性的特點。附圖說明圖1本發明的實驗原理圖。圖2透射電鏡圖。(a)swnt；(b)snse/swnt。圖3電極表面不同修飾狀態的電化學阻抗圖。(a)cpe；(b)snse/swnt/cpe；(c)dna/aunps/met/snse/swnt/cpe；(d)dna/aunps/met/snse/swnt/cpe與氯霉素作用后的電化學阻抗圖。圖4光致電化學信號與氯霉素濃度關系圖。圖5電位優化。圖6ph優化。圖7snse/swnt用量優化。具體實施方式下面結合具體實施例進一步說明本發明，但不構成對發明的進一步限制。實施例1電位優化制備的光致化學傳感器可能會因為電極電位的不同來改變自身的電子傳遞系統，從而對光致電化學信號測定產生一定的影響。分別在-0.1v、0.0v、0.1v、0.2v不同工作電位下測定光致電化學信號。圖5為不同電位下的光致電化學信號響應。隨著電極電位的增大，光致電化學信號值呈升高趨勢。但是隨著電位的升高，在電位為0.2v時，峰形較差。在電極電位為0.1v下測定時，光致電化學信號值較大且峰形相對較好便于讀數，所以最終選擇的電極電位為0.1v。實施例2ph優化將電極分別在含10-4m的多巴胺的溶液中，ph為6.0、6.5、7.0、7.5、8.0條件下測定光致電化學信號。圖6為在電位0.1v條件下，在不同ph條件下測定的光致電化學信號響應。可以看出，在ph在6.0-7.0時信號增大，在ph為7.0左右達到最大值，而在7.0-8.0區間則呈現下降趨勢。所以選擇檢測介質的ph為7.0。實施例3snse/swnt用量的優化用移液槍分別準確移取30μl、40μl、50μl、60μl、70μl的snse/swnt混合液滴涂在碳糊電極上，測定光致電化學信號。圖7為snse/swnt不同用量情況下的光致電化學信號。可以看出，在snse/swnt用量為30μl到50μl時信號增大，在snse/swnt用量為50μl到70μl區間則呈現下降趨勢。snse/swnt用量為50μl時光致電化學信號最大。選擇snse/swnt用量為50μl。實施例4方法靈敏度試驗考察了方法測定的靈敏度和線性范圍等分析特性。在優選的試驗條件下，目標物氯霉素的濃度在1.0×10-8m到1.0×10-6m范圍內與光致電化學信號成線性函數關系式。線性函數關系式為：δi＝0.8116c+2.30364，(δi是光致電化學信號差；c是氯霉素的濃度)，線性相關系數r＝0.99587，檢測限是0.3×10-9m(3σ)。實施例5實際樣品中氯霉素含量的測定使用建立的方法測定了從市場購買的新鮮水果、魚和豬肉中氯霉素的含量。測得的氯霉素的濃度如表1所示。并通過回收實驗考察了方法的準確度與精密度，回收率在98.1％-101.6％之間。表1實際樣品中氯霉素含量的測定結果編號含量標準加入量a測得量a相對標準偏差回收率129.8130.0059.974.3％100.5％214.0620.0034.123.8％100.3％311.9910.0021.803.7％98.1％411.410.0021.563.2％101.6％a單位：nm。sequencelisting<110>青島科技大學<120>一種檢測氯霉素的snse/swnt修飾電極光致電化學傳感器制備方法及應用<160>1<170>patentinversion3.3<210>1<211>26<212>dna<213>人工序列<400>1cattctagggtggatcattgtgatcta26當前第1頁12